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1、实验实验报告的写作规范报告的写作规范一、目的要求一、目的要求二、实验原理二、实验原理三、仪器与材料三、仪器与材料四、操作步骤四、操作步骤五、实验结果五、实验结果六、思考题六、思考题注：姓名、学号、按学号顺序整理后交上来。注：姓名、学号、按学号顺序整理后交上来。微生物学微生物学实验实验的学习材料的学习材料http:/ 普通光学显微镜的使用和细菌三型的观察普通光学显微镜的使用和细菌三型的观察一、目的要求一、目的要求1 1、学习并掌握油镜的原理和使用方法。、学习并掌握油镜的原理和使用方法。2 2、复复习习普普通通台台式式显显微微镜镜的的结结构构、各各部部分分的的功功能能和和使使用用方方法。法。二、实
2、验原理二、实验原理 D=D=/2NA NA=n sin/2NA NA=n sin 基础知识基础知识显微镜概述：显微镜概述：显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。1.1.光学显微镜光学显微镜 普通生物显微镜由普通生物显微镜由3 3部分构成：部分构成：照明系统：包括光源和聚光器。照明系统：包括光源和聚光器。光学放大系统：由物镜和目镜组成，光学放大系统：
3、由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。是显微镜的主体。机械装置：用于固定材料和观察方便，机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台包括镜台(载物台载物台)、调节器和、调节器和、物镜转换器物镜转换器(旋转器旋转器)等。等。尼康E-600显微镜实验二实验二 普通光学显微镜的使用和细菌三型的观察普通光学显微镜的使用和细菌三型的观察五、实验结果五、实验结果分分别别绘绘出出你你在在低低倍倍镜镜、高高倍倍镜镜和和油油镜镜下下观观察察到到的的细细菌菌的的三三种种形形态态，包包括括在在三三种种情情况况下下视视野野中中的的变变化化，同同时时注注明物镜放大倍数和总放大率。明物镜放大倍数和总放大率。实验二实验二 普通光
4、学显微镜的使用和细菌三型的观察普通光学显微镜的使用和细菌三型的观察六、思考题六、思考题 (1)(1)用用油油镜镜观观察察时时应应注注意意哪哪些些问问题题?在在载载玻玻片片和和镜镜头头之之间加滴什么油间加滴什么油?起什么作用起什么作用?(2)(2)试试列列表表比比较较低低倍倍镜镜、高高倍倍镜镜及及油油镜镜各各方方面面的的差差异异。为为什什么么在在使使用用高高倍倍镜镜及及油油镜镜时时应应特特别别注注意意避避免免粗粗调调节节器器的的误误操作操作?(3)(3)什什么么是是物物镜镜的的同同焦焦现现象象?它它在在显显微微镜镜观观察察中中有有什什么么意意义义?(4)(4)影响显微镜分辨率的因素有哪些影响显微
5、镜分辨率的因素有哪些?(5)(5)根根据据你你的的实实验验体体会会，谈谈谈谈应应如如何何根根据据所所观观察察微微生生物物的的大小，选择不同的物镜进行有效的观察。大小，选择不同的物镜进行有效的观察。实验十六实验十六 牛肉膏蛋白胨培养基的制备牛肉膏蛋白胨培养基的制备一、目的要求一、目的要求1、明确培养基的配制原理。、明确培养基的配制原理。2、通通过过对对基基础础培培养养基基的的配配制制，掌掌握握配配制制培培养养基基的的一一般般方法和步骤。方法和步骤。实验十六实验十六 牛肉膏蛋白胨培养基的制备牛肉膏蛋白胨培养基的制备二、实验原理二、实验原理 牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:
6、牛肉膏牛肉膏 3.0 3.0g g 蛋白胨蛋白胨 10.0 10.0 g g NaCl NaCl 5.0g5.0g 水水 1000 1000mlml pH 7.4 7.6 pH 7.4 7.6 四、操作步骤四、操作步骤1、称、称量量2、溶、溶化化3、调、调pH4、过过滤滤5、分装、分装6、加塞、加塞7、包扎、包扎8、灭菌、灭菌9、搁置斜面、搁置斜面10、无菌检查、无菌检查实验十六实验十六 牛肉膏蛋白胨培养基的制备牛肉膏蛋白胨培养基的制备 5、分装、分装(1)液体分装液体分装分装高度以试管高度的I4左右为宜。分装三角瓶的虽则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，(2)固体分装固体分装分
