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1、乳腺癌检测中免疫组化法CerbB-2与荧光原位杂交法结果对比摘 要目的 研究了解免疫组化法（IHC）CerbB-2对于临床乳腺癌诊断的意义，同时研究荧光原位杂交技术法(FISH）与免疫组化检测结果的一致性，可行性和必要性。方法 随机乳腺癌病例选择200例，以免疫组化法标记染色，分别得到（-）及（+）160例，（+）25例，（+）15例。选择（+）和（+）结果病例进行Her-2探针检测，分析评价两种检测结果及相关情况。结果 免疫组化结果（+）的病例其FISH结果为阳性为8例，免疫组化结果（+）病例其FISH结果阳性为13例。结论 免疫组化结果为（+）的与FISH结果具有极好的一致性，免疫组化结果
2、为（+）的与FISH结果一致性较差。关键字：免疫组化 荧光原位杂交 乳腺癌AbstractObjective to study the understanding method of immunohistochemistry (IHC) CerbB - 2 for the clinical significance of diagnosis of breast cancer, and study the fluorescence in situ hybridization (FISH) technique method and immunohistochemical detection res
3、ults of consistency, the feasibility and necessity. Methods randomly choose 200 cases of breast cancer cases, dyeing with immunohistochemical method markers, respectively by (-) and 160 (+), (+ +) 25 cases, 15 cases (+ + +). Select (+ +) and (+ + +) cases results in its ehrs - 2 probe detection, ana
4、lysis and evaluation of two kinds of test results and related conditions. Results immunohistochemical results (+ +) cases of the FISH result is positive for 8 cases, immunohistochemical results (+ + +) the FISH results positive for 13 cases. Conclusion immunohistochemical results of (+ + +) has the
5、very good consistency with the results of the FISH, immunohistochemical results of (+ +) consistent with the results of the FISH.Key words: immunohistochemical fluorescence in situ hybridization of breast cancer目 录引言：11.材料与方法11.1 初选材料11.2 排除材料11.3 研究方法11.3.1 免疫组化法11.3.2 荧光原位杂交法11.4 结果判断21.4.1 免疫组化结果
6、判断21.4.2 荧光原位杂交结果判断21.5 统计学意义22.结果23.讨论33.1 我国乳腺癌的发展趋势33.2 免疫组化CerbB-2检测技术33.3 荧光原位杂交Her-2检测技术33.4 免疫组化技术和荧光原位杂交技术联用的优势影响44.结论4参考文献5致谢6引言： 乳腺癌已成为威胁女性健康的重要危险因素，其主要威胁因素是由于癌细胞松散，容易脱落，游离于血液与淋巴液中，可扩散至全身，形成转移，危机生命。所以控制乳腺癌病死率，乳腺癌的筛查变得尤为重要。2002年美国FDA批准一种名为赫赛汀的乳腺癌靶向药物面世，极大的增加了乳腺癌患者的存活率和存活时间。但在使用该药前需做荧光原位杂交He
7、r-2基因检测来判断是否适合用药，而目前在病理学中检测乳腺癌的广泛使用方法是免疫组化法1。其检测结果与Her-2结果是否存在一致性尚不明确。因此，本人试图通过比较乳腺癌中免疫组化与荧光原位杂交结果来证明其之间具有一致性。1.材料与方法1.1 初选材料 选自2015年8月至今复旦大学附属华山北院病理科随机抽取乳腺癌病例资料200例，均为女性，年龄在4568岁，对该资料进行免疫组化检测，共计得到（）和（）160例，（+）25例，（+）15例。所有病例来源条件与检验过程中差异问题无明显意义，可做对比研究与结果调查使用。1.2 排除材料 排除材料1.1初选材料200例乳腺癌病例中免疫组化结果为（-）和
