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1、第2章 植物组织培养技术第二节 植物组织培养概述一、授课章节第二节 植物组组织培养养概述。二、学时安安排2学时。三、教学目目标1掌握植植物组织织培养的的含义。2了解植植物组织织培养的的类型划划分。3理解植植物组织织培养的的应用原原理。4掌握植植物组织织培养的的特点和和应用。四、教学重重点、难难点分析析重点：植物组织培培养的含含义、特特点和应应用。难点：植物组织培培养的应应用原理理。五、教具电化教学设设备，植植物组织织培养试试管苗。六、教学方方法讲授法，多多媒体课课件。七、教学过过程.导入前面我们学学习了有有关植物物育种的的一些知知识，今今天，请请看我给给同学们们看一样样东西(教师拿拿出试管管苗
2、)，问问同学们们这是什什么呢？这就是是我们要要学的植植物组织织培养。II.新课课一、植物组组织培养养的含义义植物组织培培养是指指在无菌菌条件下下，将离离体的植植物器官官、组织织、细胞胞以及原原生质体体培养在在人工培培养基上上，给予予适宜的的培养条条件，使使其长成成完整植植株的过过程。由由于培养养物脱离离母株在在试管内内培养，故故又称离离体培养养、试管管培养。二、植物组组织培养养的类型型植物组织培培养由于于分类依依据不同同可划分分为不同同的类型型。植株培养：对幼小植株的培养。植物组织培养根据培养对象器官培养：对根、茎、叶、花、果实、种子等离体器官的培养。组织培养：对植物体的各部分组织进行的培养。
3、细胞培养：对单个细胞或较小细胞团的培养。原生质体培养：对除去细胞壁的原生质体的培养。根据培养方式固体培养：加入琼脂等凝固剂，使培养基固体化，在此培养基上的培养。液体培养：培养基中不加凝固剂，培养基为液体，在此培养基上的培养。根据培养过程初代培养：将外植体进行的第一次培养。继代培养：将培养一段时间的培养物转接到新鲜培养基继续培养的过程。光培养：培养过程中需要光照的培养。暗培养：培养过程中不需要光照的培养。根据培养条件三、植物组组织培养养的应用用原理（一）植物物细胞全全能性植物细胞全全能性，是是指植物物体上每每个具有有完整细细胞核的的植物细细胞，都都具有该该植物体体的全部部遗传信信息和产产生完整整
4、植株的的能力。植植物的体体细胞一一旦脱离离所在器器官或组组织的束束缚成为为离体状状态时，在在一定的的营养、激激素和外外界条件件作用下下，就可可能表现现出全能能性，而而生长发发育成为为完整的的植株。（二）细胞胞的分化化和形态态建成（三）植物物的再生生功能四、植物组组织培养养的特点点（一）研究究材料来来源单一一，无性性系遗传传信息相相同（二）试验验经济，管管理方便便，工作作效率高高（三）培养养条件人人为控制制，可周周年连续续进行试试验或生生产（四）生长长快，周周期短，繁繁殖率高高五、植物组组织培养养的应用用（一）优良良品种的的快速繁繁殖（二）脱毒毒及脱毒毒苗的再再繁育（三）植物物新品种种的培育育（
5、四）种质质资源的的保存和和交换（五）有用用次生代代谢产物物的生产产III.作作业1.简述植植物组织织培养的的概念和和培养类类型。2.植物组组织培养养技术有有哪些特特点？3.植物组组织培养养在生产产上有哪哪些方面面的应用？ 4.通过学学习，你你对植物物组织培培养技术术是怎样样理解的的？第二节 植物组组织培养养厂房的的设计与与构建一、授课章章节第二节 植物组组织培养养厂房的的设计与与构建。二、学时安安排2学时。三、教学目目标1了解组组培工厂厂的基本本结构、各各部分结结构的具具体功能能。2理解组组培工厂厂的设计计原则与与总体要要求，能能够根据据需要和和实际情情况科学学设计组组培工厂厂。3掌握厂厂房的
6、基基本组成成，仪器器设备配配备与设设计要求求。4了解常常用仪器器与用具具的使用用方法。四、教学重重点、难难点分析析重点：组培工厂的的设计原原则与总总体要求求。难点：根据需要和和实际情情况科学学设计组组培工厂厂。五、教具电化教学设设备、组组培工厂厂现场或或实验室室。六、教学方方法讲授法，演演示法。七、教学过过程.导入复习：植物物组织培培养的概概念，类类型及应应用。提问：细胞胞全能性性的概念念。上次课我们们学习了了植物组组织培养养的基本本知识，那那么从事事植物组组织培养养的生产产需要一一些基本本的仪器器和设备备，今天天我们来来学习植植物组织织培养的的厂房的的设计与与构建。II.新课课一、植物组组织
