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1、ICS 65.020.20 CCS B 05 新疆维吾尔自 J口区地方标准DB 65/T 4377-2021 甜菜品种抗抱囊线虫鉴定技术规程Specification for identification of sugar beet resistance to cyst nematode 2021一 06-29发布2021-09-01实施新疆维吾尔自治区市场监督管理局发布DB 65/丁4377一2021目IJ吕本文件按照GB/T1.1-2020(标准化工作导则第l部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由新疆农业科学院植物保护研究所提出。本文件由新疆维吾尔自治区农业农村厅归口并组织实
2、施。本文件起草单位:新疆农业科学院植物保护研究所、中国农业科学院植物保护研究所、新疆维吾尔自治区植物保护站、新源县农业技术推广站、自治区农业技术推广总站、新疆农业广播电视学校。本文件主要起草人:李广阔、彭焕、王锁牢、彭德良、高海峰、王俊、吴伟、杨安N、张航、自做j挝、沈短洋、海纳尔毛地热合曼、肖春燕、牛康康、钟I归英、谭军。本文件实施应用中的疑问，青咨询新疆维吾尔自治区农业农村厅、新疆农业科学院植物保护研究所。本文件的修改意见建议，请反馈至新疆维吾尔自治区市场监督管理局(乌鲁木齐市新华南路167号)、新疆维吾尔自治区农业农村厅(乌鲁木齐市胜利路157号、新疆农业科学院植物保护研究所(乌鲁木齐市
3、南昌路403号)。新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话:0991-2817197;传真:0991-2311250;IJiil编:830004 新疆维吾尔自治区农业农村厅联系电话099卜2878226;传真0991-2311250;邮编830000新疆农业科学院植物保护研究所联系电话0991-4524641:传真0991-4524641:i!Ir)编830091DB 65/T 4377-2021 甜菜品种抗抱囊线虫鉴定技术规程1 范围本文件规定了甜菜品种抗抱囊线虫鉴定的术语和定义、试剂、材料、仪器设备、鉴定方法、抗性评价的要求o本文件适用于甜菜品种、品系等甜菜种质资源对甜菜J包囊线虫的抗性鉴定
4、和评价。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包掐所有的修改l.)适用于本文件。NYfT 3059大豆抗抱囊线虫鉴定技术规程DB 65fT 4376甜菜抱囊线虫病鉴定和监测技术规程3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1 甜菜抱囊线虫beetcyst nematode 甜菜上重要的并具有经济意义的寄生线虫，是一种专性植物根部定居型内寄生线虫，其寄主范围非常广泛，十字花科和寥科植物为主要寄主植物。隶属于侧尾腺纲(Secernentea)、垫刃目CTyench
5、da)、异皮科(Heteroderdae)、异皮属(Heterodera)，具体形态特征见DB65fT 43760 3.2 抗病性dseas巳resstance植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。3.3 抗性评价evaluatonofresstance 根据采用的技术标准判别奇主植物对特定病虫害反应程度和i抵抗水平的定性描述。3.4 发病率ncdence或称普遍率，发病植物体单元数占调查植物体单元总数的百分率，用以表示发病的普遍程度。在本文件中，植物体单元为株。3.5 严重度sev巳rty将发病的严重程度由轻到重划分出几个级别，分别用一些代表值表示，说明病害发生的严重程度。
6、本文件中严重度划分为5级。4 材料和仪器设备DB 65/T 4377-2021 4.1 基质沙壤土(壤土和细沙比例7:3)。4.2 标准筛阿标准筛网(20目、80日、100目和500目)，用于J包囊的分离、卵的收集和过滤。4.3 其他用品培养血、三角瓶、漏斗，、软胶塞、移液管、烧杯、挑针、慑子、定性滤纸等。4.4 体式显微镜放大倍数7音134倍，用于J包囊的分离计数和卵的显做镜计数。4.5 高压贝菌锅用于实验试剂、试验用水及小型器具的消毒处理。4.6 烤箱用于玻璃器皿、培养基质等材料的消毒处理。5 鉴定方法5.1 室内人工接种盆栽法5.1.1 抱囊线虫接种体准备从田间采集土壤样品中按密度梯度离
