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1、ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 1609-2018 代替NY/T1609-2008 水稻条纹叶枯病测报技术规范Technical specification for investigation and forecast of the rice stripe virus 2018-07-27发布2018-12-01实施中华人民共和国农业农村部发布NY/T 1609-2018 目次E l 范围12 术语和定义.13 系统调查.2 4 普查 35 带毒率测定.6 预报方法47 数据汇总上报.5 8 调查资料表册5附录A(规范性附录)农作物病虫调查资料表册.6
2、 附录B(资料性附录)水稻条纹叶枯病病情划分指标-附录C(资料性附录)斑点免疫法检测灰飞虱中水稻条纹病毒的方法.10 附录D(资料性附录)胶体金免疫试纸条检测水稻和灰飞虱中水稻条纹病毒的方法.11 附录E(资料性附录)灰飞虱若虫与卵历期13附录k资料性附录)水稻条纹叶枯病模式报表.14 I NY/T 1609-2018 目。吕本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准代替NY/T1609一2008(水稻条纹叶枯病测报技术规范。与NY/T1609一2008相比，除编辑性修改外主要技术变化如下:一一在原水稻条纹叶枯病测报技术规范的基础上，增加了自次，正文中部分内容调整了位置，使其更有
3、逻辑性，方便使用;增加了胶体金免疫试纸条检测水稻植株和灰飞虱体内携带的水稻条纹病毒的方法，提高了检测效率，减轻了工作强度;在不影响调查准确性的基础上，对原规范调查内容、取样数量等进行了合理优化与调整，使其更符合生产实践需要;针对近年水稻条纹叶枯病发生的新特点，对水稻条纹叶枯病预测方法进行了完善。本标准由农业农村部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位:全国农业技术推广服务中心、南京信息工程大学、江苏省植物保护植物检疫站、江苏省农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人:陆明红、刘万才、包云轩、杨清坡、王建强、张跃进、刘宇、冯晓东、杨荣明、周益军。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:一-NY/
4、T1609-2008。H NY/T 1609-2018 水稻条纹叶枯病测报技术规范范围本标准规定了水稻条纹叶枯病及其传毒介体灰飞虱的调查方法和调查数据记载归档等内容。本标准适用于稻麦轮作区水稻条纹叶枯病测报调查。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1 水稻条绞痛毒rice stripe virus(RSV)属纤细病毒属(Tenuivirus)，病毒粒体为丝状，病毒核酸为4条单链RNA，病组织中可形成不定形的针状内含体。病毒可在传毒介体灰飞虱体内增殖，循回期5d21 d，潜育期10d25 d。2.2 传毒介体virus transmitting vector 水稻条纹叶枯病毒传毒介体为
5、灰飞虱(LodeLphaxstriateLLus Falln)，属昆虫纲、同翅目、飞虱科。成虫与若虫皆能传毒，以高龄若虫和羽化初期的雌虫传毒能力最强。2.3 传毒virus transmission 植物病毒经介体或其他途径，由一植物传至另植物的过程即为传播病毒或传毒。2.4 获毒virus acquisition 亲和性植物经介体或其他方式获得病毒的过程。2.5 持久性传毒durable virus transmission 又称循回型传播或增殖型传播，是介体传播病毒的一种方式。介体昆虫在毒源植物上经较长时间吸食获得病毒，经数小时或更长时间的潜伏期后即可传毒。获毒后，介体持毒期长，终身带毒，
