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1、ICS 65.080 CCS 10 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 3833-2021 微生物肥料菌种保藏技术规范Technical spedfication of cuIture preservation for microbial fertilizers 2021-05-07发布2021-11-01实施，字号中华人民共和国农业农村部发布NY/T 3833-2021 本文11校!自G13/T 1.1-2020(标fl化-r作导则警啊，部分标lfI化立:iHM.i.flJ;fllj也ftt规则1)(1甘规定起草。本文件1 1 1农业农村部种植业1旦Il叫捉山JHJI二l。本文件起j!
2、;i!yJ.位:中同农业科字|览农业资源与农收1:原则、技术要求平11技术方法。本文件远H1J二微生物JJ巴料1产和研究的li种似戚。2 规范性引用文件NY/丁18173 术语和定义3.1 3.2 菌种保藏来说l，NY3.3 定期移植法将H利，!主利I问进行移HiJg.养。注:J，f1J:W代j古养保藏世、3.4 液体石蜡保藏法liquid;J主中.iH I WJ的引JTUc俐，仪)ii!H于水文衍。)j问|同一定1 11守j，i1it主种在适宜的斜ImJiTJtAL上:H;也斗l:ili芹Jii.It人灭的的液体石阶在i苦L整个斜阳.II:.IJ立i!C:r 4.C-G.C低ILll或3ir
3、11J-1躲到、搅进行似衍。3.5 沙土管保那法sand-soil liJlc 1四ervationIl1cthod 将jl.mf(l(j il4种用无卤水制成两忠、液TIX于包子总il.病人灭i却19t1、士价1.ili合均匀.或接将成熟袍子刮下混j灭l平j(10Y、土信中.f4!Jf1吸附在Y土&:1体l.吁岱中7)(分割h-r.Fi.然.H位门!X平如街上1Wn后l(千H苦I.，i，J.4.C-6 c低jfl!.!x;i.ilf，l保存。3.6 冷冻干燥保藏法freczl.-drying prcscrvation I11cthod 将以;f战(10j，j中11J11入保护开Jtlll成的
4、:息浓盯.分装r:生:fI1自1矿J约，然后在减!f条件下利Imf.J:le在|徐NY jT 3833-2021 去/水k分.达j到:1引IJI=乡才宅;汪:n躲业坠;珩币 奸炜j封t岱j;门1.)放立i忧飞飞吐?电f 4.C-6.C 低iMf片且H仆f耳3.7 低温冻结保藏法cryop四crvationmcthod 将1讯:;J挠的j:ij利，1J11入保护ifIJJi)i次i、，f-20.C或80.C 1l i/l冰箱rl保齐。3.8 液氮超flUI，保旗法liquid nitrogcn cry叩reservationI11clhod 1将仔f 欲且圳(保i足I戚陵t的H内阳j川i陶r剧J
5、忡串利种1)吵咖J加加j川川11人保且扩护s剂1肝污).放次立们ih114 基本原则4 1 侦m(l(j微生物肥料li乖l 应立全.1效，生产者应提供菌种(I分类鉴定报告.但把M&;fI(I(J学名、形态、生理生化特n及格依据等完将资料.以及l:tj;fI安全性评价资料。采用生物工程的，应:X1fI允的大面积料放的生物安全性有关批文。4.2 钊.J特定的做1.物)J巴料凶乖Ij&边界适白的保藏方法，似持Ii利的原有性状.监兔的种死亡、退化、变异或污染。4.3 IYf!o 址戚到、屁jlHII.J独立和汕净，避免l;fIfiJ(10交叉污染4.4 III俐.阜成jjli符合肉、搅保护安求.-1、
6、hiIJJiiJ llil环搅造成污染布l危害。4.5 的中|咐采1 112种以仁的保威力法ill行保存。不同类另IJf，放牛物11巴料菌种适宜采川的l树种保藏方法及保:Mtl时间!Jo!.炭1 表1不同类别微生物肥料菌种适宜采用的菌种保藏方法及保藏时间。藏Ji法保戚1I.llil远JTJI剧种类IJ)i!WHtHt法3个月-6个川细|出i.Ii出钱14、NI吐Ii、Ii非各类版1二物肥料的I2 液体行自H且S逝世、2年-:lI 不能分仰液体石捕的自1I14、放线的、1it./F凶刷性状li4忡微生物肥料峭利3 沙I二11保威讼2r-IO1 芽他杆的、f也放线的以及J抱且由非微仁物肥料的种岭T