7、培养养厂房的的设计（一）设计计原则1.环境清清洁、安安静、远远离污染染源。2.按照工工作的目目的和规规模决定定厂房的的设计。3.按照自自然工作作程序先先后合理理布局，避避免生产产环节倒倒排。4.经济实实用，节节能安全全。（二）具体体要求1.厂房选选址时应应选择周周围安静静、阳光光充足、无无高大建建筑物遮遮挡的环环境；最最好在常常年主风风向的上上风方向向，尽量量减少污污染；要要求交通通便利，便便于产品品的运送送。2.厂房各各车间的的大小和和比例相相对合理理，车间间的设计计和设备备的配置置、摆放放与其功功能相适适应。3.厂房必必须满足足3个基基本的需需要：生生产准备备（器皿皿洗涤与与存放、培培养基
8、制制备、各各种器具具的灭菌菌）、无无菌操作作和控制制培养。4.厂房的的建筑与与装修材材料要耐耐腐蚀，便便于消毒毒和清洁洁。（三）厂房房基本组组成厂房根据结结构和应应用范围围一般设设计为药药品配制制间、洗洗涤间、培养基基制作间间、缓冲冲间、无无菌操作作间、试试管苗培培养间、试试管苗驯驯化移植植间。1.药品配配制间（1）任务务：主要要用于化化学药品品的储藏藏、称量量和溶液液的配制制。（2）设计计要求：干燥、通通风、无无直射光光线。房房间内设设立工作作台，工工作台最最好用抗抗盐碱，耐耐腐蚀的的台面，要要牢固、平平稳，具具有较好好的抗震震性能。注注意磁力力搅拌器器与电子子天平要要分开台台面放置置。（3
9、）仪器器与用具具配置：大型工工作台、药药品柜、普普通冰箱箱、电子子分析天天平、托托盘天平平、磁力力搅拌器器、容量量瓶、烧烧杯、量量筒等。2.洗涤间间（1）任务务：洗涤涤室用于于完成玻玻璃器皿皿等仪器器的清洗洗、干燥燥和贮存存；外植植体的预预处理与与清洗；试管苗苗的出瓶、清清洗与整整理等工作。（2）设计计要求：房间内内应宽敞敞明亮，方方便多人人同时操操作；配配备大型型水槽，上上下水道道要畅通通；地面面、天花花板及墙墙壁应耐耐湿和便便于清洁洁；应有有晾干台台，用于于放置洗洗涤后的的培养器器皿。（3）仪器器与用具具配置：水槽、晾晾干台、周周转箱、烘烘箱等。3.培养基基制作间间（1）任务务：主要要负责
10、培培养基的的配制、分分装、包包扎和高高压灭菌菌等工作作。（2）设计计要求：房间宽宽敞明亮亮、通风风良好，方方便多人人同时操操作；目目前灭菌菌大多采采用电加加温，墙墙体建筑筑时要预预先设计计电路线线，确保保用电线路路和灭菌菌锅的用用电安全全。在灭灭菌锅上上方的墙墙壁设置置换气窗窗，利于于通风排排气。地地面、墙墙壁应用用耐湿材材料铺设设，防水水、防潮潮、防腐腐蚀。（3）仪器器与用具具配置：托盘天天平、酸酸度计、工工作台、高高压灭菌菌锅、周周转箱、储储物柜等等。4.缓冲间间（1）任务务：防止止工作人人员进出出时带进进杂菌。（2）设计计要求：面积一一般23m2为宜；缓冲间间应安装装紫外灯灯，用以以照射
11、灭灭菌；配配备鞋柜柜、衣柜柜、拖鞋鞋，用于于工作人人员进入入无菌操操作室前前在此更更衣换鞋鞋，（3）仪器器与用具具配置：紫外灯灯、鞋柜柜、衣柜柜、工作作服等。5.无菌操操作间(接种间间)（1）任务务：进行行植物材材料的分分离接种种及培养养物转移移。（2）设计计要求：接种室室宜小不不宜大，一一般78m2。地面、天天花板及及四壁要要求尽可可能密闭闭光滑，易易于清洁洁和消毒毒。配置推推拉门，以以减少开开关门时时的空气气扰动。房房间密闭闭，干爽爽安静，清清洁明亮亮。在适当当位置吊吊装12盏紫紫外灯，用用以照射射灭菌。最好安安装一小小型空调调，使室室温可控控，这样样可使门门窗紧闭闭，减少少与外界界空气对