8、（+）的病理切片样本。1.3 研究方法1.3.1 免疫组化法200例乳腺癌患者活体标本经取材制成蜡块，将其切成厚度4um 切片，经温箱80烘烤15分钟后，二甲苯，酒精脱蜡，EDTA（PH9.0）修复液修复，滴加丹麦Dako公司提供CerbB-2一抗工作液常温孵育30分钟后经BUFFER溶液反复冲洗3次以上加入由丹麦Dako公司提供的二抗工作液孵育20分钟后再经BUFFER溶液冲洗3次以上加入由丹麦Dako公司提供DAB工作液进行10分钟显色，最后回收DAB试剂，BUFFER溶液及去离子水冲洗进行苏木素复染制得2。在常规显微镜下将观察到检测结果，记录最终检测结果，后与荧光原位杂交法检测结果做对比
9、。1.3.2 荧光原位杂交法选择结果（+），（+）的病例另切片，经80烤箱烘烤15分钟，二甲苯，酒精脱蜡，后用酸性亚硫酸钠处理组织标本30分钟，加入消化酶510分钟后SSC洗液洗片3次以上，后经甲酰胺溶液中变性5分钟，脱水干燥，加入由安必平公司提供的PathVysion Her-2探针于杂交湿盒内42过夜杂交，最后经DAPI复染制得，再经荧光显微镜下观察获得结果，记录最终检测结果，后与荧光原位杂交法检测结果做对比3。1.4 结果判断1.4.1 免疫组化结果判断根据我国通用标准，阳性表达部位位于肿瘤细胞薄膜其可将结果分为：常规显微镜下肿瘤细胞细胞膜染色或小于10为（-）；常规显微镜下肿瘤细胞细胞
10、膜大于10部分染色为（+）；常规显微镜下肿瘤细胞细胞膜大于10染色为（+）；常规显微镜下肿瘤细胞细胞膜大于10完全染色为（+）。一般以（-）和（+）作为阴性，以（+）和（+）为阳性。1.4.2 荧光原位杂交结果判断在荧光显微镜下17号染色体着丝粒位于核内显示绿色荧光信号，Her-2基因位于核内显示红色荧光信号。随机60个癌细胞视野分别计数红色和绿色荧光信号。以红色信号数/绿色信号数求得总数比值。比值大于2.2为阳性，比值小于1.8为阴性，比值在1.8-2.2间为存疑需结合免疫组化得出结论。1.5 统计学意义本次研究当中的所有数据均采用SPSS17.0统计软件进行处理，计量资料采用均数标准差（s
11、）表示，计数资料采用率（%）表示，P0.05表示差异具有统计学意义。2.结果 在200例乳腺癌病例中免疫组化CerbB-2表达结果为（+）25例和（+)15例。与之对应的荧光原位杂交（+)阳性为8例，阴性为12例，另5例结果比值在1.8-2.2之间属存疑结果，而在免疫组化表达（+）结果中阳性为13例，另2例结果属1.8-2.2之间属存疑结果。去除存疑结果后，剩余结果显示表达（+）的两种结果符合率为32.0%；表达在（+）的两种结果符合率为86.7%。2种表达结果总符合率为59.4%。（表1），两种阳性率比较差异无统计学意义（P0.05），以免疫组化方法检测CerbB-2阳性率表达较高；两种方法
12、的符合度一般，具体情况见表1、2。表1 200例乳腺癌患者免疫组化CerbB-2表达结果n（%）组别例数免疫组化CerbB-2结果（）和（）160阴性（+）25阳性（+)15阳性表2 免疫组化CerbB-2表达结果荧光原位杂交法检测结果对比研究n（%）组别免疫组化CerbB-2结果荧光原位杂交法符合率阳性阴性阳性存疑（+）25812532.0（+)15013086.73.讨论3.1 我国乳腺癌的发展趋势中国不是乳腺癌的高发国家，但发病情况也不太乐观，近年我国乳腺癌发病率的增长速度却高出高发国家1至2个百分点。据我国癌症中心和卫生部疾病预防控制局2012年公布的2009年乳腺癌发病数据显示：全国
13、肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位，女性乳腺癌发病率全国合计为10万人中有43人，城市为10万人中有52人，农村为10万人中有23人4。从发病比例上看，城市与农村在乳腺癌发病比例上并没有太多、太复杂的客观因素影响。当前，乳腺癌已成为当前社会的重大公共卫生问题。自20世纪90年代全球乳腺癌死亡率呈现出下降趋势；究其原因，一是乳腺癌筛查技术越来越完备，使早期筛查出的病例的比例增加；二是乳腺癌靶向药物赫赛汀的问世，提高了疗效。乳腺癌已成为疗效最佳的实体肿瘤之一，其在诊断、治疗方面的医疗技术已经得到了质的提高。3.2 免疫组化CerbB-2检测技术 免疫组化CerbB-2是一种编码185
14、KD跨膜糖蛋白（P185），位于染色体79Q21，受体内外某些特定因素激活，具有肿瘤转移活性。当前，免疫组化法已常规用于日常病理的诊断中，原癌基因CerbB-2已经成为乳腺癌的重要指标之一，其在临床诊断中的应用推广路径很宽泛，所以该项技术的发展速度很快。其主要特点包括成本低、操作简单、重复性好、准确性高、保存持久等，这些技术特点也正是免疫组化CerbB-2检测的技术优势5。在临床中，乳腺癌的病理样本几乎都首选免疫组化CerbB-2检测技术，以来，其诊断结果准确率较高，且病理分析科学、理性；二来，诊断周期较短，有助于对乳腺癌患者及时施救展开治疗。3.3 荧光原位杂交Her-2检测技术 Her-2
