《GA∕T 187-2021 法庭科学 生物检材中敌敌畏和敌百虫检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法(公共安全).pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《GA∕T 187-2021 法庭科学 生物检材中敌敌畏和敌百虫检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法(公共安全).pdf（11页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、 HHP ICS 13.310 CCS A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 187 代替 GA/T 187-1998 法庭科学 生物检材中敌敌畏和敌百虫检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法 Forensic sciencesExamination methods for dichlorvos and trichlorfon in biological samplesGC-MS and LC-MS -发布-实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T 187 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则
2、第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替 GA/T 1871998 中毒检材中敌敌畏、敌百虫的定性及定量分析方法，与 GA/T 1871998 相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：修改了标准名称（见封面，1998 年版的封面）；修改了范围的有关内容（见第 1 章，1998 年版的第 1 章）增加了液相色谱定性定量分析方法（见第 1 章第 8 章）；修改了规范性引用文件的有关内容（见第 2 章，1998 年版的第 2 章）修改了气相色谱法的原理（见第 4 章，1998 年版的第 4 章）；修改了气相色谱法的试剂（见第 5 章，1998 年版的第 5 章）；修改了气相色谱法
3、的仪器与器材（见第 6 章，1998 年版的第 6 章）；修改了气相色谱法的定性定量分析（见第 7 章，1998 年版的第 7 章）；删除了薄层色谱法的有关内容（见 1998 年版的第 11 章第 16 章）；删除了化学快速检验法的有关内容（见 1998 年版的第 17 章）；修改了附录 A 的有关内容（见附录 A，1998 年版的附录 A）；增加了附录 B 的有关内容（见附录 B）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。本文件起草单位：公安部物证鉴定中心、
4、濮阳市公安局。本文件主要起草人：董林沛、任昕昕、王瑞花、张梦娟、王爱华、常靖、于忠山、张云峰、魏春明。本标准的历次版本发布情况为：GA/T 1871998。GA/T 187 1 法庭科学 生物检材中敌敌畏和敌百虫检验 气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法 1 范围 本文件规定了法庭科学领域生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中敌敌畏的气相色谱-质谱（GC-MS）定性检验方法和敌敌畏、敌百虫的液相色谱-质谱（LC-MS）定性定量检验方法。本文件适用于法庭科学领域生物检材（血、尿、肝、肾、胃及胃内容等）中敌敌畏的气相色谱-质谱定性分析和敌敌畏、敌百虫的液相色谱-质谱定性定量分析。其他检材可参照使用
5、。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。4 原理 以空白样品和添加样品做对照，按平行操作的要求，对生物检材样品进行提取、净化及浓缩，采用气相色谱-质谱法检测，以保留时间、质谱特征离子和离子丰度比作为定性判断依据；采用液相色谱-质谱法检测，以保留时间、质谱特征离子对和离子对丰度比作为定