6、蜕皮后不丧失传毒能力，部分病毒可在体内增殖，甚至经卵传至后代。2.6 经卵传毒transovarial virus transmission 通过介体昆虫的卵而传播病毒，是介体传播病毒的一种方式。进人昆虫卵细胞内的增殖型病毒可随卵排出，这种带病毒的卵孵化出的若虫带有病毒并具有传毒能力。2.7 带毒率infection rate 田间调查携带RSV的灰飞虱虫量占灰飞虱调查总虫量的百分比。2.8 显症symptomatic appearance 水稻感病品种感染亲和病毒后，田间表现危害症状。通常水稻感染RSV一段时间后表现症状，一般20d左右达显症高峰，亦可出现多个显症阶段。1 NY/T 1609
7、-2018 2.9 发生期occurrence period 灰飞虱发生期:某代某虫态发生数量达该代各虫态累计总量的16%、50%、84%的日期分别称其始盛期、高峰期、盛末期。条纹叶枯病发生期:为条纹叶枯病病情严重程度(用病丛率、病株率或病情指数等指标表示)分别达最终病情严重程度的16%、50%、84%时，称该病分别进入始盛期、高峰期、盛末期。3 系统调查3.1 灰飞虱成若虫调查3.1.1 麦田调查3.1.1.1 调查时间在灰飞虱上年系统调查田。小若小麦面积小查3m2，每5d3.1.1.2 调查每块田连拍三下。0.11 m2。3.1.2水3.1.2.2调选择当网法随机取样，扫网法，用成虫、若虫
8、数量。3.1.3.1 调查时间秧田大面积移栽结3.1.3.2 调查方法，每点拍查在灰飞虱常年发生量较大的地区，望冒哩.罔播期与抗性的类型田各一块，作为固定系统调查田。采用盆拍法对角线取样，每块田查5点，每点拍10丛。查虫时，将盆下缘紧贴水面稻丛基部，快速拍击植株中下部，连拍三下。每点计数1次，计数各类飞虱不同翅型的成虫、低龄和高龄若虫数量，并折算为666.7m2虫量，结果记入表A.1。3.2 灰飞虱卵量调查3.2.1 调查时间本地灰飞虱成虫高峰后开始调查，每5d调查一次，连续调查2次。3.2.2 调查方法在观测区内选择不同播期、抗性与育秧方式的类型田各一块，秧田采用棋盘式取样10点，每点102
9、 NY/T 1609-2018 株;本田采用平行跳跃式25点或10点取样，每点取2丛，每丛拔取分囊1株(茎)，主害代前一代取50株，主害代取20株。剥查取样稻株，计算百株卵量，调查结果记人表A.2。3.3 水稻条纹叶枯病病情系统调查3.3.1 调查时间灰飞虱迁入水稻秧田高峰后起(一般5月下旬至6月上旬)，每5d调查一次(可结合灰飞虱虫量调查同时进行)，至9月中旬结束。3.3.2 调查方法水稻秧田和本田期，在灰飞虱带毒虫量高、有代表性的地区，选取不同抗感病品种、不同播栽期的类型田各一块进行调查。采用对角线5点取样，秧田每点调查0.11时，本田每点查10丛，秧田记载病株数，本田记载病丛数、病株数、
10、严重度(分级指标参见附录B)，通过式(1)、式(2)计算病(丛)株率、病情指数，结果记人表A.3。通过式(1)计算病丛(株)率。I二是X100.(1)式中:I一一病丛(株)率，单位为百分率(%);P;一一病丛(株)数;Pm-调查总丛(株)数。通过式(2)计算病情指数。式中:A一一病情指数;B;一一各级严重度病株数;Bd 各级严重度代表值;M，一一调查总株数;Md一一严重度最高级代表值。4 普查4.1 灰飞虱普查4.1.1 调查时间A=2;(B;X Bd)=一X100(2)M;XMd 根据不同播期与长势，分别选择早、中、晚及长势好、中、差的不同类型田共20块30块。小麦于冬后越冬代灰飞虱高龄若虫