15、 的诊断与赫赛汀的使用密切相关。赫赛汀是由瑞士罗氏Roche药厂生产，是一种作用于人类表皮生长因子受体II的单克隆抗体，主要用于治疗某些HER-2阳性乳癌。它的出现极大的增加了Her-2阳性乳腺癌患者的存活时间，这种技术特性有利于荧光原位杂交Her-2检测保护样本的有效性。尽管免疫组化CerbB-2在诊断乳腺癌的过程中有若干优势，但是在实际操作过程中由于试剂批号不同，组织处理上的失误以及判读的时候很可能受到主观判断的影响使得结果的准确性下降产生不稳定性。而荧光原位杂交技术作为一种现代较为成熟的分子诊断技术，其优点是敏感度高，稳定性好，其定量及定性的结果可以弥补免疫组化结果的主观判断失误造成的影
16、响。甚至有些学者，在评价荧光原位杂交Her-2检测技术时，将其定义为诊断效果超过免疫组化CerbB-2检测技术检测结果的金标准6。随着荧光原位杂交Her-2检测技术的推广应用，有关于荧光原位杂交Her-2检测技术与免疫组化CerbB-2检测技术检测结果的对比研究也慢慢增多了，二者在联合方面的优势影响也开始被慢慢发掘。3.4 免疫组化技术和荧光原位杂交技术联用的优势影响目前，临床已经初步默认了乳腺癌疾病诊断的既定程序，基于免疫组化成本较低，操作简单的特点，可以结合临床作为乳腺癌的初筛，而结果成（+）或（+）建议进一步做荧光原位杂交Her-2检测，来确定治疗结果是否应用赫赛汀，以便系统的治疗乳腺癌
17、。该程序充分展现出了荧光原位杂交Her-2检测技术与免疫组化CerbB-2检测技术的技术配合优势，两种技术的结合可以更加客观准确的提供给临床医生，参考用药，并对乳腺癌患者预后进行评估。也正因为如此，在进行二者检测结果对比研究时，研究专家们更关注的是二者检测结果存在差异的地方，因为二者检测符合率越高，则说明在诊断上的错误越低，越有利于临床采用正确科学的方法治疗。资料中，（+）25例和（+)15例患者的病理样本，分别采用了荧光原位杂交Her-2检测技术与免疫组化CerbB-2检测技术检测，检测结果证明了，在（+）25例检测中，二者检测结果具有极好的一致性，在（+)15例中，二者检测结果具有极好的一
18、致性较差，今后在检测研究方面，还应多针对（+)类型患者，进行检测技术研究，查验其是否存在HER-2基因过表达情况；在何种情况下容易出现HER-2基因过表达情况；HER-2基因过表达情况是否会对整体检测结果产生影响等等。4.结论 免疫组化CerbB-2结果为（+）时，其荧光原位杂交结果与之一致性较好，而结果为（+）时，其荧光原位杂交结果与之一致性较差。尽管如此，还是建议免疫组化结果为（+）及以上的都应该进行Her-2基因检测，以确保其结果的准确性，获得使用靶向药物的机会。因此，即使两种种方法得到的结果的一致性存在着一定的差异，然而两种方法的都具有很强的可行性和必要性，二者配合的临床实践意义深远。
19、6参考文献1安杰，符鼎，郭建昇，肖虹.荧光原位杂交和免疫组化法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究J.山西医科大学学报，2009，11:972-975+1056.2眭维国，欧明林，陈洁晶，彭红波，万友华，黄河，齐旻芳，戴勇.荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究J.实验与检验医学，2010，01:16-18+46.3卢义生，张爱玲，莫新发，高学忠，赵东晖，何建芳，尹有群，付莉萍，王晓文.FISH技术在乳腺癌Her2基因检测中的应用J.赣南医学院学报，2010，06:862-864.4张青，李小欢，杨真，袁小林，张春蕾，崔益芬.110例乳腺癌患
20、者HER-2基因扩增状况及其与临床病理特征的关系J.中国医药导报，2013，11:86-88.5张喆，徐玮.IHC法与FISH法检测乳腺癌HER-2基因结果比较J.现代中西医结合杂志，2013，12:1267-1269.6赵士伟，刘欣，郑桂丽，毕经旺.乳腺癌Her-2基因扩增及其蛋白表达与ER、PR的关系及临床意义J.现代肿瘤医学，2013，05:1038-1040.致谢历时将近两个月的时间终于将这篇论文写完，在论文的写作过程中遇到了无数的困难和障碍，都在同学和老师的帮助下度过了。尤其要强烈感谢我的论文指导老师XX老师，她对我进行了无私的指导和帮助，不厌其烦的帮助进行论文的修改和改进。本文引用了数位学者的研究文献，如果没有各位学者的研究成果的帮助和启发，我将很难完成本篇论文的写作。最后，感谢我的同学和朋友，在我写论文的过程中给予我了很多你问素材，还在论文的撰写和排版灯过程中提供热情的帮助。