《SN∕T 3767.18-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第18部分：大豆 GTS40-3-2品系(出入境检验检疫).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《SN∕T 3767.18-2014 出口食品中转基因成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第18部分：大豆 GTS40-3-2品系(出入境检验检疫).pdf（9页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、书 书 书?犛犖犜?（犔犃犕犘）?：?犌犜犛?犔狅 狅 狆 犿犲 犱 犻 犪 狋 犲 犱犻 狊 狅 狋 犺 犲 狉犿犪 犾犪犿狆 犾 犻 犳 犻 犮 犪 狋 犻 狅 狀犱 犲 狋 犲 犮 狋 犻 狅 狀犿犲 狋 犺 狅 犱犳 狅 狉犵 犲 狀 犲 狋 犻 犮 犪 犾 犾 狔犿狅 犱 犻 犳 犻 犲 犱犮 狅犿狆 狅 狀 犲 狀 狋 狊犻 狀犳 狅 狅 犱犳 狅 狉犲 狓 狆 狅 狉 狋犘 犪 狉 狋：犛 狅 狔 犫 犲 犪 狀犌犜犛?书 书 书前言 出口食品中转基因成分环介导等温扩增（）检测方法共分为 部分：第部分：通用要求和定义；第部分：筛选方法；第部分：玉米 品系；第部分：玉米 品系；第部
2、分：玉米 品系；第部分：玉米 品系；第部分：玉米 品系；第部分：玉米 品系；第部分：玉米 品系；第 部分：王米 品系；第 部分：玉米 品系；第 部分：玉米 品系；第 部分：玉米 品系；第 部分：玉米 品系；第 部分：大豆 品系；第 部分：大豆 品系；第 部分：大豆 品系；第 部分：大豆 品系；第 部分：大豆 品系；第 部分：水稻 品系；第 部分：水稻 品系；第 部分：水稻 品系；第 部分：水稻品系；第 部分：水稻 品系；第 部分：水稻 品系；第 部分：水稻 品系；第 部分：水稻 品系；第 部分：小麦 品系；第 部分：甜菜 品系；第 部分：油菜 品系。本部分为 的第 部分。本部分按照 给出的规则
3、起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国汕头出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、中华人民共和国犛犖犜 北京出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、仲恺农业工程学院、广州迪澳生物科技有限公司。本部分主要起草人：刘津、蔡颖、凌莉、易敏英、高东微、谢力、曹际娟、冯家望、曾静、李晓虹、陈颖、高苏娟、石磊、李志勇、张隽、陈源树、李婷、关丽军。犛犖犜 出口食品中
4、转基因成分环介导等温扩增（犔犃犕犘）检测方法第 部分：大豆犌犜犛 品系范围 的本部分规定了食品中转基因大豆 品系特异性的环介导等温扩增（）初筛检测方法。本部分适用于大豆及其加工产品中转基因大豆 品系特异性成分的定性检测。本方法的定性检测低限为（质量分数）。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法 转基因产品检测实验室技术要求 转基因产品检测核酸提取纯化方法 转基因产品检测核酸定量检测方法 转基因产品检测抽样和制样方法 转基因植物品系特异性
5、检测方法 出口食品中转基因成分环介导等温扩增（）检测方法第部分：筛选方法防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合 的规定。抽样与制样按照 的规定执行。核酸提取纯化按照 的规定执行。犔犃犕犘检测方法 原理 一般原理根据转基因大豆 品系外源基因和大豆边界序列设计的内、外引物各一对，特异性目标犛犖犜 序列和引物碱基序列参见附录。引物特异性识别目标序列上的六个独立区域，利用犅 狊 狋酶启动循环链置换反应，在大豆 品系特异目标序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎环混合物；从析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的结合，产生副产物（焦磷酸镁）形成乳白色沉淀，加入显色
