《SN∕T 3312-2012 结核分枝杆菌γ-干扰素体外检测方法(出入境检验检疫).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《SN∕T 3312-2012 结核分枝杆菌γ-干扰素体外检测方法(出入境检验检疫).pdf（10页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、书书书?中华人民共和国出入境检验检疫行业标准?结核分枝杆菌?干扰素体外检测方法?发布?实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书?中华人民共和国出入境检验检疫行?业?标?准结核分枝杆菌?干扰素体外检测方法?中 国 标 准 出 版 社 出 版北京市朝阳区和平里西街甲?号?北京市西城区三里河北街?号?总编室?网址?中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷?开本?印张?字数?千字?年?月第一版?年?月第一次印刷印数?书号?定价?元书书书前?言?本标准按照?给出的规则起草?本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口?本标准起草单位?中华人民共和国厦门出入境检验检疫局?本标准主要起草人?杨坤宇?熊焕
2、昌?李庶甘?陈帆?陈慧?张毅?陈彬?苏水宽?贺骥?结核分枝杆菌?干扰素体外检测方法?范围本标准规定了国境口岸出入境人员感染结核分枝杆菌的?干扰素体外检测方法?包括检测对象?标本采集和处理?检测程序?结果判定和报告?本标准适用于对国境口岸出入境人员感染结核分枝杆菌的实验室检测?规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的?凡是注日期的引用文件?仅注日期的版本适用于本文件?凡是不注日期的引用文件?其最新版本?包括所有的修改单?适用于本文件?实验室?生物安全通用要求?术语和定义下列术语和定义适用于文件?结核分枝杆菌?引起结核病?的病原菌?结核病主要通过空气传播?可累及全身各个器官?尤以肺结核最
3、为多见?结核分枝杆菌复合群主要包括?结核分枝杆菌?牛分枝杆菌?非洲分枝杆菌?和田鼠分枝杆菌?临床上最常见的是结核分枝杆菌和牛分枝杆菌?结核分枝杆菌多数为杆状?稍弯曲?菌体宽度?菌体长度?多数在?少数菌体较长者可呈现螺旋状?染色良好的结核分枝杆菌菌体内能发现着色较深的异染颗粒?干扰素?脊椎动物受多种因素?如微生物?诱导产生的一种抗病毒蛋白质?干扰素可影响细胞的运动和免疫过程?也可干扰多种病毒的复制?结核分枝杆菌?干扰素体外释放试验?结核分枝杆菌感染人体后会刺激外周血细胞特异性地分泌?干扰素?结核分枝杆菌?干扰素体外释放试验就是利用这一现象发展起来的一种评估结核分枝杆菌感染的体外检测方法?选用结核
4、分枝杆菌的特异性抗原?和?体外刺激结核分枝杆菌感染者?包括临床结核患者和潜伏性结核感染者?的外周血细胞?使其?淋巴细胞增殖并释放?干扰素等细胞因子?再通过检测特异性释放的?干扰素?判断是否存在结核分枝杆菌感染?这种方法对于涂阳肺结核?涂阴肺结核以及肺外结核的检测均具有很好的效果?且不受卡介苗和环境中常见其他分支杆菌的干扰?生物安全防护要求实验室结构和设施?安全操作规范?安全设备及个体防护应符合?中二级生物安全防护实验室的要求?检测对象?入出境旅客及国际航行交通工具员工?在华外籍人员及港?澳?台胞?国境口岸食品?饮用水及公共场所从业人员?其他申请检测的人员?材料与试剂?仪器和器材?恒温箱?小型台
5、式离心机?自动洗板机?含波长?的酶标仪?级生物安全柜?一次性采血针?真空抗凝采血管?肝素钠?可调式微量加样器及配套带滤芯吸头?离心管?试剂测试培养管?本底对照培养管?阳性对照培养管?标准品?酶标板?酶标试剂?样品稀释液?标准品稀释液?浓缩洗涤液?显色液?终止液等检测所需的各种试剂的准备参见附录?样品的采集?处理与转运?样品的采集和处理使用真空抗凝采血管抽取?静脉血?立刻颠倒混匀?次以上?使抗凝剂充分溶解?在采血管上标注被采集人员姓名?采集时间和标本编号?样品的转运采集全血标本后?在?内?在室温?条件下由专人运送至实验室?实验室检测?刺激培养?北京万泰生物药业股份有限公司的结核分枝杆菌?干扰素体