12、对流。（3）仪器器与用具具配置：超净工工作台、紫紫外灯、空空调机、医医用小推推车、接接种器具具消毒器器、酒精精灯、接接种工具具、搁物物架等。6.试管苗苗培养间间（1）任务务：接种种材料的的培养生生长。（2）设计计要求：培养间的的大小可可根据生生产规模模和培养养架的大大小、数数目及其其它附属设设备而定定。其设设计以充充分利用用空间和和节省能能源为原原则。高高度比培培养架略略高为宜宜，周围围墙壁和和天花板板要求光滑滑平坦、有绝热防火的性能。能够控制光照和温度，并保持相对的无菌环境；适当位置安装紫外灯进行照射灭菌。（3）仪器器与用具具配置：培养架架、空调调机、光光照时控控器、温温度计、摇床等。7.试
13、管苗苗驯化移移植间（1）任务务：进行行试管苗苗的驯化化和移植植。（2）设计计要求：通常在在日光温温室内进进行，其其面积大大小根据据生产规规模而定定。要求求能够控控温调湿湿、控光光通风、控控菌防虫虫。（3）仪器器与用具具配置：移栽容容器、弥弥雾装置置、遮阳阳网、移移栽基质质等。二、基本仪仪器设备备和用具具（一）灭菌菌设备1.湿热灭灭菌设备备（高压压蒸汽灭灭菌锅）：用于培养基、玻璃器皿以及其它可高温灭菌用品的灭菌，根据规模大小有小型手提式、中型立式、大型卧式等不同规格；根据控制方式分为手动控制、半自动控制和全自动控制等不同类型。2.过滤灭灭菌设备备（防细细菌滤膜膜）：防细菌菌滤膜的的网孔直直径为0
14、0.455m以下下，当溶溶液通过过滤膜后后，细菌菌的细胞胞和真菌菌的孢子子等因大大于滤膜膜直径而而被阻，在在需要过过滤灭菌菌的液体体量大时时，常使使用抽滤滤装置；液量小小时，可可用注射射器。主主要用于于赤霉素素、玉米米素、脱脱落酸等等不耐热热物质的的灭菌。3.干热灭灭菌设备备：利用用高温烘烘烤或灼灼烧的方方法进行行灭菌，包括烘箱（器皿和器械的灭菌）、酒精灯（用于接种工具的灭菌）、接种器械灭菌器等。4.其它灭灭菌设备备：利用用紫外光光波、超超声波、臭臭氧等杀杀菌，主主要用于于对空气气和物体体表面进进行消毒毒。常用用设备包包括紫外外灯、超超声波清清洗器、臭臭氧发生生器等。（二）接种种设备与与用具1
15、.超净工工作台：超净工工作台是是植物组组织培养养最常用用、最普普及的无无菌操作作装置。根根据风幕幕形成的的方式可可分为水水平风和和垂直风风两种；根据使使用方式式分为单单人单面面、双人人单面、双双人双面面等。2.接种工工具：外外植体接接种或培培养物继继代转接接时使用用的各种种工具。常常用的有有：尖头镊：用用于分离离植物组组织等；枪型镊：用用于夹取取植物器器官继代代转接和和外植体体接种；解剖剪：用用于幼嫩嫩组织、细细胞团等等剪取；弯头剪：用用于转接接、剪取取试管苗苗茎段等等；解剖刀：用用于外植植体或培培养物切切割；接种针：用用于茎尖尖剥离和和愈伤组组织转移移；切割盘：用用于原球球茎、愈愈伤组织织、
16、植物物器官等等切割分分离。3.显微镜镜：包括括双目体体视显微微镜(解解剖镜)、生物物显微镜镜、倒置置显微镜镜和电子子显微镜镜，用于于剥离茎茎尖和进进行培养养物的观观察、分分析、拍拍照等。（三）培养养设备与与用具1.培养架架：试管管苗在培培养间里里培养时时通常摆摆放在培培养架上上。培养养架大多多由金属属制成，一一般设558层层，最低低一层离离地高约约20ccm，其其他每层层间隔330cmm左右。培培养架长长度根据据日光灯灯的长度度而设计计，如采采用400W日光光灯，则则长1.3m，宽宽度一般般为600cm。2.恒温振振荡器：用于液液体培养养时改善善培养过过程的氧氧气供应应状况。3.光照培培养箱：
17、对于一一些对环环境条件件要求特特别严格格的培养养物，可可培养在在能自动调调控温度度、湿度度、光照照等的智智能光照照培养箱箱里。4.培养器器皿：根根据培养养目的和和要求不不同，可可选用不不同类型型和规格格的培养养容器。（1）三角角瓶：主主要用于于外植体体静置培培养、振振荡培养养或试管管苗继代代培养。规规格有550mLL，l000mLL，1550mLL，2550mLL，5000mLL等，一一般使用用l500mL三角角瓶。优优点：其其培养面面积大，利利于组织织生长；透光度度好；由由于瓶口口较小，不不易污染染。（2）试管管：主要要用于茎茎尖培养养、液体体培养。试试管要求求口径大大，长度度稍短、以以2c
