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1、ICS 11.220 B 41 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 541一2016代替NY/T541-2002 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范Technical specifications for collection,storage and transportation of veterinary diagnostic specimens 2016-10-26发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部发布NY/T 541-2016 目IJ1=1 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准代替NY/T541-2002(动物疫病实验室检验采样方法。与NY/T5
2、41-2002相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下:补充了该标准相关的规范性引用文件;补充了动物疫病实验室检验样品、采样、抽样单元、随机抽样等术语和定义;一一对样品采样的基本原则进行了梳理归类，细化和完善了采样的基本原则;-一一补充了原标准NY/T541-2002未涵盖实验室检测样品(环境和饲料样品、脱纤血样品、扁桃体、牛羊o-P液、肠道组织样品、鼻液、唾液等)的采集规定，补充细化了常见畜禽的采血方法，克服了部分标题用词不准确和规定相对笼统的问题;一一细化和完善了样品的包装、保存和运送环节，增强了标准的可操作性、实用性。本标准由农业部兽医局提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/
3、TC181)归口。本标准起草单位:中国动物卫生与流行病学中心、青岛农业大学。本标准主要起草人:曲志娜、刘焕奇、孙淑芳、赵思俊、姜雯、王娟、曹旭敏、宋时萍。本标准的历次版本发布情况为:一-NY/T541-20020 I NY/T 541-2016 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范1 范围本标准规定了兽医诊断用样品的采集、保存与运输的技术规范和要求，包括采样基本原则、采样前准备、样品采集与处理方法、样本标准适用于兽医诊断、品的采集、保存和运输。样记录和样品运输等。及卫生认证等动物疫病实验室样W盯华华华GN中中中一输包装规范3.1 样品3.2 采样sample 按照规定的程序和要过程。3.3 适
4、当的处理，留做待检样品的抽样单元sampling unit 同一饲养地、同一饲养条件下的畜禽个体或群体。3.4 随机抽样random sampling 按照随机化的原则(总体中每一个观察单位都有同等的机会被选入到样本中).从总体中抽取部分观察单位的过程。3.5 灭菌sterilization 1 NY/T 541-2016 应用物理或化学方法杀灭物体上所有病原微生物、非病原微生物和芽抱的方法。4 采样原则4.1 先排除后采样凡发现急性死亡的动物，怀疑患有炭瘟时，不得解剖。应先按NY/T561-2015中2.1.2的规定采集血样，进行血液抹片镜检。确定不是炭瘟后，方可解剖采样。4.2 合理选择采
