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1、ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 2952一2016棉花黄萎病抗性鉴定技术规程Technical specification for evaluating resistance to verticillium wilt of cotton 2016-10-26发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T 2952-2016 刚昌本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准根据中华人民共和国种子法机主要农作物品种审定办法等有关规定和棉花品种黄萎病抗性鉴定需要制定。本标准FR农业部种子管理局提出井归口。本标准起草单位:全国农业技
2、术推广服务中心、中国农业科学院棉花研究所、江苏省农业科学院、石河子农业科学研究院。本标准主要起草人:金石桥、冯自力、郭利磊、朱荷琴、李志芳、冯鸿杰、谷铁城、林玲、赵建军、赵丽红、师勇强、杨付新、许乃银、赵淑琴、曲辉英、霍晓妮、简挂良、王瑞清、钟文、刘桂珍、宋锦花、高增尚、陈蔡隽、:X1J金山。I NY/T 2952-2016 棉花黄萎病抗性鉴定技术规程范围本标准规定了棉花黄萎病(病原菌Verticilliumdhliae Kleb.)抗性的鉴定技术方法和程序。本标准适用于棉花黄萎病抗性鉴定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件
3、。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 4407.1经济作物种子第1部分:纤维类NY/T 1302农作物品种试验技术规程棉花3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 病株率rate of infected plant 发病植株数占全部调查植株数的百分率，记作RI。3.2 病情指数disease index 发病植株的总病级数与全部调查植株的理论最高总病级数的比较相对数，记作DI。3.3 病情指数校正系数correction coefficient of disease index 标准病情指数(50.0)与当次鉴定感病对照品种病情指数的比值，记作K。
4、3.4 相对病情指数relative disease index 病情指数与病情指数校正系数的乘积，记作RDI。4 鉴定设备和条件4.1 病原菌培养恒温摇床、恒温培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、冰箱、铝锅、电炉、培养皿、试管、剪子、慑子、广口瓶、酒精灯等。4.2 鉴定病固人工黄萎病圃应建立在能代表品种推广应用区域土壤气候条件、有利于黄萎病发生的地区;黄萎病发病期间土壤湿度保持在60%80%;正常年份感病对照的病情指数能达到50.0;病圃地势平坦，排灌方便，周围无房屋、树木等荫蔽和具有隔离设施。5 前期准备5.1 病原菌的选择与培养5.1.1 病原茵选择1 NY/T 2952-2016 根据所鉴
5、定品种推广应用区域，选择有代表性的优势菌系。5.1.2 病原菌培养在超净台上.将分离纯化的棉花黄萎病菌(参见附录:A)，从马铃薯琼脂培养基(PDA)平板上的菌落边缘挑取2mm2的新鲜菌块，接种到查比克液体培养基(NaN032.00 g，几HP011.00 g,KCl 0.50 g,MgSOl 7HzO O.50 g,FeSOI 0.01 g，在糖30.00g，用水定容至1000mL)中，置于250C下，150r/min,黑暗培养6d备用。制作玉米沙粒培养基，具体为将沙子和玉米掺按质量比11混匀，加入质量比12%的水，取300g装入1000mL的克氏瓶，0.1MPa，高压湿热灭菌30min，冷却