11、至成虫期以及一代灰飞虱若虫高峰期在麦田调查，每5d调查1次，共查2次;水稻秧田于一代灰飞虱成虫迁入盛期开始，每5d调查1次，共查2次3次;水稻本田分别于二、三代若虫高峰期，每5d调查l次，共查2次3次。4.1.2 调查方法采取对角线5点取样，麦田及水稻秧田每点拍查0.11m2，水稻本田每点查10丛，记载灰飞虱成、若虫各虫态及数量，折算666.7m2虫量或百丛虫量。结果记人表A.1。4.2 水稻条纹叶枯病普查4.2.1 调查时间根据水稻不同播期与抗性，分别选择早、中、晚及不同抗感类型田共20块30块。秧田于虫量高NY/T 1609-2018 峰后20d即一代灰飞虱传毒危害稳定后进行，每5d调查1
12、次，共查2次3次。本田于二、三代灰飞虱传毒危害田间病情稳定后进行，每5d查1次，每代共查2次。4.2.2 调查方法同3.3.2，统计结果记人表A.3，通过式(3)计算病情发生程度指数，分级指标参见表B.2。通过式(3)计算病情发生程度指数。式中:D一一发生程度指数;D=VXE 一一一一一(3)F X 10000 V 加权平均带毒率，单位为百分率(%);E一一每666.7m2加权平均虫量，单位为头;F一一总调查地块数量，单位为块。5 带毒率测定5.1 灰飞虱采集在上年不同发生程度的地区，分别在不同播期和品种抗性的田块采集越冬代或)代灰飞虱高龄若虫或成虫，各类型田虫量不少于50头，分别测定越冬代或
13、一代灰飞虱带毒率。通常测定越冬代即可，一代灰飞虱带毒率可参照越冬代结果。5.2 带毒率测定根据酶免疫检测原理，采用斑点免疫法(Oot-ELISA,DIBA)(参见附录C)或胶体金免疫试纸条检测法(参见附录0)检测灰飞虱带毒情况，记载带毒虫量。根据式(4)计算加权平均带毒率。结果记人表A.4。通过式(4)计算带毒率。式中:H一一-带毒率，单位为百分率(%);s-一带毒虫量，单位为头;Z 一一检测总虫量，单位为头。6 预报方法6.1 发生期预报6.1.1 一代成虫迁入秧田高峰期H=i X 100 一般年份，小麦收割高峰期前后就是灰飞虱迁人水稻秧田及早栽本田的高峰期。6.1.2 本田二、三代灰飞虱发
14、生期依据历期法，由一代灰飞虱成虫高峰期及产卵高峰期推算二代灰飞虱低龄若虫高峰期，依此法推算三代灰飞虱低龄若虫高峰期(历期参见附录E)。6.2 发生量预报6.2.1 秧田灰飞虱发生量秧田一代灰飞虱成虫数量可根据麦田一代成虫数量进行推测。麦田一代灰飞虱虫量与秧田高峰期虫量比例系数，同一地区年度之间相对稳定。结合当地气温和麦田后期调查虫量推算迁入秧田高峰期虫量，进行一代灰飞虱发生量的中长期预报。NY/T 1609-2018 6.2.2 水稻条纹叶枯病发生程度根据灰飞虱带毒虫量和田间水稻生育期及带毒率测定结果，结合水稻品种抗性、前期和当前气象条件，作出水稻条纹叶枯病发生程度的趋势预报。一般灰飞虱带毒率
15、大于3%，虫量高，一代灰飞虱迁入高峰期与秧苗期较吻合，品种较感病，水稻条纹叶枯病流行的可能性较大;带毒率达到12%以上则为大流行趋势。7 数据汇总上报采用互联网等传输工具，按统一汇报格式、时间和内容汇总上报水稻条纹叶枯病模式报表(参见附录F)。其中，发生程度分别用1、2、3、4、5表示。同历年同期比较的早、增、多、高用+表示，晚(迟)、减、少、低用表示;与历年同期相同和相近，用0表示;缺测项目用XX表示。8 调查资料表册全国制定统一的调查资料表册的样表一份(见附录A)，供各地应用时复制。用来规范各区域测报站测报调查行为，保证为全国数据库积累统一、完整的测报调查资料。其中的内容不能随意更改，各项
