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1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准?菜豆疫霉检疫鉴定方法?发布?实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书?中华人民共和国出入境检验检疫行?业?标?准菜豆疫霉检疫鉴定方法?中 国 标 准 出 版 社 出 版北京市朝阳区和平里西街甲?号?北京市西城区三里河北街?号?总编室?网址?中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷?开本?印张?字数?千字?年?月第一版?年?月第一次印刷印数?书号?定价?元书书书前?言?本标准按照?给出的规则起草?本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口?本标准起草单位?中华人民共和国深圳出入境检验检验局?深圳市检验检疫科学研究院?中华人民共和国北京出入境检验检
2、疫局?本标准主要起草人?程颖慧?王颖?高文娜?章桂明?汪莹?菜豆疫霉检疫鉴定方法?范围本标准规定了利马豆?上的菜豆疫霉病菌?的检疫和鉴定方法?本标准适用于对菜豆疫霉寄主的种子和植株的检疫?规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的?凡是注日期的引用文件?仅注日期的版本适用于本文件?凡是不注日期的引用文件?其最新版本?包括所有的修改单?适用于本文件?进出境植物种子检疫规程?进出境植物及植物产品检疫抽样?原理?分类学地位英文名?学名?菜豆疫霉病菌属真核生物?藻菌界?卵菌纲?腐霉目?腐霉科?疫霉属?病原菌传播方式以卵孢子或病残体在土壤里越冬?种子或豆荚中形成的卵孢子越冬后可作为初侵染源?在湿
3、度大的条件下?病菌产生大量孢子囊?孢子囊借助风雨传播?鉴定原理根据病原菌的分布?寄主范围以及在寄主植物上的为害症状?参见附录?形态特征等?应用显微镜等相关仪器对菜豆疫霉进行检疫鉴定?仪器用具和试剂?仪器用具体视显微镜?显微镜?烘箱?灭菌锅?超净工作台?光照培养箱或光照培养架?紫外灯管?手持放大镜?滤纸?烧杯?培养皿?试管?三角瓶?镊子?手术刀?载玻片?盖玻片?量筒?酒精灯?吸管?试剂及培养基?试剂无菌水?次氯酸钠?培养基利马豆培养基?利马豆?加入?蒸馏水煮沸?后去除残渣?加?琼脂?充分溶解后定容为?混匀后分装于三角瓶中?高压灭菌?现场抽样按照?及?规定进行取样?实验室检疫?症状检查肉眼或体式显
4、微镜下检查利马豆样品表面病原菌及病斑情况?保湿培养?种子保湿培养将检验样品用有效成分为?的次氯酸钠溶液表面消毒?后?灭菌水洗涤?次?放在垫有?层已灭菌湿滤纸的直径?培养皿中?每皿?粒?在?条件下放置?后?转入?冷冻?转至?培养箱或培养架上培养?黑暗和紫外?交替培养?从培养第?天后开始观察种子上是否出现白色菌丝或霉状物?新鲜植物组织保湿培养取寄主植物组织?冲洗掉表面的泥土杂物?有效成分为?的次氯酸钠溶液中表面消毒?后?灭菌水冲洗?次?放在垫有?层灭菌湿滤纸的培养皿中?转至?培养箱或培养架上培养?黑暗和紫外光照?交替培养?观察植物组织表面是否出现白色菌丝或霉状物?病原菌纯化挑取保湿培养后的疑似菌丝
5、置于利马豆培养基上?黑暗条件下培养?培养?周后?长成直径?的放射状菌落?制片?进行形态学检测?形态学特征观察在显微镜下观察病原菌形态学特征?鉴定特征受侵染的利马豆豆荚在湿度大的条件下长满白色棉絮状菌丝?同时产生大量的孢子囊?病健交接处有明显的淡红色的边缘?受侵的豆荚逐渐坏死?干瘪最终皱缩?菌丝分枝?不产生厚垣孢子?孢囊梗简单?没有假轴式分枝?长?平均?孢囊梗顶端膨大形成孢子囊?孢子囊具半乳突?椭圆形至柠檬形?基部平截?具短柄?孢子囊没有层出现象?同宗配合?穿雄生?雄器扁球状?包藏在产卵器基部?藏卵器近球形?直径?平均?在利马豆组织上孢子囊?平均?长宽比约为?在利马豆培养基上?孢子囊稍小?平均?
6、在培养基和植物组织上均能形成卵孢?子?卵孢子浅黄色?菜豆疫霉与利马豆上的辣椒疫霉以及致病疫霉的比较参见附录?结果判定如果病原菌的症状特征以及分离物的各种形态特征与第?章中描述的菜豆疫霉病菌的特征相符合?可判定为菜豆疫霉病菌?样品与原始数据保存如发现菜豆疫霉病菌?该样品至少保存?年?以备复验?谈判和仲裁?保存期满后?需经灭菌处理?样品检测结束后?其原始记录单和检验报告或证书需归档?妥善保管?以备复验?谈判和仲裁?菌种保存分离到的菜豆疫霉病菌?转入利马豆试管斜面培养基上?置于?黑暗条件下保存至少?个月?以备复验?谈判和仲裁?附?录?资料性附录?菜豆疫霉病菌的分布?寄主及症状特征?分布美国?波多黎各
7、?墨西哥?俄罗斯?意大利?刚果?扎伊尔?菲律宾?斯里兰卡?寄主利马豆?症状特征受侵染的利马豆豆荚在湿度大的条件下长满白色棉絮状菌丝?同时产生大量的孢子囊?病健交接处有明显的淡红色的边缘?受侵的豆荚逐渐坏死?干瘪最终皱缩?附?录?资料性附录?三种疫霉病菌的特征比较表表?三种疫霉病菌的特征比较表比较项目?症状特征?受病原菌侵染的豆荚上长满白色棉絮状菌丝?同时产生大量的孢子囊?病健交接处有明显的淡红色的边缘?受侵的豆荚逐渐坏死?干瘪最终皱缩?受辣椒疫霉病菌侵染的豆荚?气生菌丝不发达?菌丝和孢子囊紧贴在豆荚表面?病健交接处没有红色的边缘?在利马豆上未见报道厚垣孢子?不产生厚垣孢子?厚坯孢子少见?不产生
8、厚垣孢子孢囊梗?简 单?没 有 假 轴 式 分 枝?长?具 假 轴 式 分 枝?长?孢囊梗分枝不规则孢子囊?孢子囊没有层出现象?孢子囊具半乳突?椭圆形至柠檬形?基部平 截?具 短 柄?孢 子 囊 大 小?长宽比约为?孢子囊有层出现象?孢子囊具乳突?长椭圆形?孢子囊具短柄?孢 子 囊 大 小?长宽比约为?孢子囊有层出现象?孢子囊具半乳突?脱落的孢子囊具短柄?孢子囊大小?最大?有性阶段?同宗配合?穿雄生?雄器扁球状?包藏在产卵器基部?藏卵器近球形?直径?平均?卵孢子浅黄色?平均直径?异宗配合?雄器穿雄生?藏卵器近球形?平均直径?卵孢子平均?异宗配合?雄器穿雄生?藏卵器近球形?平均直径?卵孢子未满器?平均直径?参?考?文?献?