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1、ICS 65.020.20 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准小麦抱囊线虫鉴定和监测技术规程NY/T 3533一2020Technical code of practice for identification and monitor of wheat cyst nematode 2020-03-20发布2020-07-01实施气:中华人民共和国农业农村部发布NY/T 3533-2020 I NY/T 3533-2020 小麦子包囊线虫鉴定和监测技术规程1 范围本标月1规定了小麦抱缆线虫鉴定和监测的术语和l定义、试剂和l设备、鉴定方法、监视l方法、调查记录。本标111适用于小麦禾谷泡缆
2、线虫(-Ie阳roderaavenae)和菲利普抱缆线虫(-1.fiLi卢)evi)(1甘鉴定及监测。2 规范性引用文件下列文件对于本文凡是不注日期的引用文件SN/T 1848植物SN/T 2757 3 术语和定义3.1 4.1 主要试剂171:糖、高岭土、4.2 主要设备4.2.1 标对l网筛4.2.2 生物显微镜,4.04.2.3 体视显微镜,10倍5 鉴定方法5.1 样晶采集-胃四日WJI版本适用于本文件。菲利普抱樊小麦等植株:.u现黄化、矮化,根系侧根丛生等症状,怕穗弗l根部出现白色雌虫,采集根系和l根网土壤样品进行室内鉴定.危害症状参见附录八。5.2 形态学鉴定5.2 1 二龄幼虫和
3、抱囊分离分离样品中的二龄幼虫和于包囊。分离方法参见附录Bo5.22 标本制作按SN/T1848规定的方法制作。5.2 3 显微镜观察在显微镜下观察泡缆、二龄i;JJ虫、雌虫和J4i虫的形态特征,拍照。NY/T 3533-2020 5.24 形态学鉴别特征5.2.4.1 禾谷子包褒线虫于包装E朽棕形,颈较长。阴门锥突tH,J,民孔为双J民孔,近囚形,有泡状突,元下桥。雄虫线形,体环htt楚,但tl线4条,两端饨,口钊基部球圆形。二龄幼虫.线形,体环清楚,但IJ线4条J雷区较高,前端阴,编缩较明显,口告Im壮,基球大,前缘平或稍11。尾囚钳形注明尾较长。5.2.4.2 菲利普抱rM线虫于包缎拧楼形
4、,阴门锹突出,J民孔为双!民孔,近马蹄形,泡状突发育良好,有下桥。雄虫属区具有4个头环,突tH0口针强壮,基球大。伽j线4条。尾短平滑.二龄幼虫,Ji1f部统缩,2个微弱的头环.口针强壮,基球大.侧线4条。尾稍钝。5.2.4.3 禾谷抱囊线虫和菲利普抱察线虫形态差异2 fl线虫形态相似,王要区别见表1.具体tlYi述参见附录八。表1禾谷于包w线虫和菲利普于包裹线虫主要形态差异非l名阴门膜孔泡状尖阴门裂下桥禾谷抱缆线且L斗1,利齿抱蜒线虫双脱孔,近四形|发达,黑棕色,数Jit多.Jf状各异1 12m-13ml 元下桥双脱孔,似马蹄形|较弱或中度发达.放i(少呈明显球形17m-IIm 1-F桥发行
5、良好5.2.5 结果判定按照5.2.4的规定判定。6 监测方法6.1 系统调查6.1.1 调查点设定选择发病的小麦J也块2块-3块,每块666.7m,作为系统调查固定观察点.6.1.2 于包裹及卵量调查在小麦播种前或小麦收jIfIJ后,采用Z形采样法,取5cm-20 cm的根际土攘,每块采集25个点,将所取土样充分混合后,取1kg左右装入样品袋,证明采样时间、地点等,室内摊开自然风干。称*200 g风干土样,宜采用简易漂浮法(参见附录B巾B.2)分离土锁中抱缆,在体视显微镜下计数。随机挑*、挤破10个抱袋,iM备卵悬浮液,计负每克土样巾的卵毡,调查结果记入附录C巾的表C.1.6.1.3 发育进