6、外释放定量检测试剂盒?是适合的实例?给出这一信息是为了方便本标准的使用者?并不表示对这一产品的认可?以下检测过程和结果判定是以北京万泰生物药业股份有限公司生产的结核分枝杆菌?干扰素体外释放定量检测试剂盒?为例的?其他等效市售商品试剂盒也可采用?操作应严格按试剂盒说明书要求?进行?在采集全血标本后的?内?分别将?的全血标本加入测试培养管?本底对照培养管?阳性对照培养管等?种培养管中?将培养管上下颠倒?次以上?保证全血与培养液充分混匀?再将培养管直立放于?恒温箱中静置刺激培养?如采集全血标本的?内不能进行刺激培养?重新采集血液标本进行实验?刺激培养产物收集与保存全血标本经刺激培养?后?以?离心?吸
7、取上清液保存于?的离心管中?做好标记?该液为刺激培养产物?如果?内完成?检测?刺激培养产物在?中保存?如果?内不进行?检测?则刺激培养产物在?以下保存?检测?配液将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水?倍稀释?标准品配制用?的去离子水溶解标准品干粉?待标准品充分溶解后?轻轻混匀即得到?的标准品?然后用?的标准品稀释液倍比稀释?最终配制成浓度分别为?的?种不同浓度的系列标准品?编号将样品对应微孔按序编号?每个受试者的刺激培养产物?本底对照培养产物和阳性对照培养产物各标记?孔?系列标准品标记双孔?空白对照标记?孔?加样品稀释液和加样分别在相应孔中加入样品稀释液?加入待测样品或标准品各?轻轻振荡混匀?空白对
8、照孔不加样品稀释液和样品?温育用封板膜封板后?置?温育?加酶每孔加入酶标试剂?空白对照孔除外?轻轻振荡混匀?加酶之前不洗板?温育用封板膜封板后?置?温育?洗涤小心揭掉封板膜?用洗板机洗涤?遍?最后一次尽量扣干?显色每孔加入显色剂?液各?轻轻振荡混匀?避光显色?测定每孔加终止液?轻轻振荡混匀?选用酶标仪的双波长?进行检测?结果判定与报告?标准曲线和待测样品?干扰素含量的计算利用?软件或其他方法绘制标准曲线?如用?软件绘制标准曲线?其操作步骤如下?打开?软件?对应输入?值和标准品的?干扰素浓度值?点击?软件中的?图表向导?选择?散点图?点击?完成?绘制以?值为横坐标?对应的?干扰素浓度值为纵坐标的
9、散点图?右键点击散点图上的任何一点?选择?添加趋势线?点击?乘幂?再点击?选项?选择其中的?显示公式?和?显示?平方值?并确定?完成标准曲线的绘制?如?则标准曲线成立?如?则标准曲线不成立?重复实验?根据回归分析所得的公式计算待测样品的?干扰素含量?结果的判定?阳性结果的判定同时符合以下三个条件者?本底对照管的?干扰素含量?测试管的?干扰素含量减去本底对照管的?干扰素含量?测试管的?干扰素含量减去本底对照管的?干扰素含量?本底对照管的?干扰素含量?阴性结果的判定符合以下两个条件之一者?本底对照管的?干扰素含量?测试管的?干扰素含量减去本底对照管的?干扰素含量?阳 性 对 照 管 的?干 扰 素
10、 含 量 减 去 本 底 对 照 管 的?干 扰 素 含 量?本底对照管的?干扰素含量?测试管的?干扰素含量减去本底对照管的?干扰素含量?但?本底对照管的?干扰素含量?阳性对照管的?干扰素含量减去本底对照管的?干扰素含量?不确定结果的判定符合以下三个条件之一者?本底对照管的?干扰素含量?测试管的?干扰素含量减去本底对照管的?干扰素含量?阳 性 对 照 管 的?干 扰 素 含 量 减 去 本 底 对 照 管 的?干 扰 素 含 量?本底对照管的?干扰素含量?测试管的?干扰素含量减去本底对照管的?干扰素含量?但?本底对照管的?干扰素含量?阳性对照管的?干扰素含量减去本底对照管的?干扰素含量?本底对
11、照管的?干扰素含量?结果的报告?阳性结果的报告结果报告为?结核分枝杆菌?干扰素体外检测阳性?其可能的临床意义为?受检者感染结核分枝?杆菌的可能性极高?阴性结果的报告结果报告为?结核分枝杆菌?干扰素体外检测阴性?其可能的临床意义为?受检者感染结核分枝杆菌的可能性极低?不确定结果的报告与处理重新采集全血标本检测?如检测结果符合阳性结果的判定按阳性结果报告处理?如检测结果符合阴性结果的判定按阴性结果报告处理?如检测结果符合不确定结果的判定?结果报告为?结核分枝杆菌?干扰素体外检测不确定?不确定结果可能是由受检者的免疫功能低下引起的?建议采用影像学诊断?痰液涂片检测?分枝杆菌培养等其他方法进行检测?并根据检测结果判定受检者是否感染结核分枝杆菌?附?录?资料性附录?主 要 试 剂?测试培养管将重组结核分枝杆菌特异性抗原?和?各?溶解于?细胞培养液中?本底对照培养管?细胞培养液?每管?阳性对照培养管将?的植物凝集素?溶解于?的?细胞培养液中?标准品重组人?干扰素?冻干粉?每瓶?使用时以?去离子水溶解?然后用标准品稀释液稀释成不同浓度?酶标板重组人?干扰素单抗包被?微孔板?每孔?酶标试剂重组人?干扰素单抗标记?样品稀释液?小牛血清?标准品稀释液?小牛血清?浓缩洗涤液?吐温?显色液辣根过氧化物酶底物显色液?和显色液?终止液?