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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2857-2011 蜂瞒病检疫技术规范Quarantine protocol of diagnosis for acariosis of bees 2011-05-31发布2011-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局中华人民共和国:llr人抗检验检疫行收标叫I蜂瞒病检疫技术规范SI/T 2857-2011 关中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:10001;网址 电码:6852394668517548 巾同标准出版社秦皇岛印!llUJ.印li!兴开本88012301/16 印张o.75 字数17千字2门年11
2、月第一版2门年11月第一次印刷印数1-1600 兴书号155066 2-22643 定价18.00兀SN/T 2857-20门目。昌本标准按照GB/Tl.1-2009纳巾的规则起草。水标吁i参二号了|玉|际t9J物11/1组织()lE)(陆I1t9J物险断试验和|疫苗标汗i于册)(2009版)rjr2.2.1章介绍的方法。水标叫rk 1玉|家认ll认可监督管用委员会提山并归口。本标准起草单位:中华人民共和囚福建巾入垃检盼检疫局、中华人民共和囚重庆出入境检盼检疫局不1111r华人民共和11玉|浙IW入境检验检疫局。本标准主要起草人:郑盹、张J灯、李宋挝、李!但囚、何水如、赵兴不了。1 SN/T
3、2857-20门蜂蜗病检疫技术规范1 范围本标准规定了蜜蜂的蜂瞒病检疫规范。本标准适用于蜜蜂的蜂瞒病病原一一伍德氏甜腺瞒(Acara户口woodiRennie)的检疫与鉴定。2 规范性引用文件下列义们对于水文仲的应川是必不可少的。凡是注口出的寻|川义，仪注口闭的版水适川于水义件。凡是不注日期的应用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实驹丰用水土!I.十持和!JQ方法3 1自床诊断3.1 发病症状患蚌峭病虫辛肝的蚌箱门口市山王!I.!1多爬蚌，打开蜂箱耳lt.长巢牌，抖tPJ巢牌，使牌上蜜蜂飞起，观察蜜蜂的飞行。病蜂失去飞翔能力，不能高飞而落在地上爬行。有的
4、蜜蜂由于翅基部寄生有伍德氏町腺蜗，使得姐某;$受损，失去平衡，表现为尤规则地摆动，使姐甲.K形，.有的蜜蜂翅膀自行脱落o对于主冬日感染蜂!I如内的蜜蜂口J见体航较小，翅膀w斜，飞小高，在地|伞爬行，一小同一小网地聚集在凹处，翅膀无规则地摆动、颤抖和在李，腹部膨大并腹泻。3.2 病理变化伍德氏Nft腺瞒侵染蜜蜂可分为3个阶段:第一阶段蜜蜂气管病变不明显，依然呈银白色或米黄色Jf有巧、纹和弹性;感染第15d18dJ日，由于1前在气管内大量繁拙，耐状逐渐明白，气管卅始平淡茧色，布满小规则黑色斑点，弹性受到破坏此时为瞒侵染的第一-阶段;感染第27d30 d后，气管中充满f小同阶段的瞒，气管壁变成黑色失
