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1、实验四实验四 胶体金试纸条诊断技术胶体金试纸条诊断技术一、简一、简 介介 胶胶体体金金试试纸纸条条诊诊断断是是采采用用胶胶体体金金免免疫疫层层析析技技术术研研制制而而成成，该该技技术术是是9090年年代代初初在在免免疫疫渗渗滤滤技技术术的的基基础础上上建建立立的的一一种种简简易易快快速速的的免免疫疫学学检检测测技技术术，最最先先用用于于人人绒绒毛毛膜膜促促性性腺腺激激素素（HCGHCG）的的测测定定和和乙乙型型肝肝炎炎病病毒毒表表面面抗抗原原（HBsAgHBsAg）等检测。等检测。p胶胶 体体 金金（Colloidal Colloidal goldgold）是是 氯氯 金金 酸酸（HAuClH
2、AuCl4 4）的的水水溶溶胶胶，氯氯金金酸酸在在还还原原剂剂的的作作用用下下，聚聚合合成成特特定定大大小小的的金金颗颗粒粒，并并由由于于静静电作用成为一种稳定的胶体状态。电作用成为一种稳定的胶体状态。质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球形，大小均一，无棱角。形，大小均一，无棱角。质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状各异。各异。胶体金的质量判定标准胶体金的质量判定标准p胶胶体体金金标标记记的的原原理理：胶胶体体金金在在碱碱性性条条件件下下带带负负电电荷荷，与与蛋蛋白白质质分分子子的的正正电电荷荷基基
3、团团藉藉静静电电吸引而形成牢固结合。吸引而形成牢固结合。p胶胶体体金金标标记记技技术术（ImmunogoldImmunogold labeling labeling techniquetechnique）是是以以胶胶体体金金作作为为示示踪踪标标记记物物应应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。二、胶体金试纸条诊断技术的原理二、胶体金试纸条诊断技术的原理 以以硝硝酸酸纤纤维维素素膜膜为为载载体体，利利用用了了微微孔孔膜膜的的毛毛细细血血管管作作用用，滴滴加加在在膜膜条条一一端端的的液液体体慢慢慢慢向向另另一一端端渗渗移移，通通过过抗抗原原抗抗体体结结合合
4、，并并利利用用胶胶体体金金呈呈现现颜颜色色（红红色色）反反应应，检检测测抗抗原原/抗体。抗体。最常用的是双抗夹心法检测抗原最常用的是双抗夹心法检测抗原胶体金试纸条示意图胶体金试纸条示意图检测线检测线质检线质检线吸收垫吸收垫样品垫样品垫硝酸纤维素膜硝酸纤维素膜连接垫连接垫（胶体金垫）（胶体金垫）背衬背衬（底板）（底板）p测测定定时时将将试试纸纸条条下下端端浸浸入入液液体体标标本本中中，下下端端吸吸水水材材料料即即吸吸取取液液体体向向上上端端移移动动，流流经经C C处处时时使使干干片片上上的的免免疫疫金金复复合合物物复复溶溶，并带动其向膜条渗移。并带动其向膜条渗移。测测 定定p若若标标本本中中有有
5、待待测测特特异异抗抗原原，即即可可与与免免疫疫金金复复合合物物中中的的抗抗体体结结合合，此此抗抗原原抗抗体体复复合合物物流流至至测测试试区区即即被被固固相相抗抗体体捕捕获获，在在膜膜上显出红色上显出红色反应线条反应线条（T T）。）。测测 定定测测 定定p过过剩剩的的免免疫疫金金复复合合物物继继续续前前行行，至至参参照照区区与与固固相相抗抗小小鼠鼠IgGIgG结结合合（免免疫疫金金复复合合物物中中的的单单克克隆隆抗抗体体为为小小鼠鼠IgGIgG），而而显显出出红红色色质质控线条控线条（R R）。）。测测 定定p阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。胶体金
6、快速诊断技术的特点胶体金快速诊断技术的特点 p简简捷捷快快速速：操操作作简简单单，一一般般只只要要5 5-10min-10min 就就会会出出结结果果，而而其其它它方方法法如如ELISAELISA需需要要1 1-2h-2h，PCR PCR 需要时间更长。需要时间更长。p结结果果易易于于判判定定：阴阴、阳阳性性呈呈色色很很明明显显，肉肉眼眼很容易判断。很容易判断。p特特异异性性好好：因因为为该该技技术术大大多多用用单单克克隆隆抗抗体体标标记，这决定了它具有很好的特异性。记，这决定了它具有很好的特异性。p病毒性疾病：病毒性疾病：传染性法氏囊病、禽流感、传染性法氏囊病、禽流感、新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。新城疫、犬细小病毒、猪瘟等。p寄生虫疾病：寄生虫疾病：血吸虫病、旋毛虫病、囊虫血吸虫病、旋毛虫病、囊虫病、恙虫病。病、恙虫病。p细菌性疾病：细菌性疾病：霍乱弧菌、类鼻疽。霍乱弧菌、类鼻疽。胶体金快速诊断技术的应用胶体金快速诊断技术的应用H5亚亚型型AIV尿尿囊液阳性结果囊液阳性结果阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照H5IV细胞细胞毒阳性结果毒阳性结果