18、mm15ccm、2.55cm15ccm、3cmm15ccm 为为宜。优优点：占占空间少少，单位位面积容容纳的数数量多。（3）果酱酱瓶：主主要用于于继代和和生根培培养。优优点：在在工厂化化大批量量生产时时使用，价价格低廉廉，成本本低；口口径较大大，便于于操作。缺缺点：污污染率较较高；透透光性稍稍差。（4）塑料料瓶：主主要用于于兰科植植物的培培养。有有1000mL、1150mmL、2200mmL、2250mmL的规规格。优优点：密密封好、透透气性差差、瓶内内湿度大大；质轻轻，便于于操作，不不易破损损，污染染率低；长方盒盒形的培培养株数数多，且且叠摞起起来节约约空间。缺缺点：可可重复利利用性较较差。
19、（四）称量量设备与与用具1.天平：用于进进行琼脂脂、蔗糖糖和各种种药品的的称量，需需要有称称量微量量元素和和植物激激素等的的分析天天平；称称量大量量元素、蔗蔗糖和琼琼脂等的的托盘天天平等不不同精度度的天平平。2.烧杯：用于配配制培养养基母液液时溶解解各种化化合物，规规格有550110000mL不等等。3.量筒：用于量量取不同同体积的的液体，规规格有550110000mL不等等。4.试剂瓶瓶：用于于贮存不不同容量量的溶液液，规格格有50010000mmL不等等。5.移液管管：用于于吸取各各种用量量较少的的母液，规规格有00.110mmL不等等。6.容量瓶瓶：用于于配制培培养基母母液时进进行定容容
20、，规格格有50010000mmL不等等。（五）环境境控制设设备与用用具1.空调机机：自动动控制植植物组织织培养厂厂房的温温度，为为培养物物提供最最适宜的的温度条条件。2.冰箱：用于母母液和某某些试剂剂的贮存存及培养养材料的的保鲜或或与处理理等。3.光照时时控器：用于自自动控制制培养间间的光照照时间。（六）其它它设备与与用具1.磁力搅搅拌器：磁力搅搅拌器用用于加速速搅拌难难溶的物物质，如如各种化化学物质质等。磁磁力搅拌拌器还可可加热，加快物质的溶解。2.蒸馏水水发生器器或纯水水机：用用于制备备配制母母液和培培养基的的蒸馏水水或去离离子水。3.药品柜柜：用于于存放各各种化学学药品。4.加热设设备：
21、制制备固体体培养基基时需加加热使固固化剂溶溶化，因因此需要要加热设设备如液液化气灶灶、电炉炉、恒温温水浴锅锅等。5.pH计计：用于于精确测测量和调调节培养养基的ppH，大大规模生生产中一一般用精精密pHH试纸代代替。III.作作业1.植物组组织培养养厂房的的设计原原则和要要求有哪哪些？2.植物组组织培养养的工艺艺流程是是怎样的的？3.组建一一个植物物组织培培养生产产车间应应包括哪哪几部分分，各部部分的设设计要求求以及主主要功能能是什么么？4.植物组组织培养养需要哪哪些基本本设备，各各有何作作用？第三节 植物组组织培养养操作技技术（11）一、授课章章节第三节 植物组组织培养养操作技技术（11）。
22、二、学时安安排2学时。三、教学目目标1掌握组组培的一一般工作作程序。2掌握不不同类型型培养器器皿和用用具的洗洗涤技术术。3了解常常用消毒毒灭菌方方法的原原理，掌掌握其操操作技术术，能根根据物品品种类正正确选用用消毒灭灭菌方法法。四、教学重重点、难难点分析析重点：常用的消毒毒灭菌技技术。难点：灭菌和消毒毒的区别别及无菌菌意识的的树立。五、教具电化教学设设备。六、教学方方法讲授法，演演示法。七、教学过过程.导入提问：植物物组织培培养实验验室的基基本构成成。本次课主要要介绍的的是植物物组织培培养洗涤涤和消毒毒灭菌技技术。II.新课课一、洗涤技技术植物组织培培养除了了要对培培养材料料和接种种用具进进行
23、严格格消毒外外，各种种用具更更要求洗洗涤清洁洁，因为为各种灭灭菌方法法的有效效作用时时间都是是以材料料或用具具清洁为为前提的的。（一）洗涤涤液1.洗衣粉粉、洗洁洁精洗涤涤液适用用于玻璃璃器皿和和金属类类器具的的洗涤。2.铬酸洗洗涤液 由重重铬酸钾钾和浓硫硫酸混合合而成，属强氧化剂，对无机离子、灰尘效果好，对油污无效。铬酸洗涤液液的配制制：称取取重铬酸酸钾500g，加加入1LL蒸馏水，加加热搅拌拌至完全全溶解；冷冷却后注注入900mL浓硫硫酸，混混合均匀匀即可。刚刚配好的的洗液是是棕红色色，反复复使用至至变成青青褐色则则失效。【注意事项项】（11）配制制时重铬铬酸钾溶溶液一定定要冷却却后才能能加