6、性判断依据，以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。5 试剂和材料 5.1 试剂 气相色谱-质谱法实验用水应符合GB/T 6682中规定的三级水，液相色谱-质谱法实验用水应符合GB/T 6682中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括：a)乙酸乙酯；b)二氯甲烷；c)乙腈（色谱纯）；d)甲醇；e)盐酸溶液：移取盐酸（含量 36%38%）1mL 溶于水中，并定容至 100mL；f)0.1%甲酸溶液：移取甲酸（色谱纯）1mL 溶于水中，并定容至 1000mL；g)标准溶液；GA/T 187 2 1)1.0mg/mL 标准物质储备液：根据敌敌畏和敌百虫标准物质的纯度，称取
7、适量，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 敌敌畏和敌百虫标准物质溶液，密封，04保存。有效期6 个月。或采用市售标准溶液；2)10.0 g/mL 单一标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的敌敌畏和敌百虫标准物质储备液各0.1mL，分别用甲醇配制成浓度为 10.0g/mL 的单一标准工作溶液，密封，04保存。有效期 1 个月。实验中所用其他浓度的单一标准工作溶液均由 10.0g/mL 标准工作溶液用甲醇配制得到。5.2 材料 材料包括：a)具盖离心管；b)具塞玻璃试管；c)固相萃取柱：Oasis HLB 柱或等效固相萃取柱；注：Oasis HLB 柱是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一
8、信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。d)一次性注射器；e)有机系微孔滤膜：0.22m。6 仪器和设备 仪器和设备包括：a)气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）；b)液相色谱-质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）和三重四极杆质量分析器；c)电子天平：分度值 d0.01mg；d)离心机；e)振荡器；f)移液器；g)浓缩器。7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品前处理 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材样品1.0mL，或称取铰碎或匀浆的肝脏等固体检材样品1.0g于具盖离心管中，加入乙酸乙酯4.0mL，振荡
9、5min，以不低于8000r/min离心10min，分离有机相；重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上45浓缩至干，残留物用甲醇0.2mL溶解，作为检材样品提取液，供GC-MS分析或经0.22m的有机系微孔滤膜过滤后，作为检材样品提取液，供LC-MS分析。注：检材样品取样量、提取溶剂体积及定容体积可根据实际情况调整。7.1.1.2 蛋白沉淀 移取血液等液体检材样品 0.5mL，或称取铰碎或匀浆的肝脏等固体检材样品 0.5g 于具盖离心管中，GA/T 187 3 加入 1.5mL 乙腈，振荡 10min，用离心机以不低于 8000r/min 离心 10min，取上清液经 0.22m 的
10、有机系微孔滤膜过滤，作为检材样品提取液，供 LC-MS 分析。注：检材样品取样量和乙腈体积可根据实际情况调整。7.1.1.3 固相萃取 移取血液等液体检材样品1.0mL，或称取铰碎或匀浆的肝脏等固体检材样品1.0g于具盖离心管中，加入4mL1%盐酸溶液稀释，振荡10min，以不低于8000r/min离心10min。取上清液转移至已活化好的固相萃取柱中（使用前依次用甲醇、水进行活化），上清液过柱流速不超过0.5mL/min，依次用水1mL、甲醇/水溶液(体积比5:95)1mL淋洗，抽干弃去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱2min，用乙酸乙酯或二氯甲烷3mL洗脱，洗脱液流速不超过0.5mL
11、/min。收集洗脱液并置于浓缩器上45浓缩至干，残留物用甲醇0.2mL溶解，作为检材样品提取液，供GC-MS分析或用0.22m的有机系微孔滤膜过滤后，作为检材样品提取液，供LC-MS分析。注：检材样品取样量、定容体积可根据实际情况调整。7.1.1.4 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作为空白样品，一份添加单一标准工作溶液，使敌敌畏浓度为1.0g/mL（g）（用于GC-MS分析）或使敌百虫、敌敌畏浓度为20ng/mL（g）（用于LC-MS分析），作为添加样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液，供仪器检测。7.