16、调查内容须在调查结束时，认真统计和填写。5 NY/T 1609-2018 6 附录A(规范性附录)农作物病虫调查资料表册水稻条纹叶枯病章拔盖海一(经M址东问以队口仅十口一ttzp附主一测负纬中华人民共和国农业农村部NY/T 1609-2018 A.1 灰飞虱麦田、秧田及本田成若虫调查记载表见表A.l。表A.l灰飞虱麦田、秧田及本田成若虫调查记载表li-v JE-单位I(月日)调查日期|类型田口口口生育期调查面积或丛数，m2或丛若虫量，头低龄fI ii1 I忡666.7 m2虫量或百丛虫量，I备注头种见表A.2。调查日期(月日)调查日期|类型田(月日)A.4 灰飞虱带毒率测定记载表见表A.4。表
17、A.4灰飞虱带毒率测定记载表单位调查日期取样虫量带毒虫量加权平均类型田品种代另IJ(月日)头头带毒率备注%7 NY/T 1609-2018 水稻条纹叶枯病发生基本情况A.5 见表A.5。ll-ill-l唱lil-A-1-水稻条纹叶枯病发生基本情况水稻水稻类型播种面积发生面积防治面积挽回损失实际损失hm2 hm2 hm2 t t 双季早稻双季晚稻单季中晚稻其他合计简述发生概况和特点:8 表A.5附录B(资料性附录)7.1稻条纹叶枯病病情划分指标B.1 水稻条纹叶枯病病情严重度分级指标见表B.l。表B.l水稻条纹叶枯病病情严重度分级指标级别症状O级无症状l级有轻微条纹症状，心叶不褪绿，生长正常2级
18、有明显条纹症状，心叶不褪绿或有轻微条纹，生长基本正常3级褪绿条纹明显，且有卷曲4级病口十卷曲枯死B.2 水稻条纹叶枯病发生程度分级指标(以发生程序指数确定)见表B.2。NY/T 1609-2018 表B.2水稻条纹叶枯病发生程度分级指标(以发生程度指数确定)发生程度类型田轻发生偏轻发生中等发生cl级)(2级)(3级)秧回0.4 0.4-0.6 0.61-1.0 本田0.2 0.2-0.5 0.51-1.0 注:发生程度以发生程度指数来确定，参见计算公式(3)。L B.3 水稻条纹叶枯病发生程度分级指标(以病株率确定)见表B.3。偏重发生(4级)1.01-2.0 1.01-2.0 表B.3水稻条
19、纹叶枯病发生程度分级指标(以病株率确定)发生程度类型田轻发生偏轻发生中等发生偏重发生cl级)(2级)(3级)(4级)病株率，%2.0 2.0 大发生(5级)二三20二三209 NY/T 1609-2018 附录C(资料性附录)斑点免疫法检测灰飞虱中水稻条纹病毒的方法C.1 酶免疫检测原理将酶分子与抗体或抗体分子共价结合，此种结合既不改变抗体的免疫反应活性，也不影响酶的生物化学活性。此酶标记抗体可与存在于组织细胞或吸附于固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下催化底物水解、氧化或还原等反应，产生有颜色的物质。酶降解底物的量与呈现的颜色成正比。C.2 斑点免瘟法(Do
20、t-ELISA,DIBA)检测灰飞虱中水稻条纹病毒的方法将采集的成虫或高龄若虫，单头虫置于200L离心管中加100L碳酸盐缓冲液，用木质牙签捣碎后制成待测样品。在硝酸纤维素膜上划0.5cmX O.5 cm方格，每格加入3L样品于室温晾干;在3rc温度条件下，4%牛血清(或0.4%BSA)封闭0.5h后浸入酶标单抗(封闭液稀释5000倍)孵育1.5 h，洗涤后再浸人酶标二抗稀释液中孵育1.5 h，然后浸人显色底物液中0.5h。每步用磷酸缓冲液CPBST)洗涤3次，每次3mino检查反应类型，带毒灰飞虱呈现阳性反应。C.3 用于标记的酶C.3.1 辣根过氧化物酶CHorseradish Perox
21、idase,HRP)。C.3.2 碱性磷酸酶CAlkalinephosphatase)。10 NY/T 1609-2018 附录D(资料性附录)肢体金免疫试纸条检测水稻和灰飞虱中水稻条纹病毒的方法D.1 试剂和材料D.1.1 0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4):称取3.0g Na2HP04 12H20,0.2 g KH2P04,8.0 g NaCl,O.2 g KC1,11D去离子水定容至1L。D.1.2 水稻条纹病毒(RSV)胶体金免疫试纸条。D.2 仪器和设备台式离心机，移液器，200L枪头，1.5 mL和O.5 mL eppendorf塑料离心管，牙签，研钵和研棒。D
