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1、ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3059-2016 大豆抗子包囊线虫鉴定技术规程Specification for identification of soybean resistance to cyst nematode 2016-12-23发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部发布目。昌本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由农业部种子管理局提出并归口。本标准起草单位:吉林省农业科学院。NY/T 3059-2016 本标准主要起草人:张金花、任金平、高月波、王义生、李启云、刘晓梅、张伟、王继春、姜兆远。I NY/T 30
2、59-2016 大豆抗抱囊线虫鉴定技术规程范围本标准规定了大豆抗抱囊线虫的鉴定方法和评价标准。本标准适用于大豆种质资源和品种对大豆子包装线虫的抗性鉴定和评价。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1 大豆子包囊线虫soybean cyst nematode 一种土传、内寄生且能引起大豆叶部黄化和植株矮化症状的线虫，具体形态特征参见附录A。2.2 生理小种race 大豆抱囊线虫种内在形态上没有差别，但在大豆不同品种上具有显著致病性差异的群体，需要采用一套鉴别寄主进行区分。2.3 鉴别寄主differential ho由用于鉴别和区分大豆子包囊线虫不同生理小种的一套带有不同抗性的大豆品种。
3、3 试剂、材料和仪器设备3.1 基质蛙石，20目细沙。3.2 标准筛网标准筛网一套，用于线虫子包囊、卵的过滤。3.3 其他用晶培养皿、托盘、慑子、烧杯、气角瓶、漏斗、软胶棒、剪刀、滤纸、酒精灯、研钵、量筒、花盆等。3.4 显微镜放大倍率:4倍100惰，用于大豆抱囊线虫的形态鉴定及卵的显微镜计数。3.5 移渡器量程:200Ll000L.系统误差:l:l.2%.随机误差士0.6%。用于精确量取线虫卵悬浮液及接种。3.6 高压灭菌锅用于基质、试验用水及小型器具的消毒处理。4 鉴定方法4.1 田间病圃法4.1.1 播种选择平均抱囊数大于30个的病圃，按品种适宜播期播种，每份材料2行，行长5m，每行留苗
4、35株50株。根据试验茧，每20个参鉴品种设一个感病对照。1 NY/T 3059-2016 4.1.2 调查大豆出苗后28d35d，检测感病品种根部大豆子包最线虫的发育情况。当大豆子包囊线虫白色雌虫突出表皮时，随机挖取10株，统计根上的抱囊数。4.2 病土盆栽法4.2.1 播种选择平均抱囊数大于30个的病土，掺入30%消毒后的细沙，充分混匀，放入直径为18cm、高20cm 的花盆中，每盆播种大豆5粒，出苗后留苗3株，每个品种播5盆，同时设置感病对照，随机摆放，土壤采用滴灌方式补充水分，含水盐控制在50%-:4.2.2 调查大豆出苗后28d35 d,突出表皮时，扣盆调查，4.3 人工接种法4.3
5、.1 接种采用见附录B)。300C。4.3.2 调查移栽后2表皮时，扣盆5 抗性评价5.1 有效性当设置的对照5.2 抗性评价标准逐株调查根系上级别5.3 抗性判断大豆子包囊线虫白色雌虫的花盆中备到花盆中。浮液的制备280C 根据重复抗性鉴定结果，以记载的最高发病程度，对鉴定材料进行抗病性评价，写出正式鉴定报告，并附原始资料。大豆抗子包囊线虫鉴定调查汇总表见附录C。2 NY/T 3059-2016 附录A(资料性附录)大豆子包囊线虫及生理小种A.1 大豆子包囊线虫A.1.1 形态特征大豆子包冀线虫(褐，大小0.85mm 为两侧半膜孔雌成虫拧棱形，先白后变黄的阴门圆锥体，阴门小板向腹侧弯曲，平均
6、体长卵内发育，脱皮成二。四龄幼虫在三龄土壤中越冬，有的以上。虫卵越冬，虫体露于其外。再侵染。二龄线孵化率最高。止活动。土壤美和发小的叶不色国子系褐产后根黄生病株或豆感病色大期。白死多仲TF、下A.2 生理小种采用Golden(l970)确立霄，.监4主主谱pP马国、PI88788、Pl90763、Lee68五个品种进行鉴定。用透明的塑料薄膜制成置回国回-圃明:m的塑料钵柱，将平均抱囊数大于30个抱囊的病土混匀装入。种子于蛙石中发芽.子叶即将展开时，选取根长一致的幼苗移栽到装有病土的塑料钵柱中。每钵l株，每个鉴别寄主10钵，置于280C温室恒温培养。移栽后28d30 d.拆开塑料钵柱，拨开土柱，
7、取全根系，统计根上和土壤中的抱囊总数，计算抱囊指数，按照表1的划分标准确定生理小种。A.2.2 抱囊指数鉴别品种根上平均抱囊数与感病对照品种根上平均范囊数的比值，按式(A.1)计算抱囊指数，计算结果保留两位小数。FI=Z100(Al)3 NY/T 3059-2016 式中:T一一供试品种的平均抱囊数，单位为个每株(个/株);C 感病对照品种的平均抱囊数，单位为个每株(个/株)。A.2.3 生理小种划分标准大豆抱囊线虫生理小种划分标准见表A.l。表A.l大豆子包囊线虫生理小种划分标准生理小种线虫在鉴别寄主上的繁殖能力Pickclt Peking P188788 P190763 Lce68 十+2
8、+3+4+十十十+5 十十+6 十+7+8 十十9+0 十十十11 十十+12 十+13 十+14+十+15+十+16 十十+十注:FI二三10%时为感病(+);FI10%时为抗病(-)。4 B.1 病士采集附录B(规范性附录)线虫接种体制备采自大豆子包最线虫多发地区的大豆根系土壤。B.2 病土中抱囊的收集及测定NY/T 3059-2016 取病土50g，用筛孔直径为6mm的粗筛，筛去土块和草屑等杂物，然后放在1000mL的三角瓶中或容量瓶中。瓶内加水700mL，震荡30s后，静置10min后，抱囊和草屑等都浮在四周的瓶壁上，立即将上层漂浮物倒在50日的筛子上，冲洗以后将于包囊洗到铺有滤纸的漏
9、斗上，滤去水分后将滤纸摊开晾干检查。测定5份土样中每百克风干土中的抱囊数，平均抱囊数大于30个即可用于抱囊线虫的抗性鉴定。B.3 抱囊线虫卵悬浮液的制备将病土中或根系上收集到的抱囊放人研钵中用橡皮或软胶棒轻碾后加水过200目筛网，在500目筛网收集卵，并配成200个卵/mL的卵悬浮液。B.4 繁殖将含有不同生理小种的抱囊线虫的土壤，根据土壤黠性，加入30%消毒后的细沙，装入花盆中，种植感病品种以繁殖线虫，获得大量用于接种的抱囊。B.5 保存繁殖线虫后的病土装入塑料大盆或水泥池中，定时补充水分，上覆盖塑料薄膜，保持含水量在60%80%。3 NY/T 3059-2016 附录C(规范性附录)鉴定调查汇总表大豆抗子包囊线虫鉴定调查汇总表见表C.l。表C.l一一一年大豆抗抱囊线虫鉴定调查汇总表根系附着于包囊数平均抱囊数品种编号重复2 3 4 5 6 7 8 9 10 感病对照H m I 参鉴川种lH 山参鉴品种2H m 参鉴川种XH m 6 抗性评价