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1、ICS 65.020 B 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3262一2018番茄褪绿病毒病综合防控技术规程Technical code of practice for integrated control technology of the tomato chlorosis virus diseases 2018-07-27发布2018-12一01实施中华人民共和国农业农村部发布目。吕本标准按照GBjT1.1-2009给出的规则起草。本标准由农业农村部农产品质量安全监管司提出。本标准由全国蔬菜标准化技术委员会CSACjTC467)归口。NY j T 3262-2018 本标准起
2、草单位:湖南省植物保护研究所、山东省蔬菜工程技术研究中心、湖南省蔬菜研究所、中国农业科学院、浙江省农业科学院、中国农业大学。本标准主要起草人:刘勇、国家进、王茂昌、史晓斌、张德咏、张松柏、张卓、张战凯、张友军、自占兵、燕飞、陶小荣、刘鹏飞、张锡玉。I 番茄褪绿病毒病综合防控技术规程范围本标准规定了番茄褪绿病毒病的术语和定义、防治原则、防治方法等技术要求。本标准适用于番茄产区番茄褪绿病毒病2 规范性引用文件下列文件对于本文件件。凡是不注日期的引3 3.1 综合防基于以减少来控制农作3.2 3.3 3.4 番茄褪病原为免!JJf品种番茄植株在受到褪 NY/T 3262-2018 番茄植株在受到褪绿
3、病毒侵染时能悟啊四班病作用的可遗传性状，其抗性级别根据病情指数进行判断，病情指数分级标准参见附录B。仅有少量发病，病情指数5.0为高抗品种CHR);病情指数5.125.0为中等抗病品种CMR)。3.5 耐病品种disease-tolerance sp配ies番茄受病毒侵染，生长发育受一定影响，开花、坐果和果实商品性受影响较小的品种，其耐性级别根据病情指数进行判断，病情指数25.135.0为耐性品种。3.6 香精黄板fragrance yellow board NY/T 3262-2018 利用昆虫的趋光性制作的波长范围在597nm577 nm之间，厚度在O.3 mmO.35 mm之间的黄色基板
4、，两面涂O.03 mmO.05 mm热络不干胶，不干胶中含有瓜类香精。4 防治原则以预防为主、综合防治为指导思想，根据番茄褪绿病毒病和传毒媒介昆虫的发生规律及危害特点，从保护生物多样性、优化生产环境、尽可能消灭和减少病毒来源、种植抗病优质品种、减少化学农药的使用角度开展综合防控，实现蔬菜生产安全、蔬菜生态环境安全和蔬菜产品质量安全。5 综合防控技术5.1 快速检测技术具体方法和检测结果按附录C的规定执行。5.2 农业防治5.2.1 选择抗病或耐病晶种选用适宜种植的耐病品种，由于目前并未发现抗病品种，种子质量应符合GB16715.3规定。目前试验中只发现两个耐病品种，参见附录D。5.2.2 棚室
5、清洁育苗及定植前彻底清除棚内的枯枝落叶、杂草和自生苗等，并用20%辣根素水乳剂1L/hm21.5 L/hm2常温烟雾，或用10%异丙威烟剂7.5kg/hm2 9 kg/hm2熏蒸，使用过程按照GB/T8321、GB4285的规定执行。5.2.3 培育无病壮苗采用72孔育苗盘基质育苗，早春茬白天温度控制在230C320C，夜间温度控制在120C17C。定植前进行低温炼苗，炼苗温度控制在20C80C之间，持续7d。苗期全程用60目防虫网覆盖，育苗盘上方悬挂香精黄板。5.2.4 诱虫植物种植番茄定植l周后，温室主要通风处及两侧种植烟草，每隔5m10 m种植l棵。对烟草使用内吸性杀虫剂进行灌根，对粉虱
