《SN∕T 3431-2012 香蕉坏死条纹病菌检疫鉴定方法(出入境检验检疫).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《SN∕T 3431-2012 香蕉坏死条纹病菌检疫鉴定方法(出入境检验检疫).pdf（10页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准?香蕉坏死条纹病菌检疫鉴定方法?发布?实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书?中华人民共和国出入境检验检疫行?业?标?准香蕉坏死条纹病菌检疫鉴定方法?中 国 标 准 出 版 社 出 版北京市朝阳区和平里西街甲?号?北京市西城区三里河北街?号?总编室?网址?中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷?开本?印张?字数?千字?年?月第一版?年?月第一次印刷印数?书号?定价?元书书书前?言?本标准按照?给出的规则起草?请注意本文件的某些内容可能涉及专利?本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任?本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口?本标准起草单位
2、?中华人民共和国海南出入境检验检疫局?本标准主要起草人?刘福秀?韩玉春?徐卫?李伟东?林明光?香蕉坏死条纹病菌检疫鉴定方法?范围本标准规定了出入境植物检疫中香蕉坏死条纹病菌的检疫鉴定方法?本标准适用于香蕉鲜果?种苗和其他寄主植物材料中香蕉坏死条纹病菌的检疫鉴定?规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的?凡是注日期的引用文件?仅注日期的版本适用于本文件?凡是不注日期的引用文件?其最新版本?包括所有的修改单?适用于本文件?食品卫生微生物学检验?染色法?培养基和试剂?病菌基本信息学名?异名?中文名?树生黄单胞菌柳叶致病变种英文名称?香蕉坏死条纹病菌属原核生物界?变形细菌门?变形细菌纲?黄色
3、单胞菌 目?黄 色 单 胞 菌 科?黄 色 单 胞 菌 属?树生黄单胞菌?该病菌主要通过带菌种苗?鲜果和病株的残枝落叶进行远距离传播?原理该病害症状?病菌生物学特性?参见附录?生理生化特性和致病性测试是该病菌检测鉴定的依据?仪器设备和用具?仪器设备电子天平?实体显微镜?超净工作台?温控培养箱?高压灭菌锅?微生物自动鉴定系统?仪?电泳仪?紫外检测仪或凝胶成像系统?离心机?恒温水浴锅?超低温冰箱?普通冰箱?纯水机?涡旋振荡器?可调微量加样器等?用具解剖刀?裁纸刀?量筒?烧杯?培养皿?三角瓶?离心管?放大镜?手术剪?镊子?接种环等?化学试剂?试剂次氯酸钠?磷酸二氢钠?乙醇?吐温?吐温?淀粉?蔗糖?葡
4、萄糖?果糖?海藻糖?培养基?培养基?培养基和?培养基?各培养基配方及配制方法见附录?检测鉴定?现场检疫?感官检查仔细检查?观察典型症状或可疑症状?参见附录?感病组织表面可能有菌脓?样品抽取发现可疑植株?切取受害部位或将整棵植株取回实验室检验?室内检测与鉴定?病原菌分离纯化取?病组织?用无菌水冲洗后放入?无菌水中?观察是否有细菌溢出?如果有喷菌现象?则用接种环挑取喷出的菌液?培养基上划线分离?如没有喷菌现象?则在经过高压灭菌的研钵中加入?缓冲液?用灭菌玻棒将病组织研碎?在室温下浸泡?取?组织悬浮液在?培养基上划线分离?看不到症状的情况下?用无菌水洗涤病组织?洗涤液在?培养基上划线分离?划线细菌在
5、?下培养?后即可观察所产生的菌落?如果发现可疑的菌落应该及时使用?或?培养基再进行?次的纯化培养?最后获得纯菌株?形态观察病菌为革兰氏阴性?菌体短杆状?大小?多数单个排列?少数?个连接成短链?不产生芽孢?无荚膜?鞭毛单根极生?在?培养基上生长的菌落呈灰白色到奶油色?隆起?光滑?有光泽?边缘整齐?培养?菌落直径可达?开始时菌落透明?渐渐混浊不透明?最后变成表面有一层粘质的固体物?在?或?平板上恒温?培养?菌落突起?表面光滑?乳白色?有光泽?菌落边缘完整?直径?粘稠?如果发现可疑的菌落?采用平板划线法?即用灭菌的接种环蘸取?平板上菌落后?在?或?平板上多次划线纯化?在?下恒温培养?纯化?次后进行鉴
