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1、实验室生物安全丰原医院 检验科李碧云 96.01.14实验室个人防护95.12.22病原体及其使用实验室分级 危险群危险群等级等级生物安生物安全等级全等级实验室实验室类型类型实验室实验室操作规范操作规范安全设备安全设备 11基基础础教教学学、研究研究优优良良微微生生物物学学技术技术无，开放式工作台无，开放式工作台22初初级级卫卫生生服服务务、诊诊断断服服务、研究务、研究优优良良微微生生物物学学技技术术加加上上防防护护衣衣、生生物物危危害害标志标志开开放放式式工工作作台台加加上上防防止止气气雾雾外流之生物安全柜外流之生物安全柜33特特殊殊诊诊断断服服务、研究务、研究同同第第 2 等等级级加加上上
2、特特殊殊防防护护衣衣、进进入入管管制制及及定定向气流向气流生生物物安安全全柜柜及及（或或）其其他他所所有有实实验验室室工工作作所所需需要要之之基基本本防护装备防护装备44具具危危险险性性之之病原体病原体同同第第 3 等等级级加加上上气气密密门门、出出口口淋淋浴浴及及废废弃弃物之特殊处理物之特殊处理级级生生物物安安全全柜柜或或级级生生物物安安全全柜柜并并穿穿着着正正压压防防护护衣衣、双双门门高高压压蒸蒸气气灭灭菌菌器器（穿穿墙墙式）及经过滤之空气式）及经过滤之空气分类基准(病原微生物危害性)等级等级说明说明例子例子第一级危险群第一级危险群(RG1)微生物微生物与与人人类类健健康康成成人人之之疾疾
3、病病无关无关 Bacillus subtilisEscherichia coli-K12adeno-associated virus Type 1-4第二级危险群第二级危险群(RG2)微生物微生物在在人人类类所所引引起起的的疾疾病病很很少少是是严严重重的的，而而且且通通常常有预防及治疗的方法有预防及治疗的方法 Measles virusSalmonellaeToxoplasma spp.Hepatitis B virus第三级危险群第三级危险群(RG3)微生物微生物 在在人人类类可可以以引引起起严严重重或或致致死死的的疾疾病病，可可能能有有预预防及治疗之方法防及治疗之方法 M.tubercul
4、osis SARS-associated CoronavirusesHantaan virus 第四级危险群第四级危险群(RG4)微生物微生物在人类可以引起严重或在人类可以引起严重或致死的疾病，但通常无致死的疾病，但通常无预防及治疗之方法预防及治疗之方法 Ebola virus Marburg virus人为的疏失，不良的实验室技术以及器具，装备的错误使用是引起实验室伤害和工作相关的感染。今天我们要讨论是如何避免或减少在报告文献上常提及发生的实验室技术性问题。个人安全防护个人安全防护 1.进入实验室应穿白袍实验衣，微生物中心人员加着隔离衣，戴外科手术口罩，手戴手套，必要时戴眼罩或面罩。2.实验
5、之病原体如有疫苗可预防，没有保护抗体之个人，必须事先施打疫苗，如B型肝炎疫苗。3.实验室工作人员要事先留存血液检体当Base line，必要时定期采取，以利健康管理及追踪监视。(本院是每年定期做员工健康检查)实验室内检体的安全处理 实验室内检体的不适当搜集，传送和处理将带给工作人员暴露于感染的险境。检体容器 检体的容器可用玻璃材质、塑料材质尤佳，容器要坚固，盖子或塞子要盖好，内容物不能泄漏，不可以有检体留在容器之外表，容器外面要标示清楚，检体名称、编号、患者姓、采取日期等。检体报表或检验请求表格不可以包在检体管子外表，要另外放入防水之封套。实验室内检体之传送为避免意外的泄漏或溢出，检体要直立挿
6、在试管架上再挿入第二层容器内(运送箱)，第二层容器之材质可以是金属或塑料材质且可高温蒸气减菌或耐化学消毒剂，最好盖子有弹性垫环，检体运送箱要常作清消。检体的收受 收受多数之检体要特别设立一个房间或区块不可以跟一般办公室混在一起。检体收受人收到检体应立即与医令单或报表核对检体件数、量(检体收受人不可任意打开检体瓶)、保温状况、登记收到日期、时间、并依序分送各组，除非不耐冷温的病原体否则分送时也要保持低温状态。检验人员收到检体要在送验簿(单)上签收(若有的话)才算完成送验程序。打开检体包装 收受及打开检体包装的人员，应该了解对健康具有潜在的危险性，工作人员需接受训练及熟悉标准操作步骤，尤其是遇到检