6、进行集中诱杀。前风口是烟粉虱主要迁入通道，6月下旬，在前通风口外侧种植玉米:一是降低前风口处的温度，减少烟粉虱发生;二是对烟粉虱起到驱避作用。5.2.5 延迟栽培将番茄定植时间延后，避开由于高温引起的烟粉虱盛发期。5.3 物理防治5.3.1 高温闷棚及土壤熏蒸6月底7月初，棚内地面覆膜，膜下随水冲施35%戚百亩40kg60 kg熏蒸处理土壤，密闭棚膜闷棚15d20 d。5.3.2 双网驱避定植前1周内，温室顶部通风口、前通风口罩遮光率为50%70%的黑色遮阳网，起到驱避烟粉虱的作用。5.3.3 降温处理定植前1周内，将降温剂均匀喷洒于棚膜外侧，降低棚内温度，每667m2用量1 5kg20 kg
7、。5.3.4 香精黄板防治定植后，温室内悬挂香精黄板(每6 6 7m2 20片30片)，挂置高度比植物顶端高5cmlO cm。本标准采用的香精黄板规格有100mmX 120 mm,200 mmX 240 mm,240 mmX400 mm。NY/T 3262-2018 5.4 生物防治5.4.1 定植前施用播种前用生物制剂沼泽红假单细胞菌(有效活菌数二三2亿个/mU300mL兑水30kg浸种15min。5.4.2 定植后灌根定植后，第2d第3d缓苗后用生物制剂枯草芽抱杆菌(有效活菌数二三8亿个/mU150倍200倍液灌根，每667m2用量5L。5.4.3 苗期、花期、幼果期喷施用生物制剂沼泽红假
8、单细胞菌(有效活菌数二三5亿个/mU以1:300比例稀释喷雾，在番茄苗期、花期、幼果期集中喷施2次3次。5.5 化学防治5.5.1 病毒病初期防控番茄病毒病发病初期可喷施2%宁南霉素水剂250倍300倍液或1.5%植病灵1000倍1500 倍液、20%吗琳肌500倍1000倍液、0.5%菇类多糖水剂300倍500倍液等，每隔5d7 d喷1次，连续喷2次3次。喷施时，可以结合叶面肥、五丰盛等一起使用，以提高效果。5.5.2 粉虱防控番茄移栽时，将5%毗虫琳片剂(每667m2 60 g80 g)施人深8cm左右的定植穴内，确保施药点在根部周围，定植完成后浇水。在番茄的生长前期、生长中期、生长后期分
9、别用22.4%螺虫乙醋悬浮剂1000倍2000倍液、25%唾虫嗦水分散粒剂2000倍3000倍液、77.2%霜霉威盐酸盐2500倍3000 倍液，分3次进行灌根处理，灌根量为200mL/株。在粉虱密度较低时(2头/株5头/株)，可选用22.4%螺虫乙醋悬浮剂1000倍2000倍液、25%唾虫嗦水分散粒剂2000倍3000倍液、30%院虫眯徽乳剂4000倍6000倍液、70%毗虫琳水分散粒剂2500倍5000倍液等交替施用进行防控。间隔10d15 d喷施1次。6 建立防治档案建立番茄褪绿病毒病防治档案，具体档案记录表格参见附录E。3 NY/T 3262-2018 附录A(资料性附录)番茄褪绿病毒
10、病主要特征A.1 发生与流行规律在我国，番茄褪绿病毒主要是由烟粉虱传播，因此病毒病的发生与烟粉虱的发生流行密切相关。烟粉虱发生重时，番茄褪绿病毒病的发生也随之加重。一般田块的发病率均高于50%，受害蔬菜产量降.1 低60%，单价降低50%以上，造成严重危害。在北方，春季4月5月，秋季8月9月，温室大棚内的设施番茄上病毒病发生较为严重;而在南方温室大棚内，常年温度较高，适合烟粉虱生长繁殖，可导致病毒病周年均有发生，且发生较为严重。在露地栽培的番茄，一般在4月5月初进行大田移栽、定植，由于温度较低，不适合烟粉虱生长、繁殖，田间病毒病发生轻;5月底至6月初，田间开始出现病毒病植株;随着烟粉虱种群不断