5、样方法4.2.1 应根据采样的目的、内容和要求合理选择样品采集的种类、数量、部位与抽样方法。样品数量应满足流行病学调查和生物统计学的要求。4.2.2 诊断或被动监测时，应选择症状典型或病变明显或有患病征兆的畜禽、疑似污染物;在无法确定病因时，采样种类应尽量全面。4.2.3 主动监测时，应根据畜禽日龄、季节、周边疫情情况估计其流行率，确定抽样单元。在抽样单元内，应遵循随机取样原则。4.3 采样时限采集死亡动物的病料，应于动物死亡后2h内采集。无法完成时，夏天不得超过6h.冬天不得超过24 h。4.4 无菌操作采样过程应注意无菌操作，刀、剪、慑子、器皿、注射器、针头等采样用具应事先严格灭菌，每种样
6、品应单独采集。4.5 尽量减少应激和损害活体动物采样时，应避免过度刺激或损害动物;也应避免对采样者造成危害。4.6 生物安全防护采样人员应加强个人防护，严格遵守生物安全操作的相关规定，严防人兽共患病感染;同时，应做好环境消毒以及动物或组织的元害化处理，避免污染环境，防止疫病传播。5 采样前准备5.1 采样人员采样人员应熟悉动物防疫的有关法律规定，具有一定的专业技术知识，熟练掌握采样工作程序和采样操作技术。采样前，应做好个人安全防护准备(穿戴手套、口罩、一次性防护服、鞋套等，必要时戴护目镜或面罩)。5.2 采样工具和器械5.2.1 应根据所采集样品种类和数量的需要，选择不同的采样工具、器械及容器
7、等，并进行适量包装。5.2.2 取样工具和盛样器具应洁净、干燥，且应做灭菌处理:a)刀、剪、慑子、穿刺针等用具应经高压蒸汽003.43 kPa)或煮沸灭菌30min.临用时用75%酒精擦拭或进行火焰灭菌处理;b)器皿(玻制、陶制等)应经高压蒸汽003.43 kPa)30 min或经160.C干烤2h灭菌;或置于1%2%碳酸氢铀水榕液中煮沸10miw、-15min后，再用无菌纱布擦干，无菌保存备用;c)注射器和针头应放于清洁水中煮沸30min.无菌保存备用;也可使用一次性针头和注射器。5.3 保存液应根据所采样品的种类和要求，准备不同类型并分装成适量的保存液，如PBS缓冲液、30%甘油磷酸盐缓冲
8、液、灭菌肉汤CpH7.27.4)和运输培养基等。NY/T 541-2016 6 样品采集与处理6.1 血样6.1.1 采血部位6.1.1.1 应根据动物种类确定采血部位。对大型哺乳动物，可选择颈静脉、耳静脉或尾静脉采-阳，也可用肢静脉或乳房静脉;毛皮动物，少量采血可穿刺耳尖或耳壳外侧静脉，多量采血可在隐静脉采集，也可用尖刀划破趾垫0.5cm深或剪断尾尖部采血;啃齿类动物，可从尾尖采血，也可由眼窝内的血管丛采血。6.1.1.2 猪可前腔静脉或耳静脉采血;羊常采用颈静脉或前后肢皮下静脉采血;犬可选择前肢隐静脉或颈静脉采集;兔可从耳背静脉、颈静脉或心脏采的1;禽类通常选择翅静脉采血，也可心脏采血。6
9、.1.2 采血方法应对动物采血部位的皮肤先剃毛(拔毛)，用1%2%腆町消毒后，再用75%的酒精棉球由内向外螺旋式脱腆消毒，干燥后穿刺采血。采血可用采由-器或真空采血管(不适合小静脉，适用于大静脉)。少量的血可用二.棱针穿刺采集，将血液滴到开口的试管内。6.1.2.1 猪耳缘静脉采血按压使猪耳静脉血管怒张，采样针头斜面朝上、呈15。角沿耳缘静脉由远心端向近心端刺入血管，见有血液回流后放松按压，缓慢抽取血液或接入真空采血管。6.1.2.2 猪前腔静脉采血6.1.2.2.1 站立保定采血将猪的头颈向斜上方拉至与水平面呈30。以上角度，偏向一侧。选择颈部最低凹处，使针头偏向气管约15。方向进针，见有血
10、液回流时，即把针芯向外拉使血液流入采血器或接人真空采血管。6.1.2.2.2 仰卧保定采血将猪前肢向后方拉直，针头穿刺部位在胸骨端与耳基部连线上胸霄端旁2cm的凹陷处，向后内方与地面呈60。角刺入2cm3 cm，见有血液回流时，即把针芯向外拉使血液流人采血器或接人真空采血管。6.1.2.3 牛尾静脉采血将牛尾上提，在离尾根10cm左右中点凹陷处，将采血器钊头垂直刺人约1cm，有血液回流时，即可把针芯向外拉使血液流入采血器或接入真空采血管。6.1.2.4 牛、羊、马颈静脉采血在采血部位下方压迫颈静脉的1管，使之怒张，针头与皮肤呈45。角由下向上方刺入血管，见有血液回流时，即可把针芯向外拉使血液流