6、定?革兰氏染色按?中?的方法进行革兰氏染色反应?若染色结果为革兰氏阴性菌?则进?行下一步检测?生理生化指标测定结合实验条件对分离菌株进行生理生化指标测定?应用微量发酵管对分离菌株进行生理生化指标的测定?若分离菌株能水解吐温?吐温?淀粉?蔗糖?葡萄糖?果糖和海藻糖?液化明胶?强烈水解卵磷脂?使石蕊牛乳产碱?胨化?则生理生化指标测定结果为阳性?应用微生物自动鉴定系统对分离菌株进行生理生化指标的测定?按照微生物鉴定系统规定的操作方法进行?若鉴定结果为?则判定该分离菌株的微生物鉴定系统的鉴定结果为阳性?致病性测定将在?或?培养基上培养?后的菌株?配成?的细菌悬浮液?采用针刺接种法?用消毒的接种针蘸上细
7、菌悬浮液?针刺香蕉苗的第三片?第四片叶和嫩茎等?每一菌株接种?株?阴性对照用无菌水代替接种液?接种后的植株置放于人工气候箱?在?温度下?先在?相对湿度保温?然后在?左右的相对湿度下?每天在?下光照培养?黑暗下培养?接种?后开始观察症状?每天观察一次?连续观察?植株上的叶片出现不规则小的褐色病斑?病斑有黄色坏死环纹?边缘坏死?叶片感病部分横切面出现褐变且挤压有细菌溢出的视为发病?表明从种苗上分离到的菌株具有致病性?而且需要从接种病斑上再次分离出来?不表现症状的接种植株视为不发病?结果判定根据分离菌株在培养基上的形态特征?生理生化指标测定结果对可疑菌落进行鉴定?至少采用一种方法?生理生化指标测定和
8、微生物鉴定系统?对可疑菌落进行鉴定?最后进行寄主的致病性测定以确诊?如果生理生化指标测定结果或微生物鉴定系统的鉴定结果为阳性?且致病性测定表现为典型症状?则判定为检出香蕉坏死条纹病菌?如果各种鉴定方法都为阴性?则判定为未检出香蕉坏死条纹病菌?样品和菌种保存?样品保存样品拍照后均应制成干标本?经登记和签字后置于阴凉干燥?防虫防鼠处妥善保存?个月?对鉴定为香蕉坏死条纹病菌的样品至少应保存?年?以备复检?谈判和仲裁?样品保存期满后?需经灭菌处理?菌种保存从样品中分离并鉴定为香蕉坏死条纹病菌的菌株应转接到试管斜面?经登记和签字后置于?冰箱中保存?定期转接?或病菌悬浮液加?甘油置于超低温冰箱?长期保存?
9、或用真空干燥机制成病菌冻干粉置于超低温冰箱?长期保存?附?录?资料性附录?香蕉坏死条纹病菌的相关信息?地理分布美洲?阿根廷?加拿大?厄瓜多尔?美国?大洋洲?澳大利亚?新西兰?巴布亚新几内亚?非洲?埃及?尼日利亚?亚洲?阿富汗?亚美尼亚?孟加拉国?格鲁吉亚?印度?伊朗?以色列?日本?哈萨克斯坦?蒙古?巴基斯坦?土耳其?寄主植物香焦?大麦?黑麦?小麦?燕麦?茅草?症状特点香焦坏死条纹病的主要症状是病叶和假茎上有不规则小的褐色病斑?病斑有黄色坏死环纹?边缘坏死?果实上形成坏死斑等症状?以及潮湿条件下病部有菌脓溢出?传播途径种传病害?病菌的远距离传播主要靠带菌种苗?鲜果和病株的残枝落叶?种苗初感染时不
10、表现任何症状?病菌以休眠状态存在于病组织中?带病种苗往往能正常生长?但不久就会在叶片上表现症状?附?录?规范性附录?培养基制作方法?酵母粉葡萄糖氯霉素琼脂培养基?配方见表?表?配方成分比例酵母膏?碳酸钙?葡萄糖?琼脂?蒸馏水?配制方法按培养基配方比例依次准确地称取酵母膏?碳酸钙?葡萄糖放入烧杯中?在烧坏中加入约?蒸馏水?加热搅拌?待药品完全溶解后?将称好的琼脂放入已溶解的药品溶液中?再加热溶化?在琼脂溶化的过程中?需不断搅拌?以防琼脂糊底?冷却后补足水分至?再分装?灭菌?酵母膏蛋白胨葡萄糖琼脂培养基?配方见表?表?配方成分比例葡糖糖?酵母膏?蛋白胨?琼脂?蒸馏水?配制方法按培养基配方比例依次准
11、确地称取酵母提取物?蛋白胨?葡萄糖放入烧杯中?蛋白胨很易吸潮?在?称取时动作要迅速?在烧杯中加入约?蒸馏水?用搅拌器搅拌?待药品完全溶解后?将称好的琼脂放入已溶解的药品溶液中?再加热溶化?在琼脂溶化的过程中?需不断搅拌?以防琼脂糊底?最后补足水分至?再分装?灭菌?葡萄糖酵母膏碳酸钙琼脂?培养基?配方见表?表?配方成分比例酵母膏?碳酸钙?葡萄糖?琼脂?蒸馏水?配制方法按培养基配方比例依次准确地称取酵母膏?碳酸钙?葡萄糖放入烧坏中?在烧坏中加入约?蒸馏水?加热搅拌?待药品完全溶解后?将称好的琼脂放入已溶解的药品溶液中?再加热溶化?在琼脂溶化的过程中?需不断搅拌?以防琼脂糊底?冷却后补足水分至?再分装?灭菌?参?考?文?献?