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1、ICS 65.120 B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3142一2017饲料中滇毗斯的明的测定液相色谱-串联质谱法Determination of pyridostigmine bromide in feeds-Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2017-12-22发布2018一06-01实施中华人民共和国农业部发布目。吕本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准Fl全同饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位:广东省农业科学院农产品公共监测中心。
2、本标准主要起草人:何绚霞、王戚利、张展、续借、吴维熠、林雪贤、殷秋妙。NY/T 3142-2017 I NY/T 3142-2017 饲料中漠毗斯的明的测定液相色谱一串联质谱法1 范围本标准规定了饲料中澳毗斯的明含量测定的液相色谱-串联质谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补京剧占画面皿玄11喃混合饲料中澳毗斯的明的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本件。凡是不注日期的寻GB/T 6682 3 原理4 试剂4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 5mmol/L甲酸镀甲4.8 复榕液:甲酸镀甲酸溶4.9 4.10 澳毗斯的明标准品:纯度二三98.0%。4.11 澳口比斯的
3、明-06标准品(同位素内标物):纯度二三98.0%。化，4.12 澳毗斯的明标准储备液(1mg/mL):准确称取适量澳毗斯的明标准品，用色谱纯甲醇配制成1000g/mL的标准储备液，一200C储藏，有效期6个月。4.13 澳毗斯的明标准工作液(0.1g/mL):准确茧取澳毗斯的明标准储备液(4.12)，用色谱纯甲醇稀释成澳毗斯的明浓度为O.1g/mL的标准工作液，40C储藏，有效期1个月。4.14 澳毗斯的明-06(4.11)标准储备液(1mg/mL):准确称取适量漠毗斯的明-06标准品，用色谱纯甲醇配制成1000g/mL的标准储备液，-200C储藏，有效期6个月。4.15 澳口比斯的明-06
4、标准工作液(0.1g/mL):准确茧取澳口比斯的明-06标准储备液(4.14)，用色谱NY/T 3142-2017 纯甲醇稀释成澳口比斯的明浓度为o.1g/mL的标准工作液，40C储藏，有效期1个月。5 仪器和设备5.1 液相色谱-串联质谱联用仪:配电喷雾离子源(ESD。5.2 分析天平:感茧0.1mgo 5.3 分析天平:感茧0.01mg。5.4 涡旋振荡器。5.5 超声水浴。5.6 离心机:最高转速12000r/min或以上。5.7 氮吹仪。5.8 同相萃取装置。5.9 滤膜:0.22m。5.10 罔相萃取小柱:混合型弱阳离子交换柱(WCX),150 mg/3 mL;或相当者。6 试样制备
5、按照GB/T14699.1的规定抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样，按照GB/T20195的规定制备样品，粉碎后过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装人磨口瓶中，备用。7 测定步骤7.1 提取7.1.1 配合饲料、浓缩饲料、精料补充料称取试样约2g(精确至0.1mg)，准确加入澳口比斯的明-D6标准工作液(4.15)100L，加入甲醇(4.2)20 mL，涡旋30日，超声提取10min,10 000 r/min离心5min，准确取上清液10mL，置于水浴锅中500C氮气吹干，准确加水10mL榕解，加入10时，正己皖(4.5)，涡旋30s,10000 r/min离心5min，准确取下层液体5
6、mL，为样品提取液。7.1.2 添加剂预混合饲料称取试样约2g(精确至0.1mg)，准确加入澳口比斯的明-06标准工作液(4.15)100L，加入乙腊(4.1)20 mL，涡旋30s，超声提取10min,10000 r/min离心5min，准确取上清液10mL，置于水浴锅中500C氮气吹干，准确加水10mL溶解，加入10时，正己烧(4.5)，涡旋30s,10000 r/min离心5min，准确取下层液体5mL，为样品提取液。7.2 净化取棍合型弱阳离子交换柱(WCX)，依次用甲醇6mL,Jj(6 mL活化，取样品提取液(7.1)过柱，弃去流出液，再依次用水6mL、甲醇6mL淋洗，减压抽干，用1
7、%甲酸甲醇榕液(4.的10mL洗脱，洗脱液于水浴锅中500C氯气吹干，用复溶液(4.8)0.5mL超声榕解，加入0.5mL复榕液饱和的正己;皖(4.的，涡旋30s,12000 r/min离心5min，取下层液体，过O.22m滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.3 标准曲线的制备精密吸取澳H比斯的明标准工作液(4.13)和澳毗斯的明-06标准工作液(4.1日，用复溶液稀释成0.5 ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL,10 ng/mL、20ng/mL、50ng/mL,100 ng/mL的系列标准洛液(澳口比斯的明-06均为5ng/mL)，供液相色谱一串联质谱法测定。7.4 测定
8、7.4.1 色谱参考条件NY/T 3142-2017 色谱柱:C18柱，柱长150mm，内径3.0mm，粒径3m;或相当者;流动相A:5mmol/L甲酸镀/0.1%甲酸水溶液(4.7);流动相B:乙脂，梯度洗脱程序见表1;流速:0.3mL/min;柱、温:40.C;进样量:5L。时间，mlnO.0 1.2 5.8 6.5 8.0 8.5 12.0 7.4.2 质谱参考条件离子源:电喷雾离子源;扫描方式:MRM;电离模式:正离子模乱;检测方式:多反应监测(MRM);电离电压:4.5kV;军化温度:400.C;脱榕剂温度:250.C;雾化气流速:3.0L/min;干燥气流速:15.0 L/min.