7、!下倾向IJI逝法5 1-20 r 太多数细菌、放线的、Itr.时rY4.f11部分纯状iWi咋微生物肥料li!i种5 fJjMI叫t川日战法2年-51，1-:细i胃、放线C4、nrNIY4.悄忡各类微生物肥料峭利6 i!lifk(超flUA!战法20 1以1组l陶、放线1l4、MIFIW.凶悍各类做生物肥料闹非l 5 技术要求5.1 菌种似版;jtii韭摔合适时lt养泣，可参考(1网Wi中lfl S-Jk)启1NYjT 11J4.放NYj丁2321.5.2 1与利t保喊过.f，liJ.&注意元菌操作.避免污染。5.3 l-利1似藏II.Wi做好标记，标IYH￥ij;fI编号、I:.-中l名称
8、平11似威门WJ守信息.541泊利r!fi养至稳定用11或产生成熟袍子后进行保藏。6 技术方法6.1 定期移植法6.1 1 适用范围本1nk边川干俐的、放线菌.r+:j:14、J的Tf各类微生物11巴料凶手l的短期保戚。6.1 2 原理低温可减级l泊非l(I(j代词w;动，扣11HIjJ-J/-I=!圭繁的速度，减少rii株变异、延i幻启事|叶阜成的1r.llll.通过i.WI移t，1!t(j守附;fIii力.illI免两种大相比IL匀。6.1 3 操作步骤放!M11f.j,Jk (I(j规定执行。2 6.2 液体石蜡保藏法6.2.1 适用范围NY/T 3833-2021 本方法适用不能分fl
9、t液体11附的纬l民Il;，j抱丰rtl，jJl、附自主们I;iJiJ等)，J立线I莉、IirlJ:Jli布l丝状.u;t:ii(虫11i而Ui!l、11I11:;M匀)。6.22 原理在液体.(j时?在iZL下.隔绝了它气，攸I:fiI(t(J lJ.L代i射受到!书lJl俐。此为法也可防止冈附养基(t(Jlj(分!/f:发而寻I，ti:的附体iEl二，延 长两种仇Ifi起tHlrl。6.2 3 操作步骤按照附法B的Ji!1川il养萃的分装tt宜为htl,:j)j(19 1/3-1/2，液体!T养基分装1L(直为1高度的1/1-1/3X钳形瓶容t;):的1/3-1/2.分装过;f，llc，勿
10、业.tJil.基前ll污1 1 xJ肌r1.以io.造成污染.A.12.5 包扎标记W 1-1 xJ肌口)111机容或胶黎.外而包扎1lIi相j纸(女JIlI.)(纸戎相付1号I)，注明捎mJi名称及1;li1口WI.A.1.3 灭商J安:;R将JHJFALJ反.通常为121C i:;j JT，!.，i(汽灭的30mino 1斗腑的培养基.采JTI115Cr.1下孩汽灭litf 30 min，防止非，lt(19J戊分迦到破坏.如果J古 J辛基巾的某些JJl(;分不再H飞瓶，叫)II.:I:泌|徐Wi(j()方式单独除嗣后.千斤)11入灭I梢的附养Ji1飞A.1.4 斜面摆放分装试怡的附体梢养基
11、灭的后应及时限放斜fII.斜Iml主j主斗、宜超过试岱:inl王的1/2.A.1.5 无菌检查ij.灭l剔的瑞HJ占j次人lff养丰fiI，37.C.t)!f 1 d-:l d。元1fij检查合格1日将J(:f.且在r1 C备111.I，i种似藏阳的斜Imj古m，).，ij尽快使用。A.2接种A.2 1 斜面接种A 2 1.1 点接JEj革|利lfl战在北;，flii lli1l1.iu下)j处。此力1:1.;适#FF-iJ liJi:J(I二伏的丝状兴l梢。A.2.1.2 划线法从斜阳j成11111央11下而l甲划-Jd:线!;且.之字?吕立1线。此方法适用于当H阳、放线菌和iif.I:)匠