24、浓硫硫酸，且且只能把把浓硫酸酸缓慢加加入重铬铬酸钾溶溶液中，决决不能将将重铬酸酸钾溶液液或蒸馏馏水倒入入浓硫酸酸中。（22）由于于铬酸洗洗涤液具具有极强强的氧化化能力和和腐蚀作作用，故故不要用用手直接接接触洗洗涤液。（二）各类类器皿和和用具的的洗涤方方法1.新的玻玻璃器皿皿：使用用前先用用1%稀稀盐酸浸浸泡122244h用毛刷蘸蘸洗衣粉粉水刷洗干净流水冲洗洗344次最后用用蒸馏水水冲淋11遍晾干（或烘烘干）后后备用。2.已用过过的培养养器皿：除去容容器内的的残渣自来水水冲洗浸泡在在洗衣粉粉水中115330miin用毛刷刷刷洗干干净流水冲冲洗34次最后用用蒸馏水水冲淋11遍晾干（或或烘干）后后备
25、用。3.已被霉霉菌等杂杂菌污染染的器皿皿：1221高温高高压蒸汽汽灭菌330miin趁热倒倒去残渣渣自来水水冲洗浸泡在在洗衣粉粉水中115330miin用毛刷刷刷洗干干净流水冲冲洗34次最后用用蒸馏水水冲淋11遍晾干（或或烘干）后后备用。4.移液管管、量筒筒等量器器：铬酸洗涤涤液中浸浸泡2hh以上取出后在在流水中中冲洗330miin蒸馏水水冲淋11次晾干（或烘烘干）后后备用。5.载玻片片和盖玻玻片：洗洗涤液中中浸泡数数小时水洗绸布擦擦干放在995%的的洒精中中备用。6.解剖刀刀、镊子子、剪刀刀等：新新购置金金属器皿皿因其上上有润滑滑油或防防锈油，用用蘸有四四氯化碳碳的棉布布擦去油油脂，再再用湿
26、布布擦净，干干燥备用用。每次次使用后后先用洗洗衣粉水水刷洗，再再用酒精精擦拭。二、灭菌与与消毒技技术（一）灭菌菌与消毒毒的区别别1有菌和和无菌的的范畴有菌的范畴畴是：凡凡是暴露露在空气气中的物物体，接接触自然然水源的的物体，至至少它的的表面都都是有菌菌的。无菌的范畴畴是：经经高温灼灼烧或一一定时间间蒸煮过过后的物物体，经经其他理理化灭菌菌方法处处理后的的物体一一般可认认为是无无菌的。2.灭菌与与消毒的的区别灭菌是指用用物理或或化学方方法杀死死物体表表面和孔孔隙内一一切微生生物或生生物体。消毒是指杀杀死、消消除或充充分抑制制部分微微生物，使使之不再再发生危危害作用用。由灭菌和消消毒的含含义可以以
27、看出，二二者的主主要区别别是：灭灭菌是把把所有有有生命的的物质全全部杀死死；而消消毒主要要杀死或或抑制物物体表面面的微生生物，但但芽孢、厚厚垣孢子子一般不不会死亡亡。（二）常用用的消毒毒灭菌方方法（三）消毒毒灭菌技技术1.环境消消毒：方法主主要有空空气过滤滤灭菌、紫紫外线照照射消毒毒、喷雾雾消毒和和熏蒸消消毒等。空气过滤滤灭菌：成规模模的植物物组织培培养车间间可采用用空气过过滤系统统对整个个环境进进行空气气过滤灭灭菌，这这种方法法投入较较高，操操作要求求比较严严格，一一般较少少采用。组组织培养养中普遍遍采用的的是对无无菌操作作的微环环境进行行空气过过滤灭菌菌，如超超净工作作台的局局部无菌菌环境
28、。紫外线照照射消毒毒：利用用紫外光光波照射射灭菌，细细菌吸收收紫外线线后，蛋蛋白质和和核酸发发生结构构变化，引引起细菌菌的染色色体变异异，造成成死亡。缓缓冲间、接种间、培养间等均可采用紫外线照射消毒，一般照射2030min。喷雾消毒毒：利用用70%75%的酒精精或0.2%的的新洁尔尔灭对环环境进行行喷雾，既既可以起起到直接接杀死环环境中微微生物的的作用，又又可以使使飘浮的的尘埃降降落，防防止尘埃埃上附着着的杂菌菌污染培培养基和和培养材材料。熏蒸消毒毒：利用用加热焚焚烧、氧氧化等方方法，使使化学药药剂变为为气体状状态扩散散到空气气中，以以杀死空空气和物物体表面面的微生生物。常常用熏蒸蒸剂是甲甲醛