11、增大、田间操作频繁，病毒病逐渐加重，并传播扩散。因此，应选择烟粉虱数量较少时进行早期防治，防止烟粉虱数量增多造成病毒病的暴发。A.2 苗期症状番茄苗期感染番茄褪绿病毒后，叶片叶脉间表现局部褪绿斑点，症状不明显，较难辨认。番茄定植后15d，若条件适宜，即能表现发病症状，主要表现为植株滞育，矮小瘦弱，顶部叶片黄化，下部成熟叶片叶脉间褪绿(见图A.l)。图A.l番茄早期感染ToCV的症状A.3 开花期症状番茄定植后40d50 d进入开花期，在番茄上表现明显的症状。中下部叶片首先出现症状并逐渐向上发展，中部叶片叶脉间轻微褪绿黄化，底部叶片出现明显的叶片褪绿黄化，叶脉深绿，感病叶片变脆4 NY/T 32
12、62-2018 且易折，叶片黄化疑似营养缺素症(见图A.2)。图A.2番茄开花期感染ToCV的症状A.4 结果期症状番茄进入结果期，该病毒在番茄上的症状进一步加重。感病的番茄整株表现褪绿黄化症状，果实小、颜色偏白，不能正常膨大。在高温环境下，幼果失去绿色，变成白色，有的表现为畸形。叶片表现脉间褪绿黄化症状，边缘轻微上卷，局部出现红褐色坏死小斑点。后期叶脉浓绿，脉间褪绿黄化，变厚变脆且易折，最后叶片干枯脱落(见图A.3)。果实小，并开始转色成熟，使番茄失去商品价值，严重时造成绝产(见图A.的。图A.3番茄结果期感染ToCV的症状图A.4番茄果实感染ToCV的症状5 ULFZ NY/T 3262-
13、2018 附录B(资料性附录)番茄褪绿病毒病病情分级标准番茄褪绿病毒病病情分级见表B.l。表B.1番茄褪绿病毒病病情分级标准病情分级症状描述O级元症状明脉，轻度矮化，叶片面积低于正常叶面积的80%，部分老叶黄化失绿，心叶黄化，大部分叶片不表现1级症状，前期果实生长和发育正常，仅最后2穗果发育受抑制，果实变小，幼果变白，结果期有3穗以上的果实植株矮化，株高不到健株90%，果实基本达到商品果标准心叶黄化，中部叶片花叶，老叶黄化数盐达到叶片总数的30%，株离不到健株的80%，叶片面积低于3级正常叶面积的70%，前期果实基本正常发育，前3穗果实达到商品果要求，后期果实变小，发育受影响，结果期有2穗果植
14、株矮化，高温环境下果实变向显著心叶黄化，中部叶片花叶，少数叶片畸形、皱缩或植株轻度矮化，株高不到健株的70%，叶片面积低于5级正常叶面积的50%，老叶黄化失绿叶片占40%，仅余叶脉为绿色，果实小，有2穗果实能达到商品果标准心口十黄化，叶片面积低于正常叶面积的40%，老叶黄化失绿叶片占50%，严重叶片仅余叶脉为绿色，7级叶片脆，叶片上有褐色坏死斑点，重花叶，多数叶片畸形、皱缩，植株明显矮化，株高不到健株的60%，顶部典型黄化曲叶，结果期下部有l穗果植株矮化，果实小，仅有l穗能达到商品果标准心叶黄化，叶片面积低于正常叶面积的30%，老叶黄化失绿占叶片的60%以上，仅余叶脉为绿色，叶9级片脆，叶片上
15、有褐色坏死斑点，重花叶，叶片明显畸形，线叶，植株严重矮化，株高低于健株1/3，果实/卜，丧失商品性注:大果番茄单果重大于100g为商品果基本要求。6 NY/T 3262-2018 附录C(规范性附录)番茄褪绿病毒分子生物学检测C.1 模板RNA的制备用植物RNA提取试剂盒分别提取健康和感病叶片组织的总RNA。C.2 RT-PCR扩增C.2.1 反转录以提取的总RNA为模板，随机引物进行反转录，合成cDNA。具体反应体系及步骤如下:第一步:配制反应混合液(见表c.l)。表C.l反应混合液试剂体积Total 孔NAlL Oligo dT Primer(50mol/L)lL dNTP Mixture