12、、1.4 NY/T 3833-2021 A.2.2 穿刺接种!llt主利11挑取少fdIZ与体从柱状J，1.ffl 1:、11上1(l下I人在到接近价JI(月):.j可ImJiO然后m-反i1I途径佼佼书111-1拢种钊。此方法适川H;jL阪际l布1MJ.I立放，iF 4.C-6 c低ll.!.监室报干燥环境保藏。保藏WI间应定)J检查)放.1补充接发也19的无菌液体石拙。8.5 恢复培养恢复!MI时，挑X少址JIi，j体转j1:至远f(I(JHi养Ji1-.生长3在前(后再重新转接-汰。8.6 注意事项8.6.1 液体1-1虫lf易燃，应注意火灾。1.1.6.2 液体1-I:WjfWiit环
13、t.iI，i.t二，口、通风。8.6.3 恢J;.养IH.撞事环或接利钩上m有液体1拙和l在I体.火焰灭菌时M飞溅J业作M应注12安全。6 C l 沙土管制备C L 1 沙土准备附录C(规范性)沙土管保藏法NY/T 3833-2021 将1日iJy、)1160 11过饰，弃去大f;粒及杂质，再用80日过饰，去掉细沙。月1吸铁石I吸去铁质，放人容器rl)fj10%的HCl浸泡.!III河沙中有机物较多可用20%的HCl浸泡。24h百fjjJ去盐般，HJ水洗泡数次至1但.j号沙子烘干或IIJ11i下。另JIiU也1(11下40cm60 cm二11:耕作层贫情旦到itl较小的土掷，研邸，100目过饰
14、，水洗至咐，炽干。C L 2 沙土管灭茵将处卫I!币的沙、-1:.按质tJ:比2lli合。混匀的沙土分装入安if.管或小试斗;I!:j度为1cm左丛J;Pf机泣，包扎|纺潮纸，121C日照蒸汽灭I剧30min.iliil)JG，1 d2 d后，再次121C;:jlk蒸汽灭j，i30 min。C1.3 无菌检查|随机边J以儿支灭i;后的沙-1升飞，在元Wi操作条例下取少!i沙才二至空白发芳I1 fi养基和l牛|勾引蛋白)陈液体培养);I，于37C培养1d3 d，检查元菌生长后方可使川1.C2 斜面培养物的准备按照附斗lJrlA.l、A.2.1 411 A.3的规定执行。C3 菌种制备向均养好的斜
15、而11养物Itt人3ml.5 ml.兀l:ii水，说下l:r:芥或袍子!11成商悬液。i1H丰州养物百T Tf.心后弃去部分上?15液，阳l仅下i1)j!体及少irr_ L I!i l i!iJ JR菌悬液。Hi尤I树l吸它或悄悄!吸收jl;!;7在:J生Jii肖人沙土;rl.勾侣.O.2 mLO.5 mL。放线附和:j;古飞机TlI峻挑收J包子i*人沙土笆1。C 4 干燥i昆j).j后.将沙士14itt干燥部1自然下虫草或用J汪东将干燥器材1J.i.:空)JII:ili样品下燥。C 5 保藏干燥后的沙土岱JlI火焰燃土才供门或Ti虫JE密M价1-1，污.)1于4C6 C低温或室副干燥到;搅保
16、藏，每|宿、l二检查队;jl平l存的n及纯度。C6 恢复培养在元TMi操作条f1下，fj列沙t笆，取部分沙土和!II:干适宜的111养基1.，支出两手;二后再转战一次。或11旦沙土粒ft干活宜的液体11i养l;G1.M1J:J币1，;后再转战斜面培养J击。7 NY/T 3833-2021 01 冷冻干燥管的选择与清洗,f;.1王度为100mm-11O HI及tl1水冲洗、浸泡至p1衔JlIo20 min。立r斗、官矿，J1旺。05预;东将装有l省悬液的Yim自ivf于J)6 冷冻干燥附录。(规范性)冷冻干燥保藏法破11l的J;:瓶于10衍内径为8mm左自来;101洗3l虽以上，接1115 mi
17、n-/mL以七:m，性恋不m出污上问以fIt要短。将Ti斗、后的去瓶竹迅速宜于已充分TJJi冷的冷冻干iki机样品舱内，关闭放气|坷，打到具空泵刃kh冷冻干蚁，战近干燥完成IJ./，适当列11，(按冷冻|煤机的共体要求进行操作)，确认冷冻干;煤完毕后，缓t山TfFi汝气|民:1.J仅:1:样品:去瓶l丘l工干锹R*内。冷冻下;躁l时间-般为8h-20 h。判断冷冻干燥已完全的捎标:a)戈瓶它内E斗、二1二物虽酥松块状或松散片状，b)JJ;空度接近空然M的llk.可ifl，c)冷冻干燥机显示的中1川市ll度与舱内?M皮接近;d)蒸官I7K对!m!骂中的7K分已完全:jy发或1%-2%;，1(化t