6、到室温备用。吸取上述液体培养的棉花黄萎病菌菌液1 5mL转遥函砸自翩翩幽监孟养基的克氏瓶中，随后放入到250C培养箱中静置培养7d。待黄萎病菌的商组.圈圈坠.T风干备用。5.2 病圃建立建造一定规格的水花的土壤。按45g/m2 病圃，再翻耕2遍3发病程度。如果发直至感病对照品5.3 病固维护6 鉴定程序6.1 试验材料的鉴定的棉花材(10年以上)未种植棉的菌种均匀地撒入圃发病均匀性及病在份数附件指刷AF冷6.3 田间管理播种后进行精心管理，度，以利于黄萎病的发生;注意整枝时施均匀一致，应符合NY/T1302的要求。6.4 病情的调查记载棉花播种出苗后，实时监测感病对照的发病情况，当感病对照病情
7、指数高于35.0时，进行第一次全面调查，以后每10d左右调查一次。至8月下旬或末次发病高峰，整个生育期调查次数不少于2次。感病对照病情指数低于35.0或高于65.0时，鉴定无效。在病情调查记载中(见附录B)采用5级法表述病情:O级棉株健康，无病叶，生长正常。1级棉株1/3以下叶片表现病状。2级棉株1/3以上，2/3以下叶片表现病状。的防治;保持田间的适宜湿胶等生长调节剂;各项田间管理措2 3级棉株2/3以上叶片表现病状，未枯死。4级棉株枯死。7 结果的计算7.1 病株率病株率(RJ)按式(1)计算。NY/T 2952一2016RI=生XIOO(1)式中:式中:K 式中:RDI一一相对病情指数;
8、DI一一被鉴定品种病情指数。计算结果保留1位小数。8 黄萎病抗性评价8.1 相对病情指数均值(2)(3)(4)棉花黄萎病为全生育期病害，应采用多次结果的平均值，将整个生育期多次(不少于2次)调查结果的相对病情指数算术平均值.作为供试品种的最终相对病情指数。3 NY/T 2952-2016 相对病情指数均值(ARDl)按式(5)计算。RDI;ARDI=-一一一 式中:ARDI 相对病情指数均值;RDI;一一第z次相对病情指数;-一整个生育期计算相对病情指数的次数。计算结果保留1位小数。8.2 抗性鉴定结论根据被鉴定品种的相对病情指数均值(ARDJ)的大小评定品种的抗性级别，并填写鉴定结果报告表(
9、见附录C)，抗性级别的划分标准见表1。表1棉花品种抗性级别的划分标准级别抗性类型英文缩写相对病情指数均值(ARDI)免疫ARDl=O 2 高抗HR 0ARDI，;10.。3 抗病R 10.0ARDI,;20.0 4 耐病T 20.035.0 4 NY/T 2952-2016 附录A(资料性附录)棉花黄萎病病原及症状A.1 病原菌的分类地位大丽轮枝菌(Verticillindahliae Kleb.)属真菌界(Fungi)，半知菌亚门(Deuteromycotina)，丝咀纲(Hyphomycetes)，丝抱目(Hyphomycetales)，淡色抱科(Moniliaceae)，轮枝菌属(Ver
10、ticillium)，大丽轮枝菌(V.dahliae Kleb.)。A.2 培养特性和子包子形态初生菌丝体元色，后变橄榄褐色，有分隔，直径2m4m。菌丝体常呈膨胀状，可单根或数根菌丝芽殖为微菌核。分生抱子呈椭圆形，单细胞，大小为(4.O 11.0)mX(1.74.2)m，由分生抱子梗上的瓶梗末端逐个割裂。空气干燥时，于包子在瓶梗末端聚集成堆;空气湿润时，则形成抱子球。显微镜下制片观察时，抱子即散开，只留下梗端新生出的单个子包子。分生抱子梗常由2个4个轮生瓶梗及上部的顶枝构成，基部略膨大、透明，每轮层有瓶梗1根7根，通常有3根5根，瓶梗长度为l3m18m，轮层间的距离为30m38m，4层的为25
11、0m300m。A.3 症状整个生育期均可发病。自然条件下幼苗发病少或很少出现症状。一般在3片5片真叶期开始显症，棉花现蕾后大量发病。初期植株下部叶片叶缘和叶脉间出现浅黄色斑块，后逐渐扩展，叶色失绿变浅，主脉及其四周仍保持绿色，病叶出现掌状斑驳，叶肉变厚，叶缘向下卷曲，一些植株叶片由下而上逐渐脱落。纵剖病茎，木质部产生浅褐色条纹。夏季暴雨后出现急性萎焉症状，棉株叶片突然萎垂，大量脱落。3 NY/T 2952-2016 病情调查表见表B.l。鉴定地点:材料调查名称株数O级调查人:年月日6 附录B(规范性附录)病情调查表表B.l病情调查表鉴定时间年月日各级病株数1级2级3级校核人:年月日第次调查病株率病情4级%指数审核人:年月日鉴定结果报告表见表C.1。送样单位样AJI编号材料名称月日2 3 感病对照抗病对照附录C(规范性附录)鉴定结果报告表表C.l鉴定结果报告表相对病情指数月日月日NY/T 2952-2016 相对病情抗性月日指数均值级别负责人:年月日7