11、入采血器或接人真空采血管。6.1.2.5 禽翅静脉采血压迫翅静脉近心端，使血管怒张，针头平行刺入静脉，放松对近心端的按压，缓慢抽取血液;或用针头刺破消毒过的翅静脉，将血液滴到直径为3mm4mm的塑料管内，将一端封口。6.1.2.6 禽心脏采血6.1.2.6.1 雏禽心脏采血tl头平行颈椎从胸腔前口插入，见有血液回流时，即把针芯向外拉使血液流入采血器。6.1.2.6.2 成年禽心脏采血右侧卧保定日时才，在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的l/2处，垂直或稍向前方刺人2cm口n-r户、.乌、斗白仰卧保定日时才，胸骨朝上，压迫嗦囊，露出胸前口，将针头沿其锁骨俯角剌人，)1川l顺匮着体中
12、线方向水平剌人心脏，见有血液回流即可采集。3 NY/T 541-2016 6.1.2.7 犬猫前营头静脉采血压迫犬猫肘部使前臂头静脉怒张，绷紧头静脉两侧皮肤，采样针头斜面朝上、呈150角由远心端向近心端刺入静脉血管，见有血液回流时，缓慢抽取血液或接人真空采血管。6.1.3 血样的处理6.1.3.1 全血样品样品容器中应加0.1%肝素锅、阿氏液(见A.1，2份阿氏液可抗l份血液)、3.8%4%拘擞酸纳Co.1 mL可抗1mL血液)或乙二胶四乙酸CEDTA，PCR检测血样的首选抗凝剂)等抗凝剂，采血后充分混合。6.1.3.2 脱纤血样品应将血液置入装有玻璃6.1.3.3 血清样品应将血样室温下箱过
13、夜，待大部分下保存，且应避采集双份第一份血清后6.2.1.1所6.2.1.2 应用无容器内或接种于适宜的6.2.2.1 样品应保证新鲜。处临近正常组织的组织块，立即放-200C以血清采于下沉或离方法从新中固定，固定时间-般为16h24 h。切取的组织职人IJ、一般厚度不超过0.5cm，长宽不超过1.5 cmX 1.5 cm，罔定3h4 h后进行修块，修切为厚度0.2cm、长宽1cm X 1 cm大小(检查狂犬病则需要较大的组织块)后，更换新的固定液继续固定。组织块切忌挤压、刮摸和用水洗。如做冷冻切片用，则应将组织块放在OOC40C容器中，送往实验室检验。6.2.2.2 对于一些可疑疾病，如检查
14、痒病、牛海绵状脑病或其他传染性海绵状脑病CTSEs)时，需要大量的脑组织。采样时，应将脑组织纵向切割，一半新鲜加冰呈送，另一半加10%中性缓冲福尔马林溶液固定。6.2.2.3 福尔马林同定组织应与新鲜组织、血液和涂片分开包装。福尔马林固定组织不能冷冻，固定后可以弃去固定液，应保持组织湿润，送往实验室。NY/T 541-2016 6.3 猪扁桃体样品打开猪口腔，将采样枪的采样钩紧靠扁桃体，扣动扳机取出扁桃体组织。6.4 猪鼻腔拨子和家禽咽喉拭子样品取元菌棉签，插入猪鼻腔2cm3 cm或家禽口腔至咽的后部直达喉气管，轻轻擦拭并慢慢旋转2圈3罔，沾取鼻腔分泌物或气管分泌物取出后，立即将拭子浸入保存液
15、或半固体培养基中，密封低温保存。常用的保存液有pH7.27.4的灭菌肉汤(见A.3)或30%甘油磷酸盐缓冲液(见A.4)或PBS缓冲液(见A.日，如准备将待检标本接种组织培养，则保存于含0.5%乳蛋白水解物的Hanks液(见A.6)中。一般每支拭子需保存56.5 牛、羊食道一咽部分泌被检动物在采样都要重复进行消将探杯送入鱼内容物严6.6.1 FR 同可自动6.6.2 反内容物。磷酸盐缓冲液(见A6.8 粪便和旺拭子样6.8.1 粪便样品o-P液。采样用的特制探杯洗。每采完一头动物，探杯右手握探杯，随吞咽动作如采集的o-P液被反集到的8mL10 灭菌容器中，充分混出少量的瘤胃有灭菌的30%甘油，