6、度调查冬麦区,小麦11商后,冬前每15d调查1次,翌春返青J圳、拨节期和扬花则各调查1次。春麦区,在IWJ、拔节WJ和l扬花Jj各调查1次。每次挖l仅10株小麦,将所采麦茵的根剪下后擦洗干净,采用酸性品幻法染色,方法参见附录D.在体视显微镜下观察根内线虫的发育进度,结果记入表C.2.6.1.4 白雌虫调查6.1.4.1 调查方法小麦扬花一泌浆JYJ采用5点i驭样法。每点10株,计数单株向雌虫数.6.1.4.2 严重度分级2 根据小麦拟l秘扬.U饲根部白雌虫的数间,将小麦抱缆线虫病发生程度分为5级。0级无泡蝉,无病,l级极轻微感染(每株白雌虫1个-5个);2级.轻微感染(每株白雌虫6个-20个)
7、;3级中度感染(每株白雌虫20个-40个);4级:严重感染(每株白雌虫40个以上。6.1.4.3 病情指数病悄指数按式(1)计算。式中.I 病情指数;di一一严重皮级值,1;一一各级病株敛,单位为株;P 调查总株数,单位为株,D 严重度最高级别值.6.1.4.4 结果记录记人表C.30 6.2 大田普查6.2 1 普查时间7 NY/T 3533-2020 7丁(d;X I;)J=二=一一一一-一X100.(1)P X ,调查总 回块3 NY IT 3533-2020 附录A(资料性附录)小麦J包褒线虫危害症状和形态学特征A.l 危害症状小麦子包缆线虫病的田间症状表现为:受侵染的小麦植株瘦小.n
8、l片泛货发白,元光泽川成部叶片边缘发!Ji.!U-I-脉淡绿,严重者萎7号死亡,分l!较少或不分攘,麦苗稀疏;与植物缺JI巴、也是水等资养不良的症状十分栩近。同时,受侵染的极株,根部组织严重损伤,主根严重退化,但t根增多,从而加剧l了缺水、缺JI巴等营养不良症状。受侵染的小麦根百I侧根丛生,通常阜乱JIj(状或钢丝球状。在小麦的圳和ml和扬花!vJ根系上扩fH析可见II色于包线。A.2 形态学特征A.2 1 禾谷抱襄线虫A.2.1.1 测量蚊据雌虫体l王550ltn770tn,体宽360m500m,剧UIl.,体i主1070ml590m,体l主/体宽为3255,体长/食道处体宽为712,体i主
9、/食道至食道JI虫的距离为5.56.8,尾长40m50m,口针27m31m,引带33m38m,二龄幼虫:体长520m61Om,体宽20m24m,尾长45m70m,口针24m28m,A.2.1.2 形态描述雌虫:中j棕形,颈部和阴门依明显。j霞区有环纹,6个唇瓣会合,有1个唇盘,口告|直或赂呈弓形,口针基球囚。中食道球圆形且有明显的瓣门.阴门裂12m13m,阴门处有胶质状的挤ffi物,但挤lI.1l村民少有卵。角质表而有锯齿形的皱缩的纹饰。Ji.品层明显,在于包挺呈11青绿色时脱去。|归门锥大部分被无色透明的阴道结构占满,泡状突明显且聚集在阴门锥下,双版孔,J民孔最近圆形。于包线:平均大小为71
10、0mX500m.成熟于包数由白色变为漏包n才不经历黄色阶段.雄虫知虫形.体环纹明显,侧区有4条侧线.J昌区Ihll,编缩,有4条6条环纹(通常5条)。头架深度自化,有I归j茧的外缘。头小体不明显,位于唇区后lJijl1个2个体环及后部6个7个体ff、处。口针前部的锥体部分迅速变尖,通常短于口针氏度的一半。口针基球囚形,4品CLC 画。越战A 通常有1个平的向后倾斜的前表面;背食道l尿开说明l口在口针基球后3m6m处。中食道球椭阻l形,具明显瓣门。食道覆盖肠的脱侧和侧!血,手II,lJ!):孔在食道与j肠连接处附近.半月体明显.2A一一抱囊,日阴门惟,C一-雄虫;k部,D一一雄虫食迫眼,E雄!.
