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1、河南科技大学医学院河南科技大学医学院生物化学与分子生物学教研室生物化学与分子生物学教研室血清总蛋白浓度测定(双缩脲法双缩脲法双缩脲法双缩脲法)2【目的】【目的目的目的目的】1.1.掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理。掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理。掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理。掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理。2.2.熟悉操作过程及其临床意义。熟悉操作过程及其临床意义。熟悉操作过程及其临床意义。熟悉操作过程及其临床意义。3一、原 理1.双缩脲反应1.1.双缩脲反应双缩脲反应双缩脲反应双缩脲反应在在在在 碱碱碱碱 性性性性溶溶溶溶液液液液中中中中，双双双双缩缩缩缩脲脲脲脲与与与与碱碱碱碱性性
2、性性硫硫硫硫酸酸酸酸铜铜铜铜反反反反应应应应形形形形成成成成紫紫紫紫红红红红色色色色化化化化合合合合物物物物。此此此此反反反反应应应应称称称称为为为为双双双双缩脲反应。缩脲反应。缩脲反应。缩脲反应。42.蛋白质与双缩脲试剂反应 2.2.蛋白质与双缩脲试剂反应蛋白质与双缩脲试剂反应蛋白质与双缩脲试剂反应蛋白质与双缩脲试剂反应 5操作取取取取三三三三支支支支试试试试管管管管，分分分分别别别别标标标标明明明明测测测测定定定定管管管管、标标标标准准准准管管管管和和和和空空空空白白白白管管管管，然然然然后后后后按下表加样。按下表加样。按下表加样。按下表加样。混混混混匀匀匀匀，置置置置2525水水水水浴浴
3、浴浴箱箱箱箱3030分分分分钟钟钟钟(或或或或3737水水水水浴浴浴浴箱箱箱箱1010分分分分钟钟钟钟)，取取取取出出出出后后后后在在在在波波波波长长长长540nm540nm处处处处，用用用用分分分分光光光光光光光光度度度度计计计计进进进进行行行行比比比比色色色色，以以以以空空空空白白白白管管管管调调调调零零零零，读读读读取各管吸光度值。取各管吸光度值。取各管吸光度值。取各管吸光度值。【计算计算计算计算】血清总蛋白血清总蛋白血清总蛋白血清总蛋白(g/L)(g/L)A A测测测测/A/A标标标标 标准总蛋白浓度标准总蛋白浓度标准总蛋白浓度标准总蛋白浓度(g/L)(g/L)【操作操作操作操作】【参
4、考值参考值参考值参考值】6080 g/L6080 g/L试剂试剂试剂试剂(ml)(ml)测定管测定管测定管测定管标准管标准管标准管标准管空白管空白管空白管空白管血清标本血清标本血清标本血清标本5050 l l标准血清标准血清标准血清标准血清(70.0g/L)(70.0g/L)5050 l l生理盐水生理盐水生理盐水生理盐水5050 l l双缩脲试剂双缩脲试剂双缩脲试剂双缩脲试剂3.03.03.03.03.03.06临床意义【临床意义临床意义临床意义临床意义】1.1.血清总蛋白浓度增高常见于：血清总蛋白浓度增高常见于：血清总蛋白浓度增高常见于：血清总蛋白浓度增高常见于：血清水分减少，而使总蛋白浓
5、度相对增高。如：呕吐、腹泻等。血清水分减少，而使总蛋白浓度相对增高。如：呕吐、腹泻等。血清水分减少，而使总蛋白浓度相对增高。如：呕吐、腹泻等。血清水分减少，而使总蛋白浓度相对增高。如：呕吐、腹泻等。血血血血清清清清蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质合合合合成成成成增增增增加加加加。大大大大多多多多发发发发生生生生在在在在多多多多发发发发性性性性骨骨骨骨髓髓髓髓瘤瘤瘤瘤患患患患者者者者，此此此此时时时时主主主主要要要要是球蛋白增加。是球蛋白增加。是球蛋白增加。是球蛋白增加。结核病、疟疾播散性红斑狼疮、风湿热等，可引起球蛋白增加。结核病、疟疾播散性红斑狼疮、风湿热等，可引起球蛋白增加。结核病、疟疾播散性红斑