16、从两端剪断送检。应选新鲜粪便至少10g，做事s.固醇在24h内送达实验室。如运输时间超过24h则应进行冷冻，以防寄生虫虫卵孵化。运送粪便样品可用带螺帽容器或灭菌塑料袋，不得使用带皮塞的试管。6.8.2 旺拭子样品采集缸拭子样品时，取无菌棉拭子插入畜禽旺门或泄殖腔中，旋转2罔3圈，刮取直肠教液或粪便，放人装有30%甘油磷酸盐缓冲液(见A.4)或半同体培养基中送检。粪便样品通常在40C下保存和运输。6.9 皮肤组织及其附属物样品对于产生水泡病变或其他皮肤病变的疾病，应直接从病变部位采集病变皮肤的碎屑、未破裂水泡的水泡液、水泡皮等作为样品。b NY/T 541-2016 6.9.1 皮肤组织样品无菌
17、采取2g感染的上皮组织或水泡皮置于5mL 30%甘油磷酸盐缓冲液(见A.4)中送检。6.9.2 毛发或绒毛样品拔取毛发或绒毛样品，可用于检查体表的蜡虫、跳蚤和真菌感染。用解剖刀片边缘刮取的表层皮屑用于检查皮肤真菌，深层皮屑(刮至轻微出血)可用于检查痴蜡。对于禽类，当怀疑为马立克氏病时，可采集羽毛根进行病毒抗原检测。6.9.3 水泡液样品水泡液应取自未破裂的水泡。可用灭菌注射器或其他器具吸取水泡液，置于灭菌容器中送检。6.10 生殖道分泌物和精液样品6.10.1 生殖道冲洗样品采集阴道或包皮冲洗液。将消毒好的特制吸管插入子宫颈口或阴道内，向内注射少量营养液或生理盐水，用吸球反复抽吸几次后吸出液体
18、，注入培养液中。用软胶管插入公畜的包皮内，向内注射少量的营养液或生理盐水，多次揉搓，使液体充分冲洗包皮内壁，收集冲洗液注入无菌容器中。6.10.2 生殖道拨子样品采用合适的拭子采取阴道或包皮内分泌物，有时也可采集宫颈或尿道拭子。6.10.3 精液样品精液样品最好用假阴道挤压阴茎或人工剌激的方法采集。精液样品精子含量要多，不要加入防腐剂，且应避免抗菌冲洗液污染。6.11 脑、脊髓类样品应将采集的脑、脊髓样品浸入30%甘油磷酸盐缓冲液(见A.4)中或将整个头部割下，置于适宜容器内送检。6.11.1 牛羊脑组织样品从延脑腹侧将采样勺插入枕骨大孔中5cm7 cm(采羊脑时插入深度约为4cm)，将勺子手
19、柄向上扳，同时往外取出延脑组织。6.11.2 犬脑组织样品取内径0.5cm的塑料吸管，沿枕骨大孔向一只眼的方向插入，边插边轻轻旋转至不能深入为止，捏紧吸管后端并拔出，将含脑组织部分的吸管用剪刀剪下。6.11.3 脑脊液样品6.门.3.1 颈推穿刺法穿刺点为环枢孔。动物实施站立保定或横卧保定，使其头部向前下方屈曲，术部经剪毛消毒，穿刺针与皮肤面呈垂直缓慢刺人。将针体刺人蛛网膜下腔，立即拔出针芯，脑脊液自动流出或点滴状流出，盛人消毒容器内。大型动物颈部穿刺一次采集量为35mL70 mL。6.11.3.2 腰椎穿刺法穿剌部位为腰荐孔。动物实施站立保定，术部剪毛消毒后，用专用的穿刺针刺入，当刺人蛛网膜
20、下腔时，即有脊髓液滴状滴出或用消毒注射器抽取，盛入消毒容器内。腰椎穿刺一次采集量为1mL 30mL。6.12 眼部组织和分泌物样品眼结膜表面用拭子轻轻擦拭后，置于灭菌的30%甘油磷酸盐缓冲液(见A.4，病毒检测加双抗)或运输培养基中送检。6.13 胚胎和胎儿样品选取元腐败的胚胎、胎儿或胎儿的实质器官，装入适宜容器内立即送检。如果在24h内不能将样6 品送达实验室，应冷冻运送。6.14 小家畜及家禽样品NY/T 541-2016 将整个尸体包人不透水塑料薄膜、油纸或油布中，装人结实、不透水和防泄漏的容器内，送往实验室。6.15 骨髓样品需要完整的霄标本时，应将附着的肌肉和韧带等全部除去，表面撒上