11、!.h:部:F一一二龄幼虫头部,G.I一二龄i;JJ虫尾部.个3个体环l王.通常位于111泄孔ltr5个6个注引自Williamsand S刷即.1972.体环处,但有时仅在其前1个2个体环处.半图A.l禾谷抱褒线虫形态特征NY/T 3533-2020 月小体不明显,在排泄孔后6个7个体环处。交合刺弓形,腹丽有一中等大小的凸缘和l一具缺刻的末端,两者形成一长的窄管。引带简单,稍弯山。尾末端通常卷曲。二龄纣j虫蜿虫形,尾端聚尖。唇区囚,草草缩,有2条4条环纹。体环明显。侧区宽约为体宽的1/4,侧线4条,外侧带网形纹。口针发达,口针基球大,其前那扁平或凹陷;前翻倒!体不到口针长度的一半。中食道球囚
12、,肌肉质发达,具有一大的瓣门。尾i王为!II门处体宽的3倍4.5倍;透明尾i王35m45m或约为1.5个口制长。骨!II尾j尿孔形明显,恰好位于月门后。A.2.2 菲利普抱亵线虫A.2.2.1 测量数据雌虫体仅490m830m,体宽340m620m.雄虫体长1160m1 400肌体L,/体宽为3746.2,体长/食道处体宽为8.39.5,尾长40m50 Jim,口告|长26.6 lm28.7m,引带i王28m34m.二龄幼虫体l主341m581m,体宽21m25m,尾i王49m63m,口号1-1主21.7 Jim 30.8m.A.2.2.2 形态描述子包浆。成熟的于包缎呈朽橡状,阴门锥突出,表
13、面具有白色的亚晶层,外壳有Z形纹,浅棕色变为完棕色,透过表皮能看到内部的卵,双膜孔,膜孔为马蹄形,有下桥和发育良好的泡状突,白色至中棕色,近球形。阴门裂的长度为6.0mlO.8 m,阴门桥的宽度为7.2m13.1m,膜孔长38.4m58.1m,半膜孔长19.3m32.0 Jim。阴门平iI宽的比值1.72.8。下桥长度53m110m,宽4.0 Jiml1.3m。雌虫白色,拧橡形,有突:J:I颈和1阴门仰,体表围绕颈部和阴门部位有发散的J;):链纹,头部溢缩,有一个方形突出的唇挠,口告|基部球,卵巢成对且复杂。外阴呈狭缝状,而l后突出。八200盯1D F 10m 10m lO!lIn 说明A一一
14、-于i且囊,F 二龄J虫食迫腺,B、C阴门甘EG一一雄虫腿部,D 二龄幼虫全部,川崎虫头部;E 二龄!J血尾部,l 雄虫世道脱.注引向Madzhidov町1981守1985.图A.2菲利普抱察线虫形态特征10m 5 NY/T 3533-2020 雄虫,J昌区有4个头环,突出。口针强壮,基球大。侧区占身体的1/3。侧线4条。尾短平泊。二龄幼虫:体民341m-581m,唇部缝缩,3个微弱的头环,口针强壮,基球大,长度21.7m-30.8mo侧线4条。尾稍饨,尾长49m-63m,透明尾长30m-41m,占整个尾长的50%以上,头部到中食道球的距离为59m-79!-,m。6 NY/1 3533-202
15、0 附录B(资料性附录)小麦于包囊线虫的分离方法B.l 浅盘法分离二龄幼虫B.1.1 将采集的土壤样品铺子干净的浅瓷盘内,充分混匀备用。B.1.2 将塑料筐或不锈钢网筛放入配套的浅盘中,筛网上放置一层面rlJ纸,然后H1:ill:杯盘取100mL土样均匀锁在面巾纸上,在浅盘中加水至刚刚浸没土攘,宜于室温条件下放置24 h,防止水分完全蒸发,随时补水。B.1.3 将浅盘中的水通过0.0308mm网筛倒出,再用弱水流冲洗将线虫混合液聚集在网筛的边缘。B.1.4 用洗瓶小心将线虫混合液收集至烧杯中,7布置后,去除上消液,即可得到大量二龄幼虫。B.2 简易漂浮法分离土壤中拖延B.2 1 待分离土样风干