16、(10 mmol/L each)lL ddH20 7L 总体积10L 第二步:反应混合液孵育。将上述反应混合液6 50C孵育5min.冰上迅速冷却。第三步:配制反转录反应液(见表C.2)。表C.2反转录反应液试剂体积反应混合液10 L 5 X PrimeScript rr Buffer 4L RNase Inhibitor(40 U/L)O.5L PrimeScript rr RTase(200 U/L)1L ddH20 4.5L 总体积20L第四步:反转录反应。将反转录反应液在420C处理1h后.950C处理3min终止反应。反转录反应液保存于200C。C.2.2 反应引物根据番茄褪绿病毒的
17、CP基因设计引物.F:5-AAACTGCCTGCATGAAAAGTCTC-3;R:5-GGTTTGGATTTTGGTACTACATTCAGT-3.预期扩增大小为466bp。C.2.3 反应体系反应体系见表C.30 7 NY/T 3262-2018 表C.3 ToCV RT-PCR反应体系试剂体积PCR Mix 10.0/lL 上游引物ToCV-F 1.0 L 下游引物ToCV-R1.0 L cDNA模板1.0 L ddH20 7L 总体积20LC.2.4 反应程序反应程序如下:940C预变性2min;940C变性155,560C退火305,720C延伸305，扩增35个循环;720C延伸10m
18、in;40C终止反应。C.3 琼脂糖;疑胶电泳取扩增产物51.lL，与3Lloading buffer混匀后，加入到1.5%琼脂糖凝胶000mL 1.5%琼脂糖凝胶含有5LDNA GYBR green 1)的点样孔内，其中一个点样孔点上DNA分子标记。电泳缓冲液1XTAE,120 V，电泳30min。电泳结束后，取出琼脂糖凝胶，置于凝胶成像系统中，观察并记录DNA条带有元和条带大小。C.4 检测结果判定RT-PCR扩增产物大小为466bp。阳性对照有目标条带而阴性对照和空白对照无目标条带时，检测结果有效。扩增片段与预期目标条带大小一致，则结果判定为阳性，无目标条带则为阴性，见图C.1o8 M
19、2 3 4 5 6 7 8 9 10 II 12 13 14 15 16 17 18 19 20 CKI CK2 CK3 说明.M一一-2k marker;1-3,5-20 样品检测结果阳性;CKl-阳性对照;CK2-一阴性对照，4一一样品检测结果阴性CK3一一空白对照。图C.l番茄是否感染ToCV的RT-PCR检测结果D.1 钻红美丽附录D(资料性附录)番茄耐病晶种钻红美丽见图D.1，其他对照品种见图D.2。图D.l钻红美丽D.2 小公主小公主见图D.3，其他对照品种见图D.4。图D.3小公主NY/T 3262-2018 图D.2其他对照品种图D.4其他对照晶种在寿光田间示范中，钻红美丽和小
20、公主比其他对照品种表现出非常明显的耐病性状。9 NY/T 3262-2018 附录E(资料性附录)茄科蔬菜病毒病防治档案茄科蔬菜病毒病防治档案记录表格见表E.l。表E.l防治档案记录表格日期前茬病虫害发生情况曾使用过防治方法防治番茄当前使用发病率或病情作物褪绿病毒病或传毒害虫当茬作物防治方法有虫率指数%10 gON|NN的FH问Z中华人民共和国农业行业标准番茄褪绿病毒病综合防控技术规程NY/T 3262-2018 提中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)(邮政编码:100125网址:)中国农业出版社印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经销*争6等印张1字数20千字2018年11月北京第1次印刷*开本880mmX1230mm 1/16 2018年11月第1版书号16109 4617 定价28.00元*版权专有侵权必究举报电话(010)59194261 8