6、液，即可通过颜色变化观察判定结果。显色液显色原理 是一种高灵敏的荧光染料，可以嵌入方式结合到双链的小沟内。当它与双链结合时，荧光信号是游离状态的 倍。在不发生扩增反应时，染料分子的荧光信号不发生改变，颜色显现为橙色；当发生扩增反应时，随着双链的增加，染料的荧光信号也随之大幅度增强，其信号强度可代表双链分子的数量，同时颜色由橙色变为绿色。仪器和设备 超纯水发生器。水浴锅或加热模板：和 。离心管：、。移液器：量程 ；量程 ；量程 。计时器。试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水：应符合 中一级水的规格。溶液：每种核苷酸浓度 。犅 狊 狋聚合酶（如：公司或具有同等效果的聚合酶
7、）：酶浓度。缓冲液：含 （值）、硫酸铵、氯化钾、硫酸镁、。硫酸镁溶液：。甜菜碱：。显色液：荧光染料，。引物：根据转基因大豆 品系外源基因和大豆边界序列设计一套特异性引物，包括外引物，外引物，内引物和内引物。外引物扩增片段长度：外引物（，）：外引物（，）：内引物（，）：内引物（，）：实验步骤 阴性对照、阳性对照和空白对照的设置 阴性对照：采用不含有待测基因序列的植物基因组为模板。阳性对照：采用含有目标基因序列的植物或质粒作为模板，浓度应略高于方法检测低限。犛犖犜 设两个空白对照：提取时设置的提取空白对照（以水代替样品）；反应的空白对照（以溶解液代替模板）。内源基因检测检测前应先进行内源基因检测，
8、结果阳性则表明从样品中提取的可以进行外源基因检测；否则应重新进行提取和纯化。内源基因的检测参照 的规定进行。大豆犌犜犛 品系犔犃犕犘反应体系反应体系见表。每个样品各做个平行管。加样时应使样品溶液完全加入反应液中，不要粘附于管壁上。在反应体系配制完成后，将显色液滴在管盖内侧，盖管盖时应小心，防止显色液混合进入反应液中。表大豆犌犜犛 品系犔犃犕犘反应体系组分工作液浓度加样量反应体系终浓度 缓冲液 外侧上游引物（）外侧下游引物（）内侧上游引物（）内侧下游引物（）甜菜碱 硫酸镁 犅 狊 狋聚合酶 模板 水补足至 犔犃犕犘反应参数 恒温扩增 ，使酶灭活，反应结束。显色反应反应结束后，将显色液与反应液上下
9、颠倒轻轻混匀，立即在黑色背景下进行颜色观察。质量控制 基本原则：实验室中设置的各种对照检测结果应符合以下情况。否则，任一种对照如果出现非下述正常结果，应重做实验。空白对照：反应管中液体呈橙色。阴性对照：反应管中液体呈橙色。犛犖犜 阳性对照：反应管中液体呈绿色。结果判断和确证 待检样品个平行样反应管中液体均呈橙色，同时各种实验对照结果正常，可判断该样品检测结果为阴性。待检样品个平行样反应管中液体至少管呈绿色，同时各种实验对照结果正常，可判断该样品转基因大豆 品系初筛阳性，还应通过下列方法之一进行确证（见附录）：按照 进行实时荧光检测；按照 进行实时荧光检测；可对外引物扩增产物进行序列测定。结果表
10、述 检测结果为阴性，表述为“该样品未检出转基因大豆 品系”。检测结果为转基因大豆 品系初筛阳性，应按照确证实验情况进行结果判断和表述。犛犖犜 附录犃（资料性附录）转基因大豆犌犜犛 品系基因序列犃 转基因大豆犌犜犛 品系特异目标序列（来自犃犮 犮 犲 狊 狊 犻 狅 狀狀 狅 犃犑 ）犃 引物碱基序列及构成：犛犖犜 书 书 书 犜犖 犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出口食品中转基因成分环介导等温扩增（犔犃犕犘）检测方法第 部分：大豆犌犜犛 品系 中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲号（）北京市西城区三里河北街 号（）总编室：（）网址 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数 千字 年 月第一版 年 月第一次印刷印数 书号：定价 元