《GA∕T 1632-2019 法庭科学 血液、尿液中缩节胺和矮壮素检验 液相色谱-质谱法(公共安全).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《GA∕T 1632-2019 法庭科学 血液、尿液中缩节胺和矮壮素检验 液相色谱-质谱法(公共安全).pdf（10页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 血液、尿液中缩节胺和矮壮素检验 液相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for mepiquat and chlormequat in blood and urine samplesLC-MS -发布-实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国刑事
2、技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC 179/SC1）提出并归口。本标准起草单位：公安部物证鉴定中心，浙江省公安厅，司法部司法鉴定科学技术研究所，江西省公安厅。本标准起草人：王炯、张云峰，傅得锋、宣宇、王洪宗。GA/T 1 法庭科学 血液、尿液中缩节胺和矮壮素检验 液相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学血液、尿液中缩节胺和矮壮素的液相色谱-质谱（LC-MS）检验方法。本标准适用于法庭科学血液、尿液中的缩节胺和矮壮素的定性分析和定量分析。其他可疑样品中缩节胺和矮壮素的定性分析和定量分析可参照使用。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引
3、用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对血液、尿液样品样进行提取及净化，采用液相色谱-质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，
4、试剂包括：a)乙腈（色谱纯）；b)甲醇（色谱纯）；c)甲酸（色谱纯）；d)甲酸铵（色谱纯）；e)氨水；f)标准溶液：1)1.0mg/mL 标准物质溶液：根据缩节胺和矮壮素标准物质的纯度，各称取适量，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 缩节胺和矮壮素标准物质溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6个月。或采用市售标准溶液；2)0.1mg/mL 混合标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的缩节胺和矮壮素标准物质溶液各 1.0mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的混合标准工作溶液均由 0.1mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到；GA/T
5、 2 3)10.0 g/mL 缩节胺和矮壮素单一标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的缩节胺和矮壮素标准物质溶液各 0.1mL，用甲醇定容至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0g/mL 的单一标准工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均由 10.0g/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。5.2 材料 材料包括：a)具盖离心管；b)具塞玻璃试管；c)固相萃取柱：Oasis WCX 固相萃取柱或其他等效固相萃取柱，使用前依次用 3mL 甲醇、3mL pH 值为 8 的氨水活化；注：Oasis WCX
6、柱是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。d)有机系微孔滤膜：0.22m。6 仪器和设备 仪器和设备包括：a)液相色谱-质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆质量分析器；b)固相萃取装置；c)离心机；d)移液器；e)振荡器。7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 固相萃取 准确移取血液、尿液检材样品 1mL 于具盖离心管中，用 4 倍体积pH值为 8 的氨水稀释，振荡10min，8000r/min 离心 30min，上清液转移至已活化好的固相
7、萃取柱中，控制上清液过柱流速为 0.5mL/min，依次用 3mL 水、3mL 甲醇淋洗，弃去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱 2min，精密吸取 3mL甲酸/水/乙腈（体积比 2:50:48）混合溶液洗脱，收集洗脱液，用有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供仪器分析。7.1.1.2 质控样品的制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加缩节胺或矮壮素标准物质，作为添加样品（添加样品浓度为20ng/mL），与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。7.1.2 仪器检测（液相色谱-质谱条件）以
8、下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：GA/T 3 a)色谱柱：BEH HILIC柱（2.1mm 50mm，1.7m）或等效色谱柱；注：BEH HILIC 柱是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)柱温：30；c)流动相：A：乙腈，B：5mmol/L甲酸铵水溶液（甲酸调pH值至3.5）；d)洗脱方式：梯度洗脱，梯度见表1；e)流速：0.5mL/min；f)进样体积：2L；表 1 梯度洗脱条件 时间 min 流速 mL/min A B-0.5 90%10
9、%1.5 0.5 50%50%2.2 0.5 50%50%2.5 0.5 90%10%4 0.5 90%10%g)离子源：电喷雾电离源（ESI）；h)检测方式：正离子；i)扫描方式：多反应离子监测（MRM）；j)雾化气、脱溶剂气：氮气；k)碰撞气：氩气；l)离子源温度：150；m)雾化气温度：350；n)脱溶剂气流量：750L/hr；o)锥孔气流量：50L/hr；p)MS参考条件（定性离子、定量离子、锥孔电压、碰撞能）见表2。表 2 MS 质谱条件 名称 定性离子对 定量离子对 锥孔电压 V 碰撞能 eV 矮壮素 122.058.8 122.058.8 34 18 122.062.9 18 缩
10、节胺 114.058.0 114.098.2 44 20 114.098.2 20 7.1.3 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2 的分析条件进样分析。7.2 定量分析 GA/T 4 7.2.1 样品提取 移取血液等液体检材样品1.0mL5.0mL两份，按7.1.1进行操作。另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加缩节胺和矮壮素标准物质，作为添加样品（添加样品中目标物含量应为检材样品中目标物含量的(100 50)%），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器分析。7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件
11、按7.1.2规定的条件进行。7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按7.1.2的分析条件每个样品进样分析23次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于6次。7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品提取液平行进样 23 次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（1）计算含量：添样添样添样VMAVMAW=.(1)式中：W检材样品中目标物的含量，单位为微克每克（g/g）或微克每毫升（g/mL）；A样检材样品提取液中目标物峰面积平均值；M添添加样品中目标物添加量，单位为微克（g）；V样检材样品的定容体积，单位为毫升（mL）；A添添加样品提取液中目标物
12、峰面积平均值；M样检材样品的取样量，单位为克（g）或毫升（mL）；V添添加样品的定容体积，单位为毫升（mL）。7.2.3.2 计算相对相差 记录两份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（2）计算相对相差：%10021=XXXRD.(2)式中：RD相对相差，用百分比（%）表示；X1、X2两个检材样品平行定量测定的含量数值；X两个检材样品平行定量测定含量的平均值。8 结果评价 8.1 定性结果评价 GA/T 5 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与标准溶液一致，且
13、离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表3规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。表 3 离子丰度比的最大允许相对偏差范围 离子丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 20 25 30%50%8.1.2 阴性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。相关图谱及检出限参见附录 A。8.2 定量结果评价 如果目标物含量的RD20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠。应按7.2重新提取检验。GA/T 6 A A 附 录 A（资料性附录）缩节胺和矮壮素的相关图谱和检出限 A.1 缩节胺的分子结构图 缩节胺的分子结构图见图 A.1。N+图 A.1 缩节胺分子结构 A.2 缩节胺液相色谱质谱图 缩节胺液相色谱质谱图见图 A.2。图 A.2 缩节胺液相色谱质谱图 A.3 矮壮素的分子结构图 矮壮素的分子结构图见图 A.3。GA/T 7 ClN+Cl 图 A.3 矮壮素的分子结构 A.4 矮壮素液相色谱质谱图 矮壮素液相色谱质谱图见图 A4。图 A.4 矮壮素液相色谱质谱图 GA/T 8 A.5 检出限 LC-MS 分析，检出限为 10ng/mL（g）。_