5、去弹性变脆，此时为蜗侵染的第三阶段。由于伍德氏町腺瞒刺穿蜜蜂气管壁吸食血淋巴，染病的蜜蜂气管壁会渗出含黑色素的血淋巴。胸部气管的病变会破坏翅膀的运动肌肉.导致蜜蜂失去飞行能力o气管周围的肌肉和神经组织会被蜗破坏，新陈代谢发生改变.而且瞒的毒素还会造成蜜蜂飞翔肌麻痹，气管的硬化影响飞翔肌的作用。3.3 流行病学伍德氏E甘腺蜗在蜂群中的传播是通过蜂体间的互相接触和摩擦。受精的雌瞒从气管内爬出后，附着在蜂体的绒毛上。当蜂体互相接触时.蜗抱住另一只擦肩而过的蜂体绒毛并落到新蜂体的体表，先随翅基附近的颤动到达前胸第一对气门，再随气门的呼吸气流侵入开着的气门，进入气管。因此只要有一只具有产卵力的雌蜗侵入蜂
6、群，就会很快感染全群其他蜂体。伍德氏剧腺蜗在蜂群之间的传播主要是借助人工分群，购买蜂王与笼蜂以及盗蜂和迷巢蜂等造成。1 SN/T 2857-20门4 实验室诊断4.1 设备、材料和试剂4.1.1 设备光:1在微皖、林视眼微镜、大容量高心机和防护用具(包括虫草帽、防垫于套、养蜂i作服和时i炯器人4.1.2 材料测做尺和滤膜(孔径为O.iS mm)0 4.1.3 试剂试t用水W.1守介GB/T6682中三级水的规棉要求人冰附酸、廿油、乙醉、乳酸、氧轼化押、可1.甲某蓝、氧化的和中性树胶(或合成树胶)。4.2 采样、送样和处理采样时除应佩戴蜂帽、防垫子套、养蜂工作服等防护用品外，还应使用喷烟器镇服蜜
7、蜂。应主要采集蜂箱前3m范围内爬行、不能飞的蜜蜂，活蜂、濒死蜂或死蜂均可作为样品。如蜂群无典型的临床症状，可随机采集蜜蜂样品。收集的蜂样死亡时间不能超过2d3d，也可将蜂样置于4oc下保存(保存时间不超过2iSd)或在一200C下保存(保存时间不超过56d)。活蜂丰口濒死蜂应用乙醇致死或-200C下冷冻致死。蜜蜂样品在Oudemann氏溶液(配方见附录八)中可以长期保存o4.3 直接镜检法在每群蜂群中采集200只蜂样，从胸部以上除去蜂的翅和腿O将躯体置于25mL水中，以10000 r/mi丑闻质3次制成悬液，每次数秒，加入过忱的水。悬液经滤膜(孔径为0.8mm)过滤后，滤油用水悬浮至50mL，
8、悬浮液经1500g离心5min，弃去上清液，在沉淀的碎片中加入几滴未经稀释的乳酸静置1min，消化掉肌肉纤维后，置于盖玻片上，在体视显微镜下观察。4.4 解剖镜检法从可疑蜂群中采集50只蜂样，将蜂体脚朝上、背朝下仰卧固定，用小镇子去掉头和前脚，并除去颈四周的颈片，打开暴露气管，查看离气孔最近的气管，检查是否有伍德氏酣腺蜗。蜜蜂轻度感染蜂蜗病时，往往发生在气门开口附近可观察到伍德民酣腺捕;重度感染时，可在清晰的蜜蜂气管到暗棕色的蜜蜂气管中见到影子或暗色物体.陈旧和重度感染可使气管变为棕色到黑色。在蜂体的中部两腿到前腿基之间切开胸腔，制成薄圆片，清理肌肉组织后置于iS%的氢氧化饵溶液(自己方见附录
9、A)中，于60oC 70 oC下浸泡20日l1n或不加热过夜浸软o在体视显微镜下，选用适宜的放大倍数(一般选用18倍20倍)检查第一对气管。也可将气管移至另一载玻片上，加滴甘油或水后采用适宜的放大倍数进行观察O通过透明的气管壁可以很容易地看到椭圆形的瞒虫体(参见附录B)0 4.5 染色镜检法取可疑蜂样将蜂体脚朝上、背朝下仰卧固定，用小慑于去掉头和前脚，在两前腿基部向后通过膜状区横向切开，在前翅基部和中间一对腿向前再横向切一刀O取切片(约1mml.5 mm厚)置于iS%氢氧化拥溶液中，轻轻搅拌，加热至接近沸点约10mi口，直至内部软组织溶解、清除句但应防止切片破碎O过滤回收切片并用水冲洗.用1%
