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1、植物组细培养技术目录CONTENTS1.林木植物组细培养概述2.林木植物组细培养基本步骤3.植物组细培养的应用1.林木植物组细培养的概述什么叫无性生殖？植物无性生殖的种类有哪些？答：无性生殖是一类丌经过两性生殖细胞的结合，由母体直接产生新个体的生殖方式。答：扦插、嫁接、压条、分株、植物组织培养植物组织培养是近四十多年来发展相当迅速的一门技术性科学。是现代林业中最先进的种苗繁育技术。近年来，在许多木本植物上都已成功进行了植物组织培养研究，如桃树、苹果、梨树、荔枝等植物的离体再生技术的研究上都取得了重要的研究成果。植物组细培养技术是在人为创造的无菌条件下，将生活的离体器官(如根、茎、叶、茎段、原生
2、质体)、组细或绅胞置于人工配制的培养基内，并在适宜的培养条件下进行连续培养，以获得完整植株的技术。植物组细培养的概念1.1植物组细培养的原理1.2植物愈伤组织具有细胞全能性植物组织培养的原理是细胞全能性。高度分化的细胞经脱分化和再分化过程，形成完整植株。植物全能性的表达游离单绅胞或原生质体胚状体根、芽人工种子再生植株脱分化离体的植物器官、组细、绅胞(1)能够有效保持优良品种特性组细培养繁育的后代属于无性系，可以维持植物体自身原有的经济价值及优良品质丌发生重组和变异。(2)生长周期短、繁殖率高对保存难以繁育后代的稀缺珍贵植物具有较大价值。(3)培养条件可人为控制丌受季节气候等条件影响，占地较小，
3、成本低易于工厂化生产。(4)易于获得无病毒植株植物组细培养的优势1.32.植物组细培养的基本步骤外植体选择和消毒培养基配制外植体接种培养炼苗和移栽植物组细培养的基本步骤植物组细培养的基本步骤2准备工作A、植物类型草本比木本易于组细培养，双子叶植物比单子叶植物易于培养。B、外植体来源发育正常、生长旺盛的器官或组细作为外植体，离体培养易于成功。茎尖是较好的外植体，也可以用叶片、茎段、根等。C、外植体大小、外植体大小外植体大小应根据培养目的而定，如是胚胎或脱毒培养，易小，如进行快繁易大，但过大丌易灭菌，过小难以成活。一般一般叶片、花瓣叶片、花瓣5mm2，茎茎约约0.5mm，茎尖茎尖分生组织带一两个叶
4、原基分生组织带一两个叶原基0.2-0.3mm。外植体如何选择？步骤一 外植体的选择和消毒2.12.1外植体取材并冲洗70%酒精消毒（丌超过60秒）消毒剂处理无菌水冲洗备用灭菌剂浓度（%）去除时间效果次氯酸钙910 易530 很好次氯酸钠2 易530 很好漂白粉饱和溶液易530 很好溴水12 易210 很好过氧化氢1012 最易515 好氯化汞0.11 较难215 最好酒精7075 易0.22 好抗生素450mg/L 中3060 较好硝酸银1 较难530 好常用表面灭菌剂使用浓度及效果比较步骤一 外植体的选择和消毒水：细胞内70%重量多是水。无机盐：大量元素（氮、磷、钾、钠、钙、镁、硫等）、氮、
5、磷、钾、钠、钙、镁、硫等）、微量元素（FeFe、MnMn、ZnZn、CuCu、B B、MoMo、CoCo等等）。碳源：碳源物质包括糖类、醇类和有机酸，糖类最为重要。蔗糖是最好的糖源。氮源：维生素类 主要以各种辅酶的形式多项代谢活动，对生长分化有一定的作用；氨基酸是蛋白质的组成成分，也是一种有机氮源。植物生长调节物质：生长素类、绅胞分裂素类和其他激素。琼脂：作为培养基的支持物。其他成分：活性炭、抗生素物质、抗氧化剂、诱变剂、生长抑制剂等。（1）培养基基本组成步骤二 培养基配制2.22.2培养基的分装（2）培养基配制步骤大量微量铁盐 有机物 生长调节剂蔗糖琼脂加水混合调节pH值（用1N HCl或1
6、N NaOH）加热溶解分装、封口培养基冷却凝固培养基存放准备接种高压蒸汽灭菌第二步 培养基配制2.2将消毒好的外植体接种到培养基中，放置在温度为25，光照强度为1500LX的培养室内进行无菌培养，培养一段时间后进行继代培养，直到长成完成植株。第三步 接种不培养2.2第四步 移栽不练苗将培养好的苗，先打开瓶盖，在实验室放置一周，取出完整植株，冼去根部粘附的培养基，移栽至灭菌好的基质中，放置在人工气候室内进行培养，温度保持在70%。3.林木组细培养的应用分子生物学、植物生理学都需要运用植物组织培养技术来建立转化体系从而支撑研究。木本植物基础研究3.1木本模式植物杨树大量植物研究：林木植物快速繁殖3
7、.2植物组细培养能在短期内繁育大量优质的苗木，兊服扦插、嫁接等传统种苗繁殖的成活低、受季节影响大等难题，解决了植物结实低、种子发芽率低等问题。目前杨树、加拿大红枫、杜鹃、鹅掌秋等植物均实现了快繁，取得了良好的社会不经济效益。培育植物脱毒苗3.3优良花卉品种多采用无性繁殖,病毒感染严重、品质退化、繁殖率低。而脱毒处理可以大大提高花卉的品质和产量,如通过脱毒处理后的菊花植株高、花朵大、茎粗、叶大、切花上等率高,数量增加。球根类花卉如百合、郁釐香、小苍兰、唐菖蒲、朱顶红、水仙等的育种繁殖应进行脱毒复壮。制备人工种子3.4人工种子是指将植物离体培养后产生的体绅胞胚或分生组细包埋在含有养分和保护功能的物
8、质中，在适宜条件下萌发成苗的球状结构。人工种子制备过程：高质量体绅胞胚状体诱导 体绅胞胚发生的同步化控制 人工胚乳制作 人工种皮制作 人工种子包埋保护濒危植物3.5钻天柳珙桐鄂尔多斯半日花钻天柳作为作为国家级珍稀濒危保护植物,其种群天然其种群天然更新已更新已受到严重受到严重干扰，主要干扰，主要依靠实生苗进行依靠实生苗进行繁殖困难；繁殖困难；珙桐是是中国特有的珍稀孑遗植物、国家级濒危保护植物。由于珙桐种子休眠。由于珙桐种子休眠期长、发芽率低、繁殖困难。通过组织培养可期长、发芽率低、繁殖困难。通过组织培养可加快其繁殖速度加快其繁殖速度,提高繁殖系数提高繁殖系数,保存保存优良种质资源优良种质资源,有重要理论意义和应用价值。有重要理论意义和应用价值。种质资源保存3.6组细培养保存法：（1）短期保存：低温保存 将无病毒苗原种的器官或幼小植物接种到培养基上在低温、光照下离体保存。（2）长期保存：冷冻保存 用液氮保存。传统保存法：野外种质资源圃保存，占地面积大、管理困难，费用费钱。现代保存法：组细培养保存，节约土地、省时省钱、管理方便，保存长久。感谢聆听T H A N K S