7、装试管，其装量不超过管高的15，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。(3)半固体分装半固体分装试管一般以试管高度的13为宜，灭菌后垂直待凝。8、灭菌、灭菌将上述培养基以0.103MPa，l21，20mln高压蒸气灭菌。实验十六实验十六 牛肉膏蛋白胨培养基的制备牛肉膏蛋白胨培养基的制备 棉塞棉塞制作方法：制作方法：五、思考题五、思考题(1)培培养养基基配配好好后后，为为什什么么必必须须立立即即灭灭菌菌?如如何何检检查查灭灭菌菌后后的的培养基是无菌的培养基是无菌的?(2)在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么为什么?实验
8、十六实验十六 牛肉膏蛋白胨培养基的制备牛肉膏蛋白胨培养基的制备消毒与灭菌消毒与灭菌 加加热热法法干热干热法法湿热法湿热法火焰烧灼火焰烧灼热空气灭菌热空气灭菌压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌间歇灭菌间歇灭菌煮沸灭菌煮沸灭菌巴斯德消毒巴斯德消毒实验原理实验原理干热干热灭菌灭菌电电烤箱烤箱压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌过滤除菌过滤除菌 许多材料，如血清、糖溶液等，用一般加热消毒许多材料，如血清、糖溶液等，用一般加热消毒灭菌方法，均会被热破坏，应采用过滤除菌。灭菌方法，均会被热破坏，应采用过滤除菌。应用最广的过滤器有蔡氏应用最广的过滤器有蔡氏(Seitz)过滤器和膜过滤过滤器和膜过滤器。器。实验原理实验原理(con
9、tinued)蔡氏过滤器分上、下两节，蔡氏过滤器分上、下两节，过滤时，用螺旋把石棉板过滤时，用螺旋把石棉板紧紧地夹在上、下两节滤紧紧地夹在上、下两节滤器之间，然后将溶液置于器之间，然后将溶液置于滤器中抽滤，每次过滤必滤器中抽滤，每次过滤必须用一张新滤板须用一张新滤板。实验原理实验原理(continued)滤膜过滤器的结构与蔡氏过滤器相似，只滤膜过滤器的结构与蔡氏过滤器相似，只是滤膜是一种多孔纤维素，孔径一般为是滤膜是一种多孔纤维素，孔径一般为0.45um，过滤时，液体和小分子物质通过，过滤时，液体和小分子物质通过，细菌被截流在滤膜上。细菌被截流在滤膜上。实验原理实验原理紫外线灭菌紫外线灭菌 紫
10、外线波长在紫外线波长在200-300 nm,具有杀菌作用，具有杀菌作用，其中以其中以265-266 nm杀菌力最强。杀菌力最强。无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭无菌室或无菌接种箱空气可用紫外线灯照射灭菌。菌。实验原理实验原理(continued)干热干热灭菌灭菌1、装入待灭菌物品2、升温 接通电源，加热升温至160-170。3、恒温 保持160-170 2小时。4、降温 切断电源，自然降温。5、开箱取物 待烤箱温度降到70以下以后，方可打开箱门，取出物品。箱内温度高于70，切勿自行打开箱门，以免玻璃器皿炸裂。实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤(continued)压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌1、检查水位，放入物品。2、加盖、拧紧 对称用力3、加热升温 4、排冷空气 等压力升至0.5kg/cm2时，打开排气阀，排净冷空气。5、升温、保压 等锅内压力升至所需数值（通常为1.03kg/cm2），保持压力20-30分钟。6、降压、取物 实验内容及实验步骤实验内容及实验步骤(continued)