12、1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气相色谱-质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：DB-5MS 毛细色谱柱（30m 0.25mm，0.25m）或等效色谱柱；注：DB-5MS 毛细色谱柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)色谱柱升温程序：80保持 2min，以 30/min 速率升温至 280，保持 15min；c)进样口温度：280；d)传输线温度：230；e)载气：氦气；f)电子轰击能量：
13、70eV；g)离子源温度：230；h)载气：高纯氦；i)扫描方式：全扫描（SCAN），敌敌畏的定性离子 m/z79，m/z109，m/z185；j)溶剂延迟：3min；k)柱流量：1.0mL/min；l)进样方式：分流进样；分流比：10:1；m)质量范围：40amu460amu。7.1.2.1.2 液相色谱-串联质谱仪条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：a)色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3(2.1mm 150mm,1.7m)或其他等效柱；GA/T 187 4 注：ACQUITY UPLC HSS C18色谱柱是 Waters 公司产品的商品名称，
14、给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。b)柱温：45；c)流动相A：乙腈；d)流动相B：0.1%甲酸溶液；e)洗脱方式：梯度洗脱，梯度洗脱条件见表 1；表 1 梯度洗脱条件 时间 min 流速 mL/min 流动相 A 流动相 B 0 0.45 10%90%1.5 0.45 60%40%5.0 0.45 60%40%5.1 0.45 90%10%6.1 0.45 90%10%6.2 0.45 10%90%7.0 0.45 10%90%f)离子源：电喷雾电离源（ESI）；g)检测方式：多反应离子监测（MRM）；h)扫
15、描方式：正离子；i)毛细管电压：3.0kV；j)雾化气、脱溶剂气：氮气；k)锥孔反吹气流速：氮气，50L/h；l)离子源温度：150；表 2 定性、定量离子对和锥孔电压、碰撞能量条件 目标物 定量离子 m/z 定性离子 m/z 锥孔电压 V 碰撞能量 eV 敌敌畏 220.878.9 220.878.9 30 16 220.8108.9 16 敌百虫 256.9109.0 256.9109.0 26 20 256.9221.0 10 7.1.2.3 进样 分别吸取空白溶剂、添加样品提取液、空白样品提取液、检材样品提取液、标准工作溶液，按7.1.2.1仪器条件进行检测。进样顺序和进样次数应确保结
16、果有效。7.2 定量分析 7.2.1 样品提取 GA/T 187 5 移取血液等液体检材样品1.0mL两份，或称取铰碎或匀浆的肝脏等固体检材样品1.0g两份，按7.1.1进行操作，得到检材样品提取液，供LC-MS检测。取与检材样品等量的相似基质空白样品，与检材样品平行操作，得到空白样品提取液，供 LC-MS检测。另取等量相似基质的空白样品两份，添加敌敌畏或敌百虫的单一标准工作溶液，作为添加样品，与检材样品平行操作，得到添加样品提取液，供LC-MS检测。检材样品中目标物含量应在添加样品中目标物含量的（100 50）%范围内。注：检材样品取样量、提取溶剂体积及定容体积可根据实际情况调整。7.2.2
17、 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 同 7.1.2.1。7.2.2.2 进样 分别吸取检材样品提取液、空白样品提取液和添加样品提取液，按 7.2.2.1 仪器条件进样分析。每份检材样品提取液和添加样品提取液各进样分析 23 次。7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品提取液平行进样 23 次的目标物保留时间和峰面积值，按公式（1）计算含量：=AA.（1）式中：检材样品中目标物的含量；A检材样品提取液中目标物的峰面积的平均值；A添加样品提取液中目标物的峰面积的平均值；添加样品中目标物的含量。7.2.3.2 相对相差 记录 7.2.3.1 中计算得到的检材样品中目标物的含量，按公式
18、（2）计算相对相差：=|12|100%.（2）式中：RD相对相差，用百分比（%）表示；1、2两份检材样品中目标物的含量；两份检材样品中目标物含量的平均值。8 结果评价 8.1 定性结果评价 XGA/T 187 6 8.1.1 气相色谱-质谱法 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子与标准溶液一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准工作溶液相比，相对偏差不超过表 3 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。敌敌畏的 GC-MS 相关谱图参见附录 A
19、中图 A.1 和图 A.2。表 3 离子丰度比的最大允许相对偏差范围 离子丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 10 15 20%50%阴性结果评价：检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准工作溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。8.1.2 液相色谱-质谱法 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准工作溶液一致（相对偏差在 2.5%之内）、目标物的定性离子与标准工作溶液一致，且离子对丰度比与浓度接近的标准工作溶液相比，相对偏差不超过表 4 规定的范围，空白样品无干扰，则可判
