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1、铅法铅法显示酸性磷酸酶显示酸性磷酸酶 姜富祥姜富祥 研究生学院研究生学院 2010071铅法铅法显示酸性磷酸酶显示酸性磷酸酶原理原理 以甘油磷酸钠为底物，在酸性PH下，被ACP水解，释放出磷酸盐，遇铅离子则生成磷酸铅沉淀。在被S2-置换，最终生成硫酸铅棕色沉淀。反应式如下：酸性磷酸酶Acid Phosphatas（ACP）ACP的特性 PH 4.55.5适宜 激活剂：Mn2+抑制剂：NaF，有些ACP为Cu2+、酒石 酸盐、四氧嘧啶甲醛等抑制剂。ACP定位定位 溶酶体（颗粒状）内；溶酶体外ACP存在于ER和胞液。该酶活性高的器官：肾、肝、肠、脾、肾上腺。方法方法标本：大白鼠肾、肝横冷箱切片（载
2、片），厚6 微米。固定：冰冻片或横冷箱切片。冻融，有时也可 用甲醛，但影响活性。本实验不固定或固定于丙酮氯仿（11）混合液，4，25min步骤：步骤：将标本放于下列孵育液中 37，1015 孵育液：0.1M醋酸缓冲液，PH5.2 15ml 0.24硝酸铅 15ml 3甘油磷酸钠 3 ml 33ml 混匀，置37水浴中1530分钟后，过滤。于37蒸馏水中洗2次，每次1分钟。（温蒸馏水洗）入5硫化胺，12分钟。流水冲洗35分钟后，换蒸馏水。（可用Mayer苏木素复染核）用甘油明胶或Apathy氏糖胶封固。结果结果酶活性部位棕黑色硫化铅沉淀。分布于肾近曲小管细胞核周围，肝细 胞毛细胆管周围均有棕黑色颗粒。对照对照孵育液内加0.01M NaF（13.9mg/33ml）（）注意事项注意事项 铅离子的浓度 关键问题，没有底物，有 些组织吸附铅离子（+），因此必须用NaF 抑制酶活性排除假阳性反应。孵育时间不可过长，否则染色扩散或核染色。