6、狼疮、风湿热等，可引起球蛋白增加。结核病、疟疾播散性红斑狼疮、风湿热等，可引起球蛋白增加。2.2.血清总蛋白浓度降低常见于：血清总蛋白浓度降低常见于：血清总蛋白浓度降低常见于：血清总蛋白浓度降低常见于：血血血血清清清清中中中中水水水水分分分分增增增增多多多多，血血血血清清清清被被被被稀稀稀稀释释释释。如如如如静静静静脉脉脉脉注注注注射射射射过过过过多多多多低低低低渗渗渗渗溶溶溶溶液液液液或或或或因因因因各各各各种原因引起的水钠潴留。种原因引起的水钠潴留。种原因引起的水钠潴留。种原因引起的水钠潴留。营营营营养养养养不不不不良良良良和和和和消消消消耗耗耗耗增增增增加加加加，长长长长期期期期食食食食
7、物物物物中中中中蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质含含含含量量量量不不不不足足足足，或或或或慢慢慢慢性性性性肠肠肠肠道道道道疾疾疾疾病病病病引引引引起起起起吸吸吸吸收收收收不不不不良良良良，使使使使体体体体内内内内缺缺缺缺乏乏乏乏合合合合成成成成蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质的的的的原原原原料料料料；或或或或因因因因长长长长期期期期患患患患消消消消耗耗耗耗性性性性疾疾疾疾病病病病，如如如如严严严严重重重重结结结结核核核核病病病病、甲甲甲甲状状状状腺腺腺腺机机机机能能能能亢亢亢亢进进进进或或或或恶恶恶恶性性性性肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤等等等等，均均均均可造成血清总蛋白浓度降低。可造成血清总蛋白浓度降低。可造成血清总蛋白
8、浓度降低。可造成血清总蛋白浓度降低。合成障碍，主要是肝功能障碍。合成障碍，主要是肝功能障碍。合成障碍，主要是肝功能障碍。合成障碍，主要是肝功能障碍。蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质丢丢丢丢失失失失。严严严严重重重重灼灼灼灼伤伤伤伤，大大大大量量量量血血血血浆浆浆浆渗渗渗渗出出出出，或或或或大大大大出出出出血血血血时时时时，大大大大量量量量血血血血液液液液丢丢丢丢失失失失；另另另另外外外外，肾肾肾肾病病病病综综综综合合合合症症症症及及及及溃溃溃溃疡疡疡疡性性性性结结结结肠肠肠肠炎炎炎炎可可可可从从从从尿尿尿尿液液液液或或或或粪粪粪粪便便便便中中中中丢丢丢丢失失失失蛋白质。蛋白质。蛋白质。蛋白质。7实验二
9、实验二实验二实验二 血清总蛋白浓度测定血清总蛋白浓度测定血清总蛋白浓度测定血清总蛋白浓度测定(双缩脲法双缩脲法双缩脲法双缩脲法)【目的目的目的目的】【原理原理原理原理】【操作操作操作操作】报告加入物加入物加入物加入物(ml)(ml)测定管测定管测定管测定管标准管标准管标准管标准管空白管空白管空白管空白管待测血清待测血清待测血清待测血清5050 l l蛋白标准液蛋白标准液蛋白标准液蛋白标准液(70.0g/L)(70.0g/L)5050 l l蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水5050 l l双缩脲试剂双缩脲试剂双缩脲试剂双缩脲试剂3.03.03.03.03.03.0 混匀。混匀。混匀。混匀。3737水浴水
10、浴水浴水浴10min10min后，后，后，后，540nm540nm波长比色。波长比色。波长比色。波长比色。【结果记录结果记录结果记录结果记录】A A测定测定测定测定 A A标准标准标准标准 C C标准标准标准标准 【计算计算计算计算】血清总蛋白血清总蛋白血清总蛋白血清总蛋白(g/L)(g/L)A A测测测测/A/A标标标标 标准总蛋白浓度标准总蛋白浓度标准总蛋白浓度标准总蛋白浓度(g/L)(g/L)【结果分析讨论结果分析讨论结果分析讨论结果分析讨论】【临床意义临床意义临床意义临床意义】实验时间实验时间实验时间实验时间：带课教师带课教师带课教师带课教师：批阅时间批阅时间批阅时间批阅时间：成绩成绩成绩成绩：.