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1、v.-ICS 65.150 B 51:才叫中华人民共和国水产行业标准SC/T 2094-2020 中间球海胆Japanese sea urchin 2020-08-26发布2021-01-01实施气销片中华人民共和国农业农村部发布 A SC/T 2094-2020 本标准由全国水产标准化技术委员会海水养殖分技术委员会(SAC/TC156/SC 2)归口。本标准起草单位:大连海洋大学。本标准主要起草人:常亚青、张伟杰、湛虫在、周贺、陈小慧、孙景贤、丁君、宋坚、赵冲。I SC/T 2094-2020 中间球海胆1 范围本标准给出了中间球海胆StroTlgyLocentrotus口山rmediusC
2、Agassiz.1863)J的术语和定义、名称与分类、主要形态构造特征、生长与繁殖特性、细胞、遗传学特征、分子遗传学特征、检测方法和判定规则。本标准适用于中间球海胆的和l质检测与鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文例，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单适用于本文件。GB/T 18654.2养殖鱼类种质检验第2部分.抽样方法GB/T 18654.12养殖鱼类事l质检验第12部分:染色体组型分析3 术语和定义下列术i营利定义适用于本文件。3.1 壳径(es(diame(er 口商朝下放于水平面上，横切海II!
3、外究所得最大囚丽的外径长。3.2 壳高t国(heigh(111门到口面中心的不包括棘刺的垂直距离.测i孟方法见图10完径于二t.i图1中间球海胆壳径和竟高的泪IJ量方法3.3 口面oral side 口部所在的壳面。3.4 3.5 反口面aboral side j江门所在的壳面。管足(ube fee(水管系统WtI:，壳外的细长的管状部官，具有l吸附、运动、感觉、摄食等功能。?SC/T 2094-2020 3.6 3.7 38 棘spine生长于壳上细伏的针状和1.步带区ambulacra area 外壳上伸出管足的区域。间步带区interannbulacra area 外壳上不伸出笆足的区域
4、。4 名称与分类4.1 学名中间球海JJ且Stro11gyloce11trotusil1termedius(Agassiz,1863)。4.2 分类地位隶属于棘皮动物门(Echinodermata)游走亚门(Eleutherozoa)海胆纲(Echinoidea)正形目(Centrochinoida)球海胆科(Strongylocentrotidae)球海胆属(缸rongylocentrolus)。5 主要形态构造特征5.1 外部形态壳呈低半球形，成体壳高介于15mm-40 mm，壳径介于30mm-80 mm，最大壳高可达50mm，最大壳径可达100mm.口面平坦且稍向内凹，反口面隆起稍低，顶
5、部比较平坦。步带区与间步带区顺宽不等，赤道部以上步带区帽宽为间步带区 的2/3，两区自口而观接近于圆润的正五边形。体表的色泽变异较大，多以绿褐色和黄褐色为主。大棘针形，短而尖锐，长度为5mm.8 mm，在水中管足细长、淡黄透亮.外部形态见图2。)口商b)反口商图2外部形态5.2 可量性状6月龄、12月龄、18月龄和22月龄中间球海胆壳高与壳径的比值平均值分别为0.48:1:0.08、O.9土0.02，0.55士0.03和0.59士。.04.年龄判定参考养殖记录。53 内部构造5.31 口器位于口面中心，由5个大而尖锐的大齿、5个大齿胃、若干块小齿自以及与之相连肌肉束组成。5.32 生殖系统JI
6、Itt雄异体，生殖腺5瓣，在生殖季节雄性呈淡黄色，雌性呈橙黄色。2 5.3.3 固口想围口直t5对，常在壳缘处形成熄裂。6 生长与繁殖特性6.1 生长6.1.1 实现IJ值人工养殖的中间球海IJ!l.的壳商、壳径和体重实祖l值见表10表1养殖中间球海胆壳富、壳径和体重实测值月龄项目了l:究径月mm 盯1口、范固2.45-7.88 4.59-14.20 6 平均值5.13 10.76 标准偏差0.97 2.34 范围11.55-21.98 23.34-43.95 12 平均值16.92 33.90 标准偏差2.06 3.67 范围15.93-29.89 30.71-49.13 18 平均值21.
