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1、ICS 65.020.20CCS B 05DB23黑龙江省地方标准DB23/T3 0 3 32021东北百里香组培繁殖技术规程2021-12-24发布2022-01-23实施黑龙江省市场监督管理局发 布DB23/T3 0 3 32021前言本文件按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由黑龙江省林业和草原局提出。本文件起草单位：东北林业大学、黑龙江省电力科学研究院、绥棱县应急管理局、绥棱县国有林场发展服务中心、海伦市森林资源保护中心、海伦市陈家店林场。本文件
2、主要起草人：范丽娟、王玉喜、赵玉彬、苗雨蕾、钱大勇、史恭发、闫蕾、吕汝彤、叶王斌、赵蕊阳、刘桂伶、杨娟、付海静、王玲、王金红。DB23/T 303320211东北东北百里香组培百里香组培繁殖繁殖技术规程技术规程1范围本文件规定了东北百里香（Thymus mandschuricus Ronn.）组培繁殖的环境与设备消毒、培养基配制、外植体的制备、培养条件、不定芽诱导、不定芽增殖、生根培养、炼苗、温室移栽及管理和生产档案。本文件适用于东北百里香组培繁殖。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用性文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期
3、的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。LY/T 18822010林木组织培养育苗技术规程NY/T 23062013花卉种苗组培快繁技术规程3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4环境与设备消毒4.1接种室消毒接种室消毒按 NY/T 23062013 中 8.6 的规定执行。4.2培养室消毒培养室消毒按 NY/T 23062013 中 8.7 的规定执行。4.3超净工作台消毒超净工作台消毒按 NY/T 23062013 中 8.5 和 8.6 的规定执行。4.4接种器具消毒接种器具按 NY/T 23062013 中 8.4 的规定执行。5培养基配制5.1母液配制培养基母液
4、配制按 NY/T 23062013 中 7.3 的规定执行。DB23/T 3033202125.2培养基配制5.2.1培养基配方培养基配制成分如下：a)初代培养基：MS0.5 mg/L 6-BA30g/L 蔗糖固化剂，灭菌前培养基 pH 值调制为 5.86.0；b)不定芽增殖培养基：MS0.5mg/L 6-BA0.1mg/L NAA30g/L 蔗糖固化剂，灭菌前培养基pH 值调制为 5.86.0；c)生根培养基：1/2MS0.5mg/L IBA30g/L 蔗糖固化剂，灭菌前培养基 pH 值调制为 5.86.0。5.2.2培养基配制方法培养基配制方法按 NY/T 23062013 中 7.4 执
5、行。5.3培养基灭菌及保存培养基灭菌及保存方法按 LY/T 18822010 中 4.2 进行。6外植体的制备6.1外植体的选择宜 6 月 8 月，从健康植株上选取中上部半木质化的枝条，剪成 5 cm 长的茎段。6.2消毒将外植体在洗衣粉水中浸泡 15min，自来水冲洗 1h 2h 后，置于超净工作台上，用 75%的酒精浸泡 10s30s，无菌水冲洗 4 遍6 遍，加入 2%的次氯酸钠溶液搅拌杀菌 15min 或 0.1%的升汞杀菌8min10min，无菌水冲洗 4 遍6遍，用无菌滤纸吸干材料表面水分，切割成 1cm1.5cm 长的带腋芽的茎段。7培养条件培养条件为 2428，光周期为 14
6、h/d，光照强度 3000 Lux，空气相对湿度 60%80%。8不定芽诱导将带有腋芽的茎段接种到诱导不定芽的初代培养基上，培养 15 d20 d，获取不定芽备用。9不定芽增殖切下不定芽，垂直插入不定芽增殖培养基中，插入深度 0.5 cm 左右，培养 30 d。待分化的不定芽形成芽丛后，分割新长出的不定芽。可按需求重复继代。10生根培养选取培养瓶中长度 2cm3cm 生长健壮的不定芽转接至生根培养基中，插入深度为 0.5cm，培养20 d。DB23/T 30332021311炼苗、温室移栽及管理11.1炼苗在组培苗根长至 2cm3cm 时，在培养室中半开封口膜放置 1 d，再去掉封口膜放置 1
7、 d，用镊子取出组培苗，用自来水冲洗附着在根上的培养基，放入底部装有自来水的三角瓶中水培，水的深度以没到组培苗根颈部为宜，2 d 后移栽。11.2温室移栽及管理11.2.1移栽准备将蛭石在 121高压灭菌锅中灭菌 20 min，放凉后装入规格为 10 cm11 cm8.5 cm 的花盆中，装至花盆高度的 2/3，压实。11.2.2移栽取出组培苗，在散射光下移栽至花盆的蛭石中，使根尽量伸展开，压实，浸透水，放入人工气候箱内缓苗，培养条件为 2428，光周期为 14 h/d，光照强度 3000 Lux，空气相对湿度 60%80%。15d 后移至温室。11.2.3移栽后管理移栽初期，保持空气湿度60%，适时浇水，保持基质湿润，温度控制在 1825。生长期见干见湿。定期除草。12生产档案应建立生产档案，内容包括：环境与设备消毒、培养基配制、外植体的制备、培养条件、不定芽诱导、不定芽增殖、生根培养、炼苗、温室移栽及管理等。_