29、，熏熏蒸时，按2mLm3用量，将甲醛置于广口容器中，加0.2g/m3高锰酸钾氧化挥发。熏蒸时，房间可预先喷湿，关闭紧密，24h后打开门窗通风。2.用具的的消毒灭灭菌：根根据用具具种类不不同分别别采用干干热灭菌菌、湿热热灭菌、浸浸泡消毒毒、擦拭拭消毒等等方法。干热灭菌菌：利用用烘箱进进行烘烤烤灭菌的的方法，适适用于各各种玻璃璃器皿和和器械的的灭菌消消毒。方方法是将将清洗后后的玻璃璃器皿和和器械妥妥为包扎扎，放入入箱内，将将箱温控控制在11501700，烘烤1120mmin，即即可达到到灭菌效效果。在在干热条条件下，细细菌的营营养细胞胞抗热性性大为提提高，故故能源消消耗大，又又浪费时时间，所所以目
30、前前多采用用湿热灭灭菌代替替，接种种工具也也可采用用消毒器器烘烤和和酒精灯灯外焰灼灼烧的方方法消毒毒。湿热灭菌菌：适用用于培养养基、玻玻璃器皿皿、棉塞塞、布制制品及金金属用具具等的灭灭菌，一一般灭菌菌掌握在在0.110.115MPPa压力力下20030miin。浸泡消毒毒：在无无菌操作作时，把把镊子、剪剪子、解解剖刀等等浸入770%75%的酒精精中浸泡泡，使用用之前取取出在酒酒精灯外外焰上灼灼烧，待待冷却后后使用。擦拭消毒毒：接种种用具及及超净工工作台表表面等使使用前可可用700%酒精精或0.100.2%新洁尔尔灭溶液液进行擦擦拭消毒毒。3.培养基基灭菌：培养基基灭菌一一般采用用湿热灭灭菌，特
31、特殊情况况下采用用过滤无无菌。湿热灭菌菌：采用用高压蒸蒸汽灭菌菌锅灭菌菌。过滤灭菌菌：主要要针对一一些不能能处于高高温高压压环境的的物质，如GA3、IAAA、ABAA（脱落落酸）、ZZT（玉玉米素）、部部分维生生素、多多数抗生生素和酶酶。过滤滤灭菌的的原理是是细菌滤滤膜的网网孔直径径为0.45m以下下，当溶液液通过滤滤膜后，细细菌的细细胞和真真菌的孢孢子（直直径1m以上上）等因因大于滤滤膜网孔孔直径而而被阻。4.外植体体消毒：从外界界或室内内选取的的植物材材料，都都不同程程度地带带有各种种微生物物，因此，植植物材料料必须经经严格的的表面消消毒处理理。接种的的植物材材料叫做做外植体体。外植植体的
32、消消毒要求求比较严严格，既既要能有有效杀灭灭微生物物，又要要保证植植物组织织尽量少少受伤害害。外植植体一般般采用浸浸泡消毒毒的方法法，具体体方法在在以后课课程中讲讲授。III.作作业1.不同的的培养器器皿怎样样选择与与洗涤？2.植物组组织培养养环境如如何进行行消毒灭灭菌？3过滤灭灭菌的技技术原理理？第三节 植物组组织培养养操作技技术（22）一、授课章章节第三节 植物组组织培养养操作技技术（22）。二、学时安安排2学时。三、教学目目标1掌握培培养基的的作用。2掌握培培养基中中生长调调控物质质的作用用。3了解培培养基的的类型。四、教学重重点、难难点分析析重点：培养基的基基本成分分。难点：培养基中生
33、生长调节节物质的的作用。五、教具电化教学设设备。六、教学方方法讲授法，演演示法。七、教学过过程.导入培养基是进进行植物物组织培培养的基基质，进进行植物物组织培培养必须须掌握培培养基的的基本知知识，今今天我们们就学习习培养基基的种类类和基本本成分。II.新课课三、培养基基制备技技术（一）配制制培养基基的目的的配制培养基基的目的的是人为为提供离离体培养养材料的的营养源源。配制制的不同同培养基基，是为为满足不不同类型型植物材料料对营养养的不同同需要。没没有一种种培养基基能够适适合一切切类型的的植物组组织或器器官，在在建立一一项新的的培养系系统时，首首先必须须找到一一种合适适的培养养基，培培养才有有可
34、能成成功。（二）培养养基的种种类1.培养基基的种类类划分培 养 基 种 类固体培养基：在液体培养基中加入一定量凝固剂，使其成为固体状态。根据形态液体培养基：培养基中没有凝固剂为液体状态。根据培养阶段根据培养进程根据营养水平初代培养基：初代培养阶段所用的培养基。继代培养基：继代培养阶段所用的培养基。完全培养基：在基本培养基中加入适宜的植物激素和有机附加物的培养基。基本培养基：只含有无机盐、蔗糖、维生素和水等最基本成分的合成培养基。如Ms、White、Nitsch、N6等培养基。诱导培养基：初代培养时诱导外植体生长与脱分化的培养基。增殖培养基：继代培养中促进培养物快速增殖的培养基，也称扩繁培养基。