21、食盐，然后包人浸过5%石炭酸溶液的纱布中，装入不漏水的容器内送往实验室。6.16 液体病料样品采集胆汁、服、黠液或关节液等样品时，应采用烫烙法消毒采样部位，用灭菌吸管、毛细吸管或注射器经烫烙部位插入，吸取内部液体病料，然后将病料注人灭菌的试管中，塞好棉塞送检。也可用接种环经消毒的部位插入，提取病料直接接种在培养基上。供显微镜检查的脏、血液及素的夜抹片的制备方法:先将材料置玻片上，再用一灭菌玻棒均匀涂抹或另用一玻片推抹。用组织块做触片时，持小镇子将组织块的游离面在玻片上轻轻涂抹即可。6.17 乳汁样品乳房应先用消毒药水洗净，并把乳房附近的毛刷湿，最初所挤3把4把乳汁弃去，然后再采集10 mL左右
22、乳汁于灭菌试管中。进行血清学检验的乳汁不应冻结、加热或强烈震动。6.18 尿液样品在动物排尿时，用洁净的容器直接接取;也可使用塑料袋，固定在雌畜外阴部或雄畜的阴茎下接取尿液。采取尿液，宜早晨进行。6.19 鼻液(睡液)样品可用棉花或棉纱拭子采取。采样前，最好用运输培养基浸泡拭子。拭子先与分泌物接触1min，然后置入该运输培养基，在4.C条件下立即送往实验室。应用长柄、防护式鼻咽拭子采集某些疑似病毒感染的样品。6.20 环境和饲料样品环境样品通常采集垃圾、垫草或排泄的粪便或尿液。可用拭子在通风道、饲料槽和下水处采样。这种采样在有特殊设备的孵化场、人工授精中心和屠宰场尤其重要。样品也可在食槽或大容
23、器的动物饲料中采集。水样样品可从饲槽、饮水器、水箱或天然及人工供应水师、中采集。6.21 其他对于重大动物疫病如新城疫、口蹄疫、禽流感、猪瘟和高致病性猪蓝耳病，样品采集应按照GB/T16550-2008中4.1.1、GB/T 18935-2003中附录A、GB/T 18936-2003中2.1.1、GBjT 16551-2008中3.2.1和3.4.1的规定执行。7 样品保存、包装与废弃物处理7.1 样品保存7.1.1 采集的样品在无法于12 h内送检的情况下，应根据不同的检验要求，将样品按所需温度分类保存于冰箱、冰柜中。7.1.2 血清应放于一20.C冻存，全血应放于4.C冰箱中保存。7.1
24、.3 供细菌检验的样品应于4.C保存，或用灭菌后浓度为30%50%的甘油生理盐水4.C保存。7.1.4 供病毒检验的样品应在O.C以下低温保存，也可用灭菌后浓度为30%50%的灭菌甘油生理盐水O.C以下低温保存。长时间一20.C冻存不利于病毒分离。7.2 样品包装7 NY/T 541-2016 7.2.1 每个组织样品应仔细分别包装，在样品袋或平皿外贴上标签，标签注明样品名、样品编号和采样日期等，再将各个样品放到塑料包装袋中。7.2.2 拭子样品的小塑料离心管应放在规定离心管塑料盒内。7.2.3 血清样品装于小瓶时应用铝盒盛放，盒内加填塞物避免小瓶晃动。若装于小塑料离心管中，则应置于离心管塑料
25、盒内。7.2.4 包装袋外、塑料盒及铝盒应贴封条，封条上应有采样人的签章，并应注明贴封日期，标注放置方向。7.2.5 重大动物疫病采样，如高致病性禽单茵茵匾岖性蓝耳病、新城疫等应按照中华人民共和国农业部公告第503号的7.3 废弃物处理7.3.1 无法达到检测要求和中华人民共和国7.3.2 采过病料用完毒后清洗，检查过疑次使用。8 采样记录8.1 采样时，应8.2 应记话及传真。8.3 应记录采8.4 应记录畜(8.5 应记8.6 应记录采样8.7 应记录首8.8 应记录感染动8.9 应记录农场的存8.10应记录临床症状间等。8.11 应记录受检动物清单、8.12 应记录饲养类型和标准，8.1
26、3 应记录送检样品清单和说明，包8.14 应记录动物的免疫和用药情况。8.15 应记录采样及送检日期。9 样品运输9.1 应以最快最直接的途径将所采集的样品送往实验室。地址、电9.2 对于可在采集后24h内送达实验室的样品，可放在40C左右的容器中冷藏运输;对于不能在24h 内送达实验室但不影响检验结果的样品，应以冷冻状态运送。9.3 运输过程中应避免样品泄漏。NY/T 541-2016 9.4 制成的涂片、触片、玻片上应注明编号。玻片应放人专门的病理切片盒中，在保证不被压碎的条件下运送。9.5 所有运输包装均应贴上详细标签，并做好记录。9.6 运送高致病性病原微生物样品，应按照中华人民共和同