22、.3 操作步骤D.3.1 样品制备将较老的约0.1g水稻植物组织置于研钵中用液氮研磨成粉末，加入2mL O.01 mol/L PBS后继续研磨匀浆3min;嫩的水稻植物组织直接加0.01mol/L PBS后在研钵中研磨匀浆3min，匀浆液移至1.5 mL eppendorf离心管中，5000r/min离心3min，或静置5min澄清;单头灰飞虱放入0.5mL的eppendorf离心管中后加入200L300LO.01 mol/L PBS，用牙签粗端或200L移液枪头捣烂飞虱呈匀浆液。D.3.2 样品检测从铝馅袋中取出1条胶体金免疫试纸条，如图0.1所示将其正面朝上平放，用吸管吸取上述制备好的样品
23、提取液滴3滴(200L300L)到加样孔中。CI对照线TI检测线质控区测试区加样孔。-.J 图D.l胶体金免痊试纸条放置方法D.3.3 结果判断5mi口10min后判断结果，即检测线(T线)和质控线(C线)同时出现红色条带的样品为阳性，C线出现红色条带而T线未出现红色条带样品为阴性。若C线和T线均未出现红色条带，或仅在T线出现红色条带而C线不出现红色条带时，说明试纸条失效。11 NY/T 1609-2018 D.4 注意事项D.4.1 胶体金试纸条于干燥密封铝筒袋中室温避光保存，现用现取。D.4.2 每根吸管只能用于1个样品的吸取和加样，禁止同一根吸管用于多个样品的吸取和加样。12 NY/T
24、1609-2018 附录E(资料性附录)灰飞虱若虫与卵历期E.1 若虫历期若虫共5个龄期，温度在220C2rc时若虫历期为16d19d。E.2 卵历期见表D.l。表D.l灰飞虱卵历期表代次1 2 3 4 5 6 温度，C17.2 23.1 29.1 28.9 22.4 18.8 历期，d20.3 10.6 6.2 7.6 11.1 16.3 13 NY/T 1609-2018 附录F(资料性附录)水稻条纹叶枯病模式报表F.1 灰飞虱发生实况模式报表见表F.l。序号1-2-nd-4-5-6一7-8-9一。一l-2-唱EAE唱EA-咱EA4 见表F.2。序号1 调查日期 2 感病品种种植比率，%.
25、3 感病品种种植比率比上年增减4 感病品种种植比率比历年平均增减比例，%5 带毒虫量，头/百丛6 加权平均带毒率，%7 加权平均带毒率比上年增减比例，%8 加权平均带毒率比历年平均增减比例，%9 病田率，%10 发病田平均病校率比上年增减比例，%年平均增减比例，%14 NY/T 1609-2018 表F.2(续)序号报表内容报表程序12 预计条纹叶枯病发生程度，级13 预计条纹叶枯病发生面积比例，%14 预计防治适期(月/日月/日)15 填报单位注:在灰飞虱进入水稻秧回后汇报，每逢l日、6日上报。15 4 ON|gCFHFZ 中华人民共和国农业行业标准水稻条纹叶枯病测报技术规范NY/T 1609-2018 中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100125网址:)中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销长头并关印张1.25 字数25千字2018年11月北京第1次印刷长2018年11月第1版书号16109 4607 定价38.00元*开本880mmX1230mm 1/16 版权专有侵权必究举报电话(010)59194261 NY/T 1609-2018