7、心法分离纯化于包囊，具体方法见附录A。将饱满、新鲜抱囊加入少量的无菌3m1o1/L硫酸辞溶液，25 oc条件下剌激孵化，收集3d5 d孵化的2龄幼虫，在显微镜下镜检计数后，将其配成300头/mL的2龄幼虫悬浮液备用o5.1.2 甜菜播种与接种将按照比例。:7)混合均匀的沙壤土，高温灭菌后，装入直径为8 CI11，高度为12巳l的塑料杯中，浇水浸透杯中土壤后，每杯中放入2颗甜菜种子，覆1cl112 CI11厚的无茵士后，在种子的旁边各插入3个1mL的移液枪头，将其转入25oc培养箱中，16 h光照8h黑暗条件下培养7dIOd，待出IFi后，每杯保留l颗健壮的甜莱茵，在插入枪头的位置滴加1I11L
8、 2龄幼虫悬浮液(约300头2龄M51n，覆少量的土，之后每隔1d用玻璃滴管接利Ij次，累计接科13次，接种最约为900头/株，每个品种重复10次，同时设置感病对照，置于培养箱中，25 oc、16h:W.照8h黑暗条件下培养，随机摆放。5.1.3 调查接种25d30 d后，先调查感病品丰小心清洗其他待测品丰种中材才根、枝良系，显微镜下调查根系的白rtljf虫的数量，逐株调查全部待检测品种根系。5.2 国间病圃法5.2.1 播种2 DB 65/T 4377-2021 选择西囊基数大于10个1100mL土壤的病圃，按照品种适宜播期播种，每份材料2行，每仔10111，每个品种重复3次，小区随机区组排
9、列，同时设计感病对照。5.2.2 调查在出苗1个月后，每个处理随机调查10株甜菜根系，计数根系上的白rtlltr:k数目。5.2.3 记录规范鉴定调查记载表要有鉴定人员和复核人员签字。在开展鉴定调查时，鉴定人员与复核人员一同进行，鉴定人员对鉴定植株病情级别进行判断，经复核人员确认后记载。5.3 重复鉴定鉴定结果为抗性以上的品种，需要进行2次室内人工接种鉴定，以进一步确定其抗性。6 抗性评价6.1 有效性采用田间病圃鉴定法鉴定的，对照感病品种或鉴定对象中有任啕品种的抗性级别达到7级9级的，该批次鉴定有效;采用人工接种鉴定法鉴定批次，感病对照根系白rtllt虫的数民大于30个为有效，否则为无效试验
10、。6.2 抗性鉴定标准逐株调查根系上面的臼雌虫数目，计算平均数，关于甜菜品种对自|菜J包囊线虫抗、感性划分标准，按照表l进行分级。表1jIi甘菜品种抗拍囊线虫的抗性分级标准级别分级标准抗性评价单株平均臼I!r虫数为11=0个免疫(M)3 单1米平均臼Ilft虫数为011三三3.0个i向抗(HR)5 单株平均臼Il!虫数为3.011三三10.0个抗病(R)7 单株平均白雌虫数为10.030.0个l士j!f;(HS)6.3 抗性*IJ另IJ根据重复抗性鉴定结果，以最高发病程度，对鉴定材料进行抗病性鉴定，撰写正式鉴定报告，并!可j原始调查记录。甜菜品种抗J包囊线虫鉴定调查记录表见附录B。3 DB 6
11、5/T 4377-2021 A.1 密度梯度离心法分离子包囊附录A(规范性)甜栗子包囊线虫的分离方法人1.1 将来集的土壤放入5L塑料桶中加水泡软，充分搅拌后，使但囊漂浮，停止搅拌后，静止30S 60 So A.1.2 将桶上层的悬浮液经过20目筛倾倒入80自筛，用强水流冲洗20日筛上的残渣，收集80日筛上的粗样品，上述动作重复l次。A.1.3 取适量的粗样品直入100mL的离心管中，再加适量的高岭土(粗样品:高岭土=2:1)，加水至100 mL刻度线，配平后，放置于离心机中，4500转/min水平离心8min，小心倒掉上消液。A.1.4 加入浓度为50%的照糖溶液重新悬浮后，700转/min离心2min，小心将含有自囊上清液倒在80日筛子上，重复重悬离心l次，启用水冲洗干净即得较纯净的抱囊。4 附录8(规范性)甜菜品种抗抱囊线虫鉴定调查记录表DB 65/T 4377-2021 B.1 甜菜品种抗?包裹线虫鉴定调查记录表表B.1一一年甜菜品种抗子包裹线虫鉴定调查记录表插手中日期:年月臼调查日期:年月日根系J包囊数品种编号重复平均础建数抗!:1J:评价2 3 3 6 7 8 9 10 品种1II III 品种211 111 品种N11 III 感病对照11 1lI 鉴定人:记录入:鉴定技术负责人:5