18、，j(I(J，J!m宫已呈深蓝色。8 NY/1 3833-2021 D.7 安顿管封口及保藏从-1业辑部中取:Jl冷汤、1-燥完全的安矶W.(f距竹II 5 crn左右用11虫射火焰(时fl、如枪气:1)斗夺去瓶官扣III.然们将:&:iff/;1-1.tt接到勺J:空泵中11洼的橡皮岱仁，打开:;可泵.1E空条11下(!I们2N达到10.01mm Hg.l!IJ 1.33 p，).m喷射火焰xHfI安IfIi;flll到j;jl)JIJ热:tiiJLt古封污(J冷冻-1以岱lIf采川1，:);版ll火花.:抽!t主仪检测.1.(空度。.N门完全的冷冻千似岱Jii.J.C-6.C低iffil:
19、iill)l;l藏。D.8 恢复培养JTI 75%(IJiPtii仰擦拭Ji:.ffi骂。(J1:郁.JJ.将ii:ifli)飞回Im烧热，打j元以l梢签向113位的7).t:fi:.i悦价DH;jl掠|回.原;jl:J:J)I!裂纹.川1铿)J且饭子颈部转11 j:iIi下已11裂的瓷瓶(lbV顶端，川l少茧无1:.47).TI.x液体培养1M和解西J:k后.JII元商i吸价或II宵节1吸收菌液战种至新鲜!fiJP，或自接收Hl劫、干附粉接利1写Ufrfuf.JIi!f J,);.(1迈怕条例下ji养.9 NY/1 3833-2021 E.1 冻存管的准备直选j斗l附f币l度骤变、Hl下，由
20、121 oc高压蒸汽灭两30min，E.2 保护剂的准备E.3.1 E.5 保藏E.6 恢复培养附录E(规范性)低温冻结保藏法ii节i水浸泡ii洗干净、干燥UIl可，然而高1平蒸汽灭i拍7夜。从800C或20 oC j政协1冰箱Ij仅出冻馅，立UIl放且不E38 o C 40 o C il,;t;j(1快速复苏(50，100 s)，并:jjM;i)iJ.11到1.1-1部结冰全部溶解为止。在无ri操作条斗下开J言lrh存衍，将:I人l似藏物接中l至适:11:(I(j培养基梢养。10 F.1东存管的准备按照怀J,)1:E中E.I的规定执行。F.2 保护剂的准备按照E.2 rM!t.jM丁EF.3
21、 菌种的准备技!(iI二319规定执行。F.4 分装按照l二4的规定执行。F.5预;东附录F(规范性)液氮超低温保藏法NY/T 3833-2021 预冻JI.)，冷r.t-速度:i=1控制在何分钟下降IC或直按将冻存官?it于-80C低jll冰箱1.颜悦、4h以仁，攸样品说:纭，罕-40C-35 C.F.6 保藏4夺目17-竹SFI于液氮辘1保藏。般气才11I，it度为-150C，液相l，U直为196 c。F.7 恢复培养从液1J;(融中取tl:rIJ在笆，恢主Ll1养方法|百)I二6，F.8 注意事项F.8.1 操作rJ.l应注意安全，戴而JI:及皮子套.IVJJr.操作人被曰:伤。F.8.
22、2 运送液1J;(IN8川专JT川省市1)将拙，不nfJTJ一般密闭与，;:;m存放或i豆输液剑。F.8.3 存放液纸容器的室内8tL旦通风，防止过盐?气使人窒息。F.8.4 l:Q:观察被纵容和1被1J;l的残存咐，走!阴补充自主1J;(,I1 NY/1 3833-2021 参考文献1门丁NY/T、1川II川1微生物l川肥l贮巴1料l卡扣抖;主斗;斗实验川J炕i汗f养基技术条卡伺|口21Y/门T2321 1微故L生i七二兰才4牧物i悟脱胁古克却切圳lj川州l川川11肥It肥t巴!1j料产一也飞也3叮网家微生物资源平手台守微生物I耻凶且挡l非利种l资沥源l引l收|攸立1朱l占J斗稳在卫理理n保
23、藏技术规i宿程宿程:汇组编，M.北京，叫1网农业科学技术出版村，201141宋渊.微生物学实验教在lM.51中同科学院trel物所(1如茄h61J;J+光.111刊因种IJ12 FNON-B凹HFZ4民中国农业1J.l版社山版CltJ川Ir:JII区左子J1i街18.楼)(11邮政编剧IOOl2 S网址www.cc叩m口。JtJJl刷一厂印II;IJ新华书店北京友们所发行各地新华gm经Ti，非 只cp 11:L 2S 卢数25千二，2021年10月lt;t郊l次印II;IJ兴2021 1-10月细I版IJ,),16109,8664)j二价40.00元拎JI本880mmX1 230l11m/16 版权专有侵权必究举报电话(010)59194261 NY/T 3833-2021