10、亚甲基蓝溶液(配方见附录A)染色后，切片在水中分化2min?5 min，同用70%乙醉淋洗，封回切川牛，用光学技微镜们见察。4.6 结果判定SN/T 2857-20门4.6.1 Jif，忠民蛐腺峭的成峭虫的体椭网、也浅，有4刘腹足，分为6节，口器为非束状小任，节内有2根棘刺由上下唇和须肢组成。雌成蜗椭圆形，体长123m180m，宽76m100m，从侧面看头胸部至腹部均有横纹，背部有5块背板，头胸节背板上着生8对长刚毛，尾节上看生5对刚毛。雄成瞒椭圆形.体长96m100I丑，宽60m63m，背部有2块背板，背板上着生G对刚毛。幼蜗呈椭圆形，体长比成蜗稍大，长200m225m，宽100m110m。
11、幼蜗有足3对，一对发育良好，两对足退化，行为活泼。伍德氏附腺瞒的卵呈椭圆形，珍珠色体大透明，长110m128m，宽5/1m67mo(参见附录C和附录D)4.6.2 伍德氏蹄腺埔属于节肢动物门(Arthropods)、蛛形纲(Arachnida)、蝉瞒亚纲(Acari)、真瞒总目(八C盯iforms)、前气门目(八ctincdid川、附腺瞒科(T且rs肚midac)、蜂盾瞒亚科(八carapm日川、蜂盾瞒属(Acarais)。蜂盾瞒属中除伍j德惠氏E附(什十协品腺虫蜗外.还有背E附什腺蜗(Acar户1S正d巾l扣01瞒(川A r川纠i川r伫盯J川I中背E附付才腺瞒和外E町f什f协L腺衷拙虫蜗瞒在
12、形态上与伍德氏E町付腺蜗较为相i似以.应j注主意鉴别。鉴别时主要的鉴别要点是寄生部位，伍德氏踹腺瞒主要寄生在蜜蜂的前胸气管内，有时也寄生于头部、胸部、翅基部、触角和腹部气囊中，其他区别要点参见附录E。4.7 结果报告直接镜检法适用于大批量蜂群的检疫、初筛和流行病学调查;解剖镜检法结合临床发病症状可以对蜂蜗病进行确诊;在解音IJ镜检法鉴定为感染蜂蜗病时，结合染色镜检法可以做出终判。3 SN/T 2857-20门A.1 Oudemann氏溶液的制备附录A(规范性附录)溶液的配制冰醋酸80mL，甘油50mL，70%乙醇870mL，将以上各成分提合IJ可。A.2 8%氢氧化饵溶液的制备取8g的氢氧化押
13、溶入100日lL的水中，因榕解过程中会产热，因此应注意做好安全防护。A.3 1%亚甲基蓝溶液的制备取1g亚甲基蓝先行溶解后，加入0.85g的氧化专内，加入水定容至100mLo 4 SN/T 2857-20门附录B(资料性附录)蜜蜂气管中的伍德氏甜腺蜗a)、，I c)图B.l蜜蜂气管中的伍德氏酣眼睛J SN/T 2857-20门附录C(资料性附录)伍德氏酣腺瞒的显微图像图C.l伍德氏酣眼睛的雄蜗图C.2伍德氏酣眼睛的幼蜻、雄瞒、雌睛和卵6 SN/T 2857-20门附录(资料性附录)伍德氏酣腺蜗的雄蜗、雌瞒、幼瞒和卵的模式图D 口时100一【)JU c)、，/hu a)f)e)a)雄蜗背面;b)
14、雄虫的腹内;c)雌riiJ背向;d)雌瞒腹面;e)卵;f)幼蜗。伍德氏酣腺瞒的雄蜻、雌瞒、幼瞒和卵的模式图图D.lFFON-h的NHZSN/T 2857-2011 附录(资料性附录)背酣眼睛、外酣腺瞒和伍德氏酣腺瞒的区别要点E 背酣腺晴、外酣腺瞒和伍德氏酣腺瞒的区别要点特d生背卧|腺瞒外E付1束蜗伍德氏E川军蜗寄生在胸部中胸桶片和主要寄生在蜜蜂的前胸寄生部位仅寄生在蜜蜂的颈部中胸小循片间的凹槽中以气管内，有时也寄生于头部、胸部、翅基部、触角和腹及翅基部和前腹部油气囊中基节板凹度深i交平气门间距16.7m 16.8口113.9m 附肢(第间对足)长度7.6口111.4口17.5 fim 表E.1书号:155066 2-22643 定价:7巳18.00 SN/T 2857-2011