35、生根培养基：诱导试管苗生根的培养基。2.常用培培养基的的配方和和特点目目前已公公开报道道的基本本培养基基有许多多种类，各各有不同同的特点点和适用用范围，在在植物组组织培养养生产中中应根据据不同的的植物种种类和培培养部位位及不同同的培养养目的选选用不同同的培养养基。常用的培养养基配方方：表1 常常用培养养基配方方含量（mg/L）MS（19962）B5（19968）Whitee（19433）SH（19722）Knudsson C（19466）VW（19499）N6（19744）(NH4)2S04NH4N003KN03Ca(N003)24H20CaCl222H20Ca3(PPO4)21650l900
36、440134250015080200250020050010005005252004632830166MgS0447H20KH2POO4NaH2PP04H20Na2SOO4Na2EEDTAA37017037.325015037.3720172004001525025025025018540037.3FeSO447H20Fe2(SSO4)3KClFe2(CC4H4O6)327.827.82.56520252827.8NH4H22PO4MnSO44H20MnS0444H20ZnSO447H20H3B033KINa2Moo042H20MoO3CuSO445H20CoCl226H2022.38.66.
37、20.830.250.02550.0255102.03.00.750.250.02550.0255531.50.750.00110.01300101.05.01.00.10.20.17.57.54.43.81.60.8盐酸硫胺素素VBl烟酸盐酸吡哆醇醇VB6肌醇甘氨酸0.10.50.51002.0101.01.01000.10.30.135.05.05.0100010.50.52蔗糖pH3000005.82000005.52000005.63000005.82000005.82000005.55000005.8表2 常常用基本本培养基基的特点点基本培养基基种类设计由来特点适用范围MS1962年
38、年由Muurasshigge和SSkooog为培培养烟草草细胞而而设计无机盐和离离子浓度度较高，为为较稳定定的平衡衡溶液；它的硝硝酸盐和和铵盐含含量较其其他培养养基为高高，比例例也比较较合适，不不需要添添加更多多的有机机附加物物。广泛地用于于植物的的器官、花花药、细细胞和原原生质体体培养B51968年年由Gaamboorg等等为培养养大豆根根细胞而而设计除含有较高高的钾盐盐外，还还含有较较低的氨氨态氮和和较高的的盐酸硫硫胺素适合双子叶叶植物，尤尤其木本本植物的的培养Whitee1943年年由Whhitee为培养养番茄根根尖而设设计无机盐数量量较低，提提高了MMgSOO4的浓度度适于生根培培养S
39、H1972年年由Scchennk和Hiddebrranddt设计计盐分浓度较较高，铵铵态氮含含量较低低，盐酸酸硫胺素素和硝酸酸钾含量量较高在不少单子子叶和双双子叶植植物的组组培中应应用效果果较好Knudsson C1922年年由Knnudsson为为兰科种种子培养养而设计计，后经经多次改改良成分简单，不不能满足足大多数数植物组组织细胞胞的生长长发育所所需的营营养物质质适用于兰科科植物种种子培养养和萌发发VWVacinn 和Wennt 在在19449年设设计培养基的总总离子强强度稍低低些，磷磷以磷酸酸钙的形形式供给给适用于气生生兰的组组培N61974年年朱至清清等为水水稻等禾禾谷类作作物花药药培
40、养而而设计成分较简单单，KNN03和(NHH4)2S04含量高高适用于单子子叶植物物花药培培养，广广泛应用用于小麦麦、水稻稻及其他他植物的的花药培培养（三）培养养基的组组成培养基主要要有水、无无机盐、有有机物、植植物生长长调节物物质、培培养基的的支持材材料五大大类组成成。1.水水是是植物原原生质体体的组成成成分，也也是一切切代谢过过程的介介质和溶溶媒。它它是生命命活动过过程中不不可缺少少的物质质。配制制培养基基母液时时要用蒸蒸馏水，以以确保母液液及培养养基成分分的精确确性，防防止贮藏藏过程发发霉变质质，大规规模生产产时可用用自来水水。但在在少量研研究上尽尽量用蒸蒸馏水，以以防成分分的变化化引起