7、46 40.34 标准偏差1.96 3.12 范围22.96-33.31 42.00-52.12 22 平均值27.91 47.58 标准偏差2.64 2.64 6.1.2 壳径与体重的关系壳径与体重的关系见式(1)0 SC/T 2094-2020 f;f:亚g 0.03-1.46 O.73 0.46 6.34-36.34 15.99 4.87 10.81-39.29 25.45 5.17 33.49-59.48 46.10 7.99 BW=0.00ITly822(R=0.984).(1)式中:TD 壳径，单位为毫米(mm);BW一一体重，单位为克(g)o6.1.3 生长曲线人工养殖的中间球海
8、JJ!l.生长曲线见图30于己径111111 50 40 30 20 10 6 12 18 22年龄，月a)完径生-(;I II!线体重g 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 6 12 18 b)U重生长Ittl线图3中阎王求海胆生长曲线6.2 繁殖6.2.1 性成熟年龄性成熟年龄为2龄。6.2.2 生物学最小型壳径为30mm。6.23 繁殖期22年龄，月一年一次，黄海北部地区9月上旬至10月中旬是中间球海胆的自然繁殖期，繁殖水温180C-230C。3 SC/T 2094-2020 62.4 产卵量壳径在50mm60 mm的个体产卵量为2X10粒5XlO枝。6.2.5
9、 卵子特性卵子外观球形，卵黄均匀，外被一层透明的卵膜，属均黄沉性卵。卵径介于80m110mo7 细胞遗传学特征7.1 染色体数目染色体数目2=42。72 染色体核型核型公式为2=42=20m+20sm+2旺。染色体核型见图40m u If u 11 11 u ,m n 11 n .,lOm u 11 u B 1 1OJ.l.!lI d q哺l分相l10)恢1lHlil引图4中间球海胆二倍体染色体及染色体组型图8 分子遗传学特征线粒体C01DNA(细胞色素氧化酶llE基I基因序列长度492坤，出现频率最高的单倍型序列如下-1 CA:;cc刀GTGGArCrGTTGA CITAG3用1:TTTcc
10、CTC(二ACCITG刀GTGCCTCITCT 61 ATCT丁GGCCfCAATDAJIJT D:队ACAACAfT队ACATGCGGACACC AGGAKrG丁121 TTTGACCGTC TTCCITT叮TTGTCTGfCC GTCTTI飞TD.CCG;TCTT GCTCCTC万IT181 TCrCJ.l二AGTCTD气GCAGGAGCAD.CA PJGCTCCTCA CAGPJCGTAA A厄可AAACACA241 h口TICTTCGPJCCAGCAGG AGGAGGGGfArTCTGT TC巳AACh盯TPJTCTGPJTT 301 T了fGGCCACCCAGAAGTGlCATTCT
11、D怔CTTGCC1GGf TTGGTfGf TTCACi气3了T361 Jl.队GCTCJl.ITA口C1GGTAAGCGGGAG:T TTTGGfACC TAGGGfGGT TfGCCfG 421 fGCAAL电GGAGTTT下GGGJl.ITC乞ITG1:TGAGCCCPJC ffGTI丁ACGG1AGGAPJG 481 GATGTTGATA CA 9 检测方法9.1 主要生物学性状检测9.11 抽样方法应按G/T18654.2的规定执行。9.1 2 性状测量用游标卡尺测量壳径和壳高(具体W!IJ:!.il方法如图1)，精确到0.01mm。用电子天平视iiJ:体重，稍确到0.01 go 9
12、.2 产卵量测定将0.5mol/L的氮化钥I溶液1mL2 mL注射人性腺发育成熟的雌性中间球海胆体腔内，将海1m反口商向下放)1于盛满海水的锥形瓶瓶口，使其生殖孔浸入海水中，使卵子排出。卵子排放完成后，将卵液SC/T 2094-2020 定容。用I贝管吹匀卵液，在几个不同点I驭等盘卵液放在小烧杯中，用细胞计数法计算卵子密度。重复取样3次以上得出卵子密度平均值，总卵盘=卵液总体积卵子密度平均值。9.3 染色体和核型检测9 3.1 染色体标本的制备a)在授ffi之前，将成熟卵子放置在2g/L的三氮1些中处理20min;b)用正常精子授精去膜处理后的卵子;c)取发育至虫草胚期胚胎，2000r/min
13、离心4min,O.4 g/L秋水仙索21.C水浴处理55min;d)0.075 mol/L的KCl溶液低渗46min;e)-20.C预冷的卡诺固定;在甲醉:冰陈酸=3:1)固定3次，每次15min，后一20.C过夜;f)50%冰醋酸解离，吹打2min;g)冷滴片法滴片;h)自然干燥以后用10%Giemsa染液(pH=6.8)染色45min(Giemsa染液的配制方法见附录A);。自来水冲洗，自然干燥后镜检。9.3.2 核型分析按照GB/T18654.12的规定执行。9.4 分子遗传学特征9.4.1 DNA提取11显笛足或齿间JUl100mg剪碎后，DNA提取试剂盒或常规盼氯仿方法提取总DNA.
14、9.4.2 号|物序列F:5-GAACTGGCTGAACTATCTATCCC-3;R:5-GAAGTACGCTCGTGTATCAACAT-3。9.4.3 反应条件PCR反应条件为:94.C变性5min;94.C变性30s，55.C退火305，72.C延伸1min，35个循环;72.C延伸5mnj40C保湿。PCR扩增反应液配方见附录B。9.4.4 片段回收、纯化与测序PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后，回收纯化目的片段，现序。10 判定规则被检样品符合第5章和第7章要求的，判定为合格。如果有一项不合格可复检，复检不合格的步1)定为不合格，复检合格的判定为合格。第8m为参考指标，被检样品COI基因序列
15、测!于结果与第8t序列比对，K2P遗传距离应小于2%。5 SC/T 2094-2020 A.1 Giemsa染液的配制称I驭 Giemsa粉0.5g、泊，研磨至无颗粒.匀，A.2 A3 6 该液可甲液，KI-I,乙液，Na，使用液(母液l附录A(规范性附录)Giemsa染液的配制方法粉置于研钵中，加入少盘甘然后，取出1m入甲醉，充分拌DNA;模板10倍缓冲液(含Mg2+)dNTP(2.5 mmol/L)引物FOOpmol/L)引物ROOpmol/L)Tq自由(5U/L)jJI超纯水配制为50L的反应体系。附录B(规范性附录lPCR扩增反应液50 ng100 ng 5L 4L 2L 2/,L lL SC/T 2094-2020 7 ONON-ZON LF 曰:/T 2094-2020 中国农业出版衬出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(11111政编码100125 网址www.ccap.COI)化学工业出版祖印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销9峰峰并去印张O.75 字数15千字2020年12月北京第l次印刷.,jj本880mmX1230mm 1/16 2020年12月第1版书号16109 8268 定价20.00元长版权专有侵权必究举报电话(010)59194261