27、国务院令第424号的规定执行。9 NY/T 541-2016 A.1 阿(Alserer)氏液葡萄糖附录A(规范性附录)样品保存液的配制2.05 g 拧橡酸铀CNa3C6Hs07.2H20)0.80 g 氯化铀CNaCI)O.42 g 蒸馆水(或无离子水)加至100mL 调配方法:溶解后，以10%拧棱酸调至pH为6.1分装后.70kPa,10 min灭菌，冷却后40C保存备用。A.2 10%中性缓冲福尔马林溶液(pH7.2-7.4)A.2.1 配方1:37%40%甲醒磷酸氢二饷CNa2HP04)100mL 6.5 g 一水磷酸二氢纳CNaH2PO H20)4.0 g 蒸馆水900 mL 调配方
28、法:加蒸馆水约800mL，充分搅拌，溶解无水磷酸氢二纳6.5g和一水磷酸二氢铀4.0g，将榕解液加入到100mL 37%40%的甲醒搭液中，定容到1L。A.2.2 配方2:37%40%甲醒100mL 0.01 mol/L磷酸盐缓冲液900mL 调配方法:首先称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44 g Na2 HPO和0.24g KH2PO，榕于800mL蒸馆水中。用HCl调节溶液的pH至7.4，最后加蒸馆水定容至1L.即为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液CPBS，pH 7.4)。然后，量取900mL O.01 mol/L PBS加入到100mL 37%40%的甲醒溶液中。A.3 肉汤(
29、broth)牛肉膏蛋白陈3.50 g 10.00 g 氯化纳CNaCI)5.00 g 调配方法:充分混合后，加热溶解，校正pH为7.27.4。再用流通蒸汽加热3min.用滤纸过滤，获黄色透明液体，分装于试管或烧瓶中，以100kPa、20min灭菌。保存于冰箱中备用。A.4 30%甘油磷酸盐缓冲液(pH7.6)10 甘油氯化铀CNaCI)磷酸二氢饵CKH2PO，)磷酸氢二饵CKzHPO，)30.00 mL 4.20 g 1.00 g 3.10 g NY/T 541-2016 0.02%酣红蒸馆水调配方法:加热溶化，校正pH为7.6，100kPa,15 min灭菌，冰箱保存备用。A.5 0.01
30、moI/L PBS缓冲液(pH7.4)磷酸二氢饵(KH2P04)磷酸氢二锅(Na2HP04)/12水磷酸氢二铀(Na2HPO,.12H20)1.50 mL 加至100mL ubub qtoo n/年FhdnUu,/gb n/U A哇-i 氯化铀(NaCl)8.00 g 氯化伺(KCI)0.20 g 调配方法:加去离子水约800mL，充分搅拌恪解。然后，用HCl溶液或NaOH溶液校正pH为7.4，最后定容到1L。高温高压灭菌后室温保存。A.6 0.5%乳蛋白水解物的Hanks液甲液:氯化铀(NaCI)氯化饵(KCl)771硫酸馍(MgS04 7H20)氯化钙(CaCI2)/2水氯化钙(CaCb 2H20)8.0 g 0.4 g 0.2 g 0.14 g/O.185 g 置人50mL的容量瓶中，加40mL三蒸水充分搅拌溶解，最后定容至50mL。乙液:磷酸氢二铀(Na2HPO,)/12水磷酸氢二铀(Na2HP04 12H20)0.06 g/1.52 g 磷酸二氢饵(KH2P01)0.06 g 葡萄糖1.0g 置入50mL的容量瓶中，加40mL三蒸水充分搅拌溶解后，再加0.4%酣红5mL，混匀，最后定容至50mL。调配方法:取甲液25mL、乙液25mL和水解乳蛋白0.5g，充分混匀，最后加三蒸水定容至500mL.高压灭菌后40C保存备用。11