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1、ICS 65.020.01 CCS 16 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3855一2021小麦抱囊线虫检测技术规程Technical code of practice for detection of wheat cyst nematodes 2021-05-07发布2021-11-01实施吃4;中华人民共和国农业农村部发布,本xfllll农业农村it仰1;血性价fI!口l侃出)j归门。本文il币单位小|司农业科学院中j l(物保护研究所.本)(fhli，!人:彭德良、彭焕，1.7义坤、孔令纭。NY/T 3855-2021 Y/T 3855-2021 小麦子包囊线虫检测技术规程范围
2、本文11)见ii丁小友于包当过绞虫检抽!IJ(I(JA己it-f和定义、试开IJ利l设备、杆本采集和分离、分子检测方法、t.i*如|、样品保仔。本刻1迈JIJ于小友;:iH灿灿(l42制始制性i;fIJ dii缆线虫(I-1llerod，ra.fili jlvi)的分子检测。2 规范性引用文件下夕IUdl小的内容仅l在日WJx.j州的版本义斗。3 4 Gl/T 6682 NY/1 35:l3 SN/T 275 4.1主4.1.1 规定。4.1.2 4.1.3 4.1.4 101 DNA 4.1.5 d:JTPs,dA 4.1.6 JmH椭凝JI止，14.1.7 1 X丁AI二缓冲illio4.
3、1.8 核ni染料.4.2 主要设备4.2.1 fi/;(1 向9m:孔径分别为0.025mm,O.18 mm布10.85mmo 4.22 生物!1P.微锐，10忻l000衍。4.23 体视M.微镜101古120俏。4.2.4 百I洲地相移ilUim，2.5L，JO1.1.、100fL、2001 1.和110001.0 4.25 凝胶成你系统。4.2.6 II:l泳仪。4.2.7;j(lcll!.Iij(:/o 4.2.8 r:i!ili f式肉心机。4.2.9 PCR仪。l.t:i:日期的，;I川)(11.修改1y1)迫川Jf本1 级水的NY/T 3855-2021 5 样本采集和分离5.1
4、 样本采集t在NY/T35:n的规定执行.5.2 线虫分离分lk样品1的一龄r)j ill，fll袍!Pf:o分Tt.)J法参见:-JY/T:15:l:3-2020 IIH,l:1呈。6 分子检测6.1 线虫DNA提取t:ii附录A的规定执行。6.2 检测l方法6.2.1 方法采川ij;JiPCR技术。6.22寻|物禾谷包虫草线虫(Ijj二向引物HaFl)J 5丁GACG八CAACATATGATCCGGAIC八T3，反11J11物!-Ial1为S-G八C;CCGGTCGC八ATGAAA丁CCA丁-3。|在利Ff包现线ill的正向号|物HrFl:为5-CACGACGAAACTCArCAACCAA
5、:;，反向引物!-IfRl为5八CGGCGAAC八GCAGAAG八TfAGA3。,;I物榕浓浓!:)为10mol/I.o6.3 反应体系在设定的PCR价I1m入10X PCR缓;1液2，5L，11 DNA聚合fW0,5I.JJ.:向引物和l反11引物各0，511.,dNTP日21.，街拍I!样l111的DNA校板I1.，HI dd H，()补至2511.。阴11刘)!(1用ddH，O代替DNi攸棍。6.4 反应程序950CIj变性5min;950C变n1 min.56Cill火1min,720C延伸min，共:l5个1m!、;720C延jljl10 mino 1引i约束后.PCR产物?lf干4
6、0C似.(o6.5 琼脂糖i疑胶电泳检测llX 101.PCR产物在琼脂粉f凝JI史上也泳分l!，经核阪染料染包后，在凝l快成你系统下观察。7 结果判定阴性对!ff米LIlJ:妃条梢，1训IJ样11111:现616bp;击仿步IJ淀粉:J:1Ii利W:抱娓线!.,:(:IJ i.则样1日rLU现1010 bp 条;:g;j:rj定检rH禾谷抱线线虫。纺织JIJi实见附及日。待il!J.ft山，计次检测纣iJ扯为1ItUI(j,-，n复检测一次，1树次检由IJJ!，)为IJ性lI.t.mWJ样171判定为旧1怕。8 样本保存IH问采集的i.J:;g，fl本应放忧于llOC保存至少6个月.以1.l
7、U柿。2,NY/T 3855-2021 附录A(规范性)线虫。NA提取A.1 11:O.2时，PCR价巾JJII人10，L灭岗位1H，O，挑人单个抱必或1(1.条一龄幼虫，宜于液氮中冷冻J rnin。A.2 1句PCRtrjY门冰L.J1J j:j破硝栋将钱虫l岩1i半。A.3 1句 PCR111,rnfu(rl冷冻1m i n,.11.11-复.20A.4 PCR位1JJII人8 L(19 IOX PCR缓冲液，2,L lli II/J溶液，7i于-800C下冷冻2h。A.5 1句PCR价i仅川，650C下tltrl1.5 1丁，然后950C0 min!10000 r/min Ti.心1mi
8、no A.6 J仅I.，i由于200C似有备Hlo3 NY/T 3855-2021 附录B(资料性)PCR检测结果判读琼脂糖i也泳分离完成后，采川JHW1耳111-1门之JrJl物从拍l样品(1 泳迫)扩拙111646bp条甜、阴性对J!t-t(5泳道)未出现!条带时.判定待、样耐届嗣也也血事结线虫，其生j!f)J!业nJ￥JB.l所不;采JTJHaFl.fl l-IaRl寻|物从待J!IJ样品(613泳温谭震攫踊温团部帧匾疆罐噩噩噩幽lxI!f(14泳j且)未出现条情i时，判定待祖!lj;j，II，检出禾行于包必线虫，标JlJj。说19M 一一-1)2000DN八分子:.H，lm6-1:-lIf测样品14-I IftX.t!t.图B2禾谷于包裹线虫PCR分子检测结果4 NON-BRHUFZ 1同农业山版社山版(:I);川IJ怕lIiIll2去-fm衍18号楼)网I、叽IW.ca)JU;印刷一厂1111，1新华书店北京友行Bi:&:i 各地新华书店经销拎.x(邮政编码100125祷CjJ O.75 二f一数15下二12021年10.FI北京第I次印刷x 2021年10月I J:画1I号，16109.8712 定价24.00元提JF二880mmX1230mm 1/16 版权专有侵权必究举报电话(010)59194261 NY/T 3855-2021