《GA∕T 1615-2019 法庭科学 生物检材中氯氮平检验 气相色谱和气相色谱-质谱法(公共安全).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《GA∕T 1615-2019 法庭科学 生物检材中氯氮平检验 气相色谱和气相色谱-质谱法(公共安全).pdf（10页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材中氯氮平检验 气相色谱和气相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for clozapine in biological samplesGC and GC-MS -发布-实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒
2、物分析分技术委员会（SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、山西医科大学。本标准起草人：张蕾萍、王爱华、任昕昕、董林沛、宋歌、王芳琳、于忠山、何毅、贠克明、王玉瑾、栾玉静。GA/T 1 法庭科学 生物检材中氯氮平检验 气相色谱和气相色谱-质谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中氯氮平的气相色谱（GC）定量检验方法和气相色谱-质谱（GC-MS）定性定量检验方法。本标准适用于法庭科学生物检材中氯氮平的定性分析和定量分析。其他可疑样品中氯氮平的定性分析和定量分析可参照使用。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必
3、不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩后，采用气相色谱-质谱法定性定量，气相色谱法定量，以保留时间、质谱特征离子碎片峰和相对丰度比作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。5 试剂及材料 5.1 试剂 实验用水应符合GB/T 6682中规定的三级水。除非另有
4、说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括：a)乙醇；b)甲醇；c)二氯甲烷；d)乙酸乙酯；e)磷酸二氢钠；f)磷酸氢二钠；g)硼砂；h)氢氧化钠；i)1%氢氧化钠溶液：称取 1.0g 氢氧化钠用水溶解并稀释至 100mL；GA/T 2 j)磷酸盐缓冲液(pH 值 6)：称取磷酸氢二钠（Na2HPO4 12H2O）8.812g，磷酸二氢钠（NaH2PO4 2H2O）27.37g，加水溶解并稀释至 1000mL；k)硼砂-氢氧化钠缓冲液（pH 值 10）：称取硼砂（Na2B4O7 10H2O）2.38g,氢氧化钠 0.86g，加水溶解并稀释至 500mL；l)标准溶液：1)1.0mg/mL 标
5、准物质溶液：根据氯氮平标准物质的纯度，称取适量，用甲醇配制 1.0mg/mL氯氮平标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准溶液；2)0.1mg/mL 标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的氯氮平标准物质溶液 1.0mL，用甲醇定容至10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存。有效期 3 个月。实验中所用其他浓度的标准工作溶液均由 1.0mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到。注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。5.2 材料 材料包括：a)具盖离心管；b)具塞玻璃试管；c)pH 试纸：范围 114；d)固相萃取柱：Oasis HLB 固相萃取柱或其他等效固相萃取柱
6、，使用前依次用甲醇、水活化。注：Oasis HLB柱是Waters公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。6 仪器和设备 仪器和设备包括：a)气相色谱仪：配有氮磷检测器（NPD）；b)气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）；c)移液器；d)电子天平；e)超声清洗器；f)振荡器；g)离心机；h)浓缩器。7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 液液提取 移取血液等液体检材样品1.0mL5.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g5.0g于具盖离心管中，加入一定量的
7、硼砂-氢氧化钠缓冲液或1%氢氧化钠溶液调pH值至910，再加入二氯甲烷或乙酸乙酯5mL10mL，振荡10min，8000r/min离心10min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，在浓缩器上50浓缩至干。残留物用甲醇100L溶解，作为检材样品提取液供仪器分析。GA/T 3 7.1.1.2 固相萃取(适用于新鲜的血液样品)移取血液检材样品1.0mL5.0mL于具盖离心管中，加入磷酸缓冲液（pH值6）5mL10mL，混匀，超声15min，8000r/min离心20min，取上清液转移至已活化好的固相萃取柱中，控制流速为0.5mL/min1.0mL/min，依次用3mL甲醇/水溶液（体
8、积比5:95）淋洗；用4mL二氯甲烷洗脱，收集洗脱液在浓缩器上50下浓缩至干，残留物用甲醇100L溶解，作为检材样品提取液供仪器分析。7.1.1.3 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加氯氮平标准物质，作为添加样品（添加样品的浓度为1.0g/mL(g)），与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器分析。7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件（气相色谱-质谱）以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：DB-5MS 毛细色谱柱(30m 0.25mm 0.2
9、5m)或等效色谱柱；注：DB-5MS 为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)色谱柱温程：100保持 2min，以 15/min 速率升温至 280，保持 17min；c)进样口温度：280；d)传输线温度：230；e)离子源温度：200；f)载气：高纯氦气；g)柱流量：1mL/min2mL/min；h)分流比：5:150:1；i)质量扫描范围：40amu450amu；j)扫描方式：全扫描（SCAN）。7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，
10、按 7.1.2.1 的分析条件进样分析。7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 移取血液等液体检材样品1.0mL5.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品1.0g5.0g两份，按7.1.1进行操作。另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份添加氯氮平标准物质作为添加样品（添加样品中目标物含量应为检材样品中目标物含量的(10050)%），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器分析。7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：GA/T 4 a)色谱柱：DB-