9、表1梯度洗脱程序流动相A，%流动相3，%97 3 85 15 85 15 50 50 50 50 97 3 97 3 澳H比斯的明和澳口比斯的明D6定性离子对、定茧离子对及碰撞能量参数见表2。表2l臭毗斯的明和澳日比斯的明-D6的定性离子对、定量离子对及碰撞能量化合物定性离子对定茧离子对碰撞能量m/z m/z cV 澳H比斯的明181.15/72.10 21 181.15/124.20 181.15/72.10 16 澳11比斯的明-马187.10/78.20 187.10/78.20 21 7.4.3 定性测定在相同民验条件下，待测物在样品中的保留时间与标准、溶液中的保留时间偏差在:e 2.
10、5%之内，并且色谱陪|中各组分定性离子对的相对丰度与浓度接近标准液中相应定性离子对的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范罔，则可判断为样品中存在对应的待测物。相对离子丰皮允许的相对偏差7.4.4 定量测定表3定性测定时相对离子丰度的最大允许误差 50 士202050(含i:25 1O20(含)士30单位为百分束主二10i:50 取试样榕液和标准、溶液上机测定，以色谱峰保留时间和离子对定性，以1臭口比斯的明和澳口比斯的明U的色谱峰面积比做单点或标准曲线校准，用内标法定量。试样溶液中目标物与内标的峰面积比均应NY/T 3142-2017 在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，澳毗斯
11、的明标准溶液特征离子的质量色谱图参见附录A。按以上步骤对同一试样进行平行测定。8 结果计算试样中澳口比斯的明的含量(X)以质量分数表示，单位为微克每千克(g/kg)，按式(1)或式(2)计算。A X Ai X C;X Cs X V X 1000 单点校准:X一X N.(1)A,X A X C X m X 1000 式中:A 一试样溶液中澳毗斯的明的儿一标准溶液中内标澳c;一-试样榕液中内标C 标准溶液中V一一最终定容As 一标准溶A C;s m 式中:9 重复性4(2)NY/T 3142-2017 附录A(资料性附录)滇毗斯的明标准溶液色谱图澳口比斯的明标准、溶液色谱罔参见罔A.l。xlO创)
12、()2 1.00 0.00 5.4 3.00 2.00 1.00 o 0.0 4.769泯11比斯的明181.15 72.10(+)1(1)4.766澳11比斯的明-0.187.10 78.20(+)2(1)2.5 5.0 7.5 10.0 t,ffiln 图A.l滇毗斯的明标准溶液色谱图(滇毗斯的明浓度为2.0ng/mL,滇毗斯的明一D6浓度为5.0ng/mL)5 toN|N寸的同MZ.中华人民共和国农业行业标准饲料中滇毗斯的明的测定液相色谱-串联质谱法NY/T 3142-2017 中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码100125网址)北京印刷一厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销头争毛-)(-争夺印张O.75 字数15千字2018年5月北京第1次印刷美开本880rnrnX1230rnrn 1/16 2018年5月第1版书号16109 4385 定价18.00元-)(-版权专有侵权必究举报电话(010)65005894