20、断检材样品中检出目标物。敌敌畏和敌百虫的 LC-MS 相关谱图参见附录 A 中图 A.3 和图 A.4。表 4 离子对丰度比的最大允许相对偏差范围 离子对丰度比 50%2050 1020 10%最大允许相对偏差 20 25 30%50%阴性结果评价：检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。8.2 定量结果评价 检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。检材样品中目标物含量的RD20%，定量数据不可靠，应按7.2重新提取检验。敌敌畏、敌百虫的理化性质、中毒机理及中
21、毒症状参见附录B。GA/T 187 7 附 录 A（资料性）敌敌畏和敌百虫的相关图谱 A.1 敌敌畏 GC-MS 总离子流色谱图见图 A.1。图 A.1 敌敌畏 GC-MS 总离子流色谱图 A.2 敌敌畏 GC-MS 质谱图见图 A.2。图A.2 敌敌畏GC-MS质谱图 A.3 敌敌畏 LC-MS/MS 谱图见图 A.3。图A.3 敌敌畏LC-MS/MS谱图 50.075.0100.0125.0150.0175.0200.0225.0250.0275.0300.0325.0350.0375.0400.0425.0450.00255075100125%1097918547145602201281
22、92370277443310379330400249289ddvp std 100ng20:02:2014-Nov-2018Time0.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.00%01000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.00%01000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.00%010020181114_14MRM of 2 Channels ES+220.854 108.974(DDV)9.73e5Area2.33275242018
23、1114_14MRM of 2 Channels ES+220.854 78.903(DDV)1.30e5Area2.33371520181114_14MRM of 2 Channels ES+TIC(DDV)1.09e6Area2.3331451GA/T 187 8 A.4 敌百虫的 LC-MS/MS 谱图见图 A.4。图A.4 敌百虫LC-MS/MS谱图 A.5 方法检出限：气相色谱-质谱分析，生物检材中敌敌畏的检出限为 0.5g/mL；液相色谱-质谱分析，生物检材中敌敌畏和敌百虫的检出限均为 10ng/mL。dbc std 100ng21:09:3214-Nov-2018Time0.50
24、1.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.00%01000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.00%01000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.00%010020181114_23MRM of 2 Channels ES+256.904 221.061(XIN DIBAICHONG)1.77e5Area1.76415220181114_23MRM of 2 Channels ES+256.904 109.02(XIN DIBAICHONG)5.
25、33e5Area1.761256020181114_23MRM of 2 Channels ES+TIC(XIN DIBAICHONG)7.10e5Area1.7616739GA/T 187 9 附 录 B（资料性）敌敌畏、敌百虫的中毒诊断参考资料 B.1 敌敌畏、敌百虫的理化性质 敌敌畏(Dichlorvos)和敌百虫（Trichlorfon）为有机磷类农药。敌敌畏化学式为 C4H7Cl2O4P，分子量220.98，无色，有芳香味的液体，相对密度 1.415（25），沸点 74（133.3Pa,1mmHg），工业品均为无色至浅棕色液体，挥发性大，易水解，遇碱分解更快，能溶于有机溶剂；敌百虫化
26、学式为 C4H8Cl3O4P 分子量 257.44，工业产品为白色固体，产品熔点 8384，易在环境中水解和降解，敌百虫容易缓慢分解为敌敌畏，如图 C.1 所示。图 C.1 敌百虫分解为敌敌畏的反应式 B.2 敌敌畏、敌百虫的中毒机理 敌敌畏和敌百虫是高毒类有机磷杀虫剂，属胆碱类神经性毒剂，其毒理作用是抑制乙酸胆碱酯酶（AChE）的活性，致使胆碱酯酶不能水解乙酸胆碱，造成体内乙酰胆碱大量蓄积，引起神经系统功能紊乱的中毒表现。呼吸衰竭是这两农药急性中毒的主要死因。B.3 敌敌畏、敌百虫的中毒症状 敌敌畏、敌百虫的中毒潜伏期与中毒方式及中毒量有密切关系，口服为 5min20min，呼吸道摄入30min，皮肤吸收者为 2h6h，中毒症状按毒理作用可分为以下几种：1毒覃碱样症状：恶心呕吐、腹痛腹泻。瞳孔缩小、多汗流涎、呼吸困难等；2烟碱性症状：肌肉震颤、抽搐、呼吸肌麻痹、呼吸停止；3中枢神经系统症状：头痛头晕、烦躁不安、昏睡或昏迷。_