11、1 毛细色谱柱（30m 0.32mm 0.25m）或等效色谱柱；注：DB-1 为 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)色谱柱温程：200保持 1min，以 10/min 速率升温至 280，保持 10min；c)进样口温度：280；d)检测器温度：300；e)载气：氮气；f)分流比：5:150:1；g)柱流量：1.0mL/min2.0mL/min。7.2.2.1.2 气相色谱-质谱条件 按7.1.2.1规定的条件分析。7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液
12、及标准工作溶液，按 7.2.2.1 的分析条件每个样品进样分析23 次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6 次。7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品提取液平行进样 23 次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（1）计算含量：添样添样添样VMAVMAW=.（1）式中：W检材样品中目标物的含量，单位为微克每克（g/g）或微克每毫升（g/mL）；A样检材样品提取液中目标物峰面积平均值；M添添加样品中标准物添加量，单位为微克（g）；V样检材样品的定容体积，单位为毫升（mL）；A添添加样品提取液中目标物峰面积平均值；M样检材样品的取样量，单位为克（g）或毫升（mL）；V添
13、添加样品的定容体积，单位为毫升（mL）。7.2.3.2 计算相对相差 记录两份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（2）计算相对相差：%100XXXRD21=.（2）式中：RD相对相差，用百分比（%）表示；X1、X2两个检材样品平行定量测定的含量数值；X两个检材样品平行定量测定含量的平均值。8 结果评价 GA/T 5 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与标准溶液一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，
14、相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。GC-MS 分析检出限参见附录 A 中 A.1，相关质谱图参见附录 A 中图A.1图 A.3。氯氮平中毒资料参见附录 B。表 1 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 10 15 20%50%8.1.2 阴性结果评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如
15、果检材样品中目标物含量的 RD20%，定量数据不可靠。应按 7.2 重新提取检验。GA/T 6 A A 附 录 A（资料性附录）氯氮平的相关谱图及数据 A.1 气相色谱图 氯氮平的气相色谱图见图A.1。4.0(x10,000)14.571/773021.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min-1.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min-1.0uV14.571/773021.02.03.04.05.
16、06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min-1.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min-14.571/773021.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min1.0-1.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min0.50.00.51.5
17、2.02.53.03.514.571/773024.0(x10,000)14.571/773021.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min-1.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min-1.0uV14.571/773021.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min-1.02.03.04.05.06.07
18、.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min-14.571/773021.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min1.0-1.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.014.015.016.017.018.019.0 min0.50.00.51.52.02.53.03.514.571/77302 图A.1 氯氮平的色谱图（tR=14.5）A.2 气相色谱-质谱图 氯氮平的气相色谱-质谱图见图A.2、
19、图A.3。5.07.510.012.515.017.520.022.525.00.01.02.03.04.0(x1,000)/20.398/118915.07.510.012.515.017.520.022.525.0(x1,000)5.07.510.012.515.017.520.022.525.0(x1,000)5.07.510.012.515.017.520.022.525.0(x1,000)5.07.510.012.515.017.520.022.525.00.01.02.03.04.0(x1,000)/20.398/118915.07.510.012.515.017.520.022.
20、525.0(x1,000)5.07.510.012.515.017.520.022.525.0(x1,000)5.07.510.012.515.017.520.022.525.0(x1,000)图 A.2 氯氮平总离子流图（tR=20.3）GA/T 7 图 A.3 氯氮平质谱图（m/z 70,243,42）A.3 检出限 生物检材中氯氮平检出限见表A.1。表A.1 生物检材中氯氮平的检出限 样 品 检出限 气相色谱法 气相色谱-质谱法 血 液 g/mL 0.02 0.05 组 织 g/g 0.1 0.1 GA/T 附 录 B（资料性附录）氯氮平中毒资料 B.1 中毒症状 最常见的症状包括谵妄、
21、昏迷、心动过速、低血压、呼吸抑制或衰竭、唾液分泌过多等，过量服用可致嗜睡、眩晕、运动失调，超大剂量后可至昏迷。氯氮平的过量中毒，临床主要表现为：a)警觉性下降，可致昏迷；b)心动过速、心律失常、低血压；c)中枢和周缘抗胆碱能症状，瞳孔缩小；d)口服一次剂量超过2g者，死亡率高达12%，死亡原因为心肺衰竭。B.2 氯氮平中毒及死亡机理 口服或注入过量的氯氮平可引起中毒或死亡，其毒性主要表现在对神经系统、造血系统、消化系统和泌尿系统的控制，最后导致中毒者死亡。B.3 氯氮平中毒死亡尸体解剖情况 氯氮平药物急性中毒死亡的尸体主要表现为全身散在性紫瘢。尸体解剖所见，胃粘膜充血或出血。B.4 氯氮平治疗及中毒致死量 药物治疗量：首剂25mg，治疗剂量（200400）mg/日，最高达600mg/日。氯氮平大剂量服用可致人死亡，人血中治疗浓度为160g/L500g/L，血中毒浓度为3200g/L4500g/L。B.5 氯氮平结构 氯氮平的化学名称为8-氯-11-(4-甲基-1-哌嗪基)-5H-二苯并二氮杂卓，分子量326，分子式C18H19ClN4，化学结构见图B.1。图B.1 氯氮平结构 _