41、不不良效果果。2.无机元元素(1)大量量元素指指浓度大大于0.5mmmolL的元元素，有有N，PP，K，CCa，MMg，SS等。常常由KNN03、NH4NO3、KH2P04、NaHH2P04、KCll、MgSS047HH20、CaCCl22HH20等化合合物来提提供。(2)微量量元素指指浓度小于于0.55mmoolLL的元素素，Fee，B，MMn，CCu，MMo，CCo等。铁是一些氧氧化酶、细细胞色素素氧化酶酶、过氧氧化氢酶酶等的组组成成分分。同时时，它又又是叶绿绿素形成成必要的的。培养养基中的的铁对胚胚的形成成、芽的的分化和和幼苗转转绿有促促进作用用。在制制作培养养基时不不用Fee2(S00
42、4)3和FeCCl3(因其其pH在在5.22以上，易易形成FFe(OOH)33的不溶溶性沉淀淀)，而而用FeeS0447HH20和Na2-EDDTA结结合成螯螯合物使使用。BB，Mnn，Znn，Cuu，Moo，Coo等，也也是植物物组织培培养中不不可缺少少的元素素，缺少少这些物物质会导导致生长长发育异异常。3.有机化化合物(1)糖类类：这类类有机物物的作用用一是培养养物赖以以生长的的碳源；二是使使培养基基维持一一定的渗渗透压。种类：常常用的有有蔗糖、葡葡萄糖、果果糖，麦麦芽糖、半半乳糖、甘甘露糖等等在组织织培养中中也有应应用。使用浓度度：一般般在23。在大规模模生产时时，可用用食用的的绵白糖糖
43、代替。（2）维生生素类：这类化化合物在在植物细细胞中主要以以各种辅辅酶的形形式参与与多种代代谢活动动，对生生长、分分化等有有很好的的促进作作用。种类：硫硫胺素(维生素素B1)、吡吡哆醇(维生素素B6)、烟烟酸(维维生素BB3，又称称维生素素PP)、泛酸酸(维生生素B55)、生生物素(维生素素H)、钴钴胺素(维生素素B122)、叶叶酸(维维生素BB11）等等。使用浓度度：0.111.0 mg/L(3)肌醇醇(环己己六醇)：作用：在在糖类的的相互转转化中起起重要作作用；参参与细胞胞壁和细细胞膜的的构建；能促进进愈伤组组织的生生长以及及胚状体体和芽的的形成；对组织织和细胞胞的繁殖殖、分化化有促进进作
44、用。使用浓度度：一般般为1OOO mmgLL。(4)氨基基酸：作用：是是很好的的有机氮氮源，可可被细胞胞直接吸吸收利用用。常用种类类：甘氨氨酸、精精氨酸、谷谷氨酸、谷谷酰胺、天天冬氨酸酸、天冬冬酰胺、丙丙氨酸等等。有时时应用水水解乳蛋蛋白（LLH）或或水解酪酪蛋白（CCH），但但由于它它们营养养丰富，极极易引起起污染。如如在培养养中无特特别需要要，以不不用为宜宜。(5)天然然复合物物：其成分分比较复复杂，大大多含氨氨基酸、激激素、酶酶等一些些复杂化化合物。它它对细胞胞和组织织的增殖殖与分化化有明显显的促进进作用，但但对器官官的分化化作用不不明显。它它的成分分大多不不清楚，所所以一般般尽量不不使
45、用。椰乳 是是椰子的的液体胚胚乳。它它是使用用最多、效效果最大大的一种种天然复复合物，一般使使用浓度度在10020。它在在愈伤组组织和细细胞培养养中有促促进作用用。在马马铃薯茎茎尖分生生组织和和草莓微微茎尖培培养中起起明显的的促进作作用，但但茎尖组组织的大大小若超超过1mm时，椰椰乳就不不发生作作用。香蕉 用用量为11502000g/LL。主要要在兰花花的组织织培养中中应用，对对原球茎茎增殖有有明显促促进效果果，并有利利于壮苗苗与生根根。马铃薯 去掉皮皮和芽后后，加水水煮300minn，经过过过滤，取取其滤液液使用。用用量为11502000gL。添添加后可可得到健健壮的植植株。4.植物生生长调节节物质 植物物生长调调节物质质是培养养基的关关键性物质，对对植物组组织培养养起着决决定性作作用，控控制着培培养物的的脱