16、后,充分温匀后,200g土攘jJU人5L 71.中充分搅拌,使抱蝶激浮,停止搅拌后,静1:30 s-60 So B.2 2 将桶上层的悬浮液经过0.9mm网筛倾倒人0.2mm网筛,用强水流冲洗0.9mm网筛上的残渣,收集0.2mm网筛上的粗样品。B.2 3 冲洗0.2mm网筛上的收集物后,淋洗fJJ告l有滤纸的漏斗中,滤去水分,待滤纸晾干后Il可在体视显微镜下观察,将iI纸上的抱我用毛刷等转移到另一句l有湿泌纸的培养I皿叶:进行鉴定和计数。7 NY/T 3533-2020 附录C(规范性附录)小麦抱囊线虫病调查资料表册C.1 小麦抱囊线虫病抱褒及卵量系统调查见表C.l。训查日JJ训查地B且C.
17、2 Jj、训查日WJ调查地点见表C.30 表C.3调查|小麦|插种日WJI 品种|日JJI 数株株iiI.j查地点C.4 小麦抱襄线虫病大田臼雌虫发生情况普查见表C.40 B 个o I 1 I 2 I 3 I 4 病自指数备注NY/T 3533-2020 表C.4小麦抱囊线虫病大回自雌虫发生情况普查统计表训查发病发病不同级另IJ株数调查旧块小麦4串串J调查株串l二I雌虫数株出自古?面积面积株数日JJ类型hm2 hm2 品种日WJ株株个2 3 4 指数O 平均病凶率平均病株率%调查地t且1丁调查单位1 如i查人9 NY/T 3533-2020 D.1 染色液配置D.1.1 5.25%NaOCl1
18、容液。附录D(资料性附录)酸性品红染色法D.1.2 酸性品红储存液,3.5g酸性品幻浴于250mL醋酸,待完全溶解后,用蒸偏水定容至1L,D.1.3 酸性甘油液.20 mL30 mL纯甘ilh中滴加2滴3滴5mol/L盐酸浴液。D.2 染色步骤D.2.1 将洗净的根系组织放入烧杯内.JJU人50mL蒸饱水以及10mL 5.25%NaOCI j容液。D.2.2 用玻璃桦搅拌根组织5min,取:3:根组织用流水冲洗1min,然后将根转入到100mL的蒸饿水中,浸泡15min,D.2.3 将根组织转入另一个盛有30mL50 mL蒸偏水的烧杯中,力u入1mL酸性品红储存液,微波炉中煮沸30s,D.2.4 冷却l后,根系用流水深洗,)1于酸性H泊中褪色。D.2.5 显微镜下观察。10 ONON-凹的的的HFZ中争4中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)提争夺网划一)I京印刷j一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销(11鹏政编码1001254吨印张I字数20千字2020年6月北京第I次印刷等开本880mmX1230mm 1/16 2020年6月第l版书号16109.8110 定价24.00元只版权专有侵权必究举报电话(010)59194261 NY/T 3533-2020