7、体容器破裂或泄漏之处理程序，盛检体的容器一定要在生物安全柜(BSC)内才能打开，而且一定要泡好消毒剂以备随时之需。避免感染物之扩散1.避免细菌掉落，微生物接种环(白金耳)的直径限2-3mm，且环要完整，柄端长度不超过6cm，以减少振动。2.开放式本生灯有溅射感染物之险，不可使用。应采用有阻体之电气焚烧器灭菌接种环。3.小心烘乾痰液检体，避免造成气胶。4.要丢弃之检体及培养物应放进防漏之袋子内，贴上灭菌指示带，灭菌后置入弃物桶。5.工作完毕工作区域要用适当的消毒剂作清消6.有感染性液溅出或滴落立即以浸消毒液之厚纸巾覆盖。生物安全柜(BSC)之使用(I)1.向所有使用者说明BSC之使用限制，并订定
8、使用纪录表、安全操作规范或使用操作程序书，发给属员，尤须特别声明，溅洒、破裂或不良之操作技术，无法保护操作者之生命安全2.启动BSC电源及马达开关3.待BSC之气流稳定后(约5分钟)以纸条测试BSC操作口气流是否形成气幕(Air curtain)4.功能故障的BSC不可以使用5.BSC台面铺浸消毒液厚纸巾或抗污纸垫6.使用操作中不可打开窗口玻璃7.BSC台面尽可能少摆放器械及耗材，后方之气栅不可堵塞生物安全柜(BSC)之使用(II)8.BSC内不可使用本生灯，因热气扰乱气流，且可能损坏HEPA，可以电气焚烧器替代，最好使用丢弃式灭菌接种环9.所有感染性实验操作必须在BSC内之中间或后方台面上，
9、操作者由窗口向内透视10.减少人员在操作者后面走动11.操作者之手、肘进出不能影响到气流方向12.注意检体或实验材料不可堵到气栅，因为这样扰乱气流方向，会造成检体污染及操作者暴露险境13.使用真空马达吸引潜藏感染性液必须装Trap及空气过滤器生物安全柜(BSC)之使用(III)14.决不可在BSC台面作纪录工作15.实验操作中不慎溅出或滴出感染性液，立即以浸消毒剂之吸水性厚纸巾覆盖16.实验操作中突然遇到停电或BSC故障，工作人员应立即离开17.实验操作前及工作完成后BSC风扇马达至少继续运转5分钟18.工作完毕BSC要用适当的消毒剂擦拭19.定期擦拭UV灯管20.开UV灯设置开灯时间21.B
10、SC每年定期检测避免感染性物刺伤 1.小心操作避免玻璃器具类之破裂碎片导致意外接种或割伤，尽可能使用塑类器皿替代2.意外刺伤都由尖锐物品如注射针、玻璃毛细管或玻璃器皿破裂所导致3.减少使用注射筒或使用特别设计之安全针筒及开瓶器以降低伤害4.注射针使用后绝不可把针套套回去，用过之针筒弃置于有盖子之坚固容器内5.处理破裂之玻璃碎片一定要用扫把及镊子6.以塑料品替代玻璃品 避免吞入感染性物及皮肤、眼睛之接触1.微生物实验操作中大的颗粒和小液滴(直径5um)很快就落到工作台面上和操作者的手上所以操作者要戴抛弃式手套，并避免口、眼及脸部接触感染性物2.实验室内不可贮放或饮食、食物3.实验室内嘴巴不可含铅
11、笔，咀嚼口香糖4.不可以在实验内化妆5.任何可导致溅洒的可能潜藏感染性物操作，脸部、眼睛、口都要有防护 血清分离 1.经过适当训练的人员才能从事这项工作2.戴手套及眼、粘膜之防护3.良好的实验操作技术才能避免或减少溅射及气胶之形成，血液及血清要利用自动吸管吸取，不可用倒的或以口吸取4.分离血清用之全血注意试管之放置，避免血液碰到试管盖(塞子)5.欲丢弃之血液检体管应置于有盖之感染性垃圾桶内，由清洁人员打包秤重之后专人焚烧6.备妥适当之消毒剂以备处理污染及溅洒之需7.血清检体管盛量要适当，过量易造成污染 离心机之使用(I)1.良好的机械操作是实验室安全使用离心机之要件2.离心机应依照制造厂商之说
12、明书操作使用3.离心机放置之高度要使操作人员能看清楚腔室之离心头及离心管套以利操作4.离心管及检体管之管壁要厚质玻璃、塑料材质更好，使用前要查看有无瑕疵5.注意离心管之材质是能耐你所要的离心力及转速6.离心管之检体装量要按生产厂商之使用说明装填7.离心管及离心管套盖子必须盖紧8.检体之装填及吸取必须小心勿使溅洒在外，必要时在BSC内操作9.离心管套及其套环要配对，放好检体后确实称重平衡离心机之使用(II)10.用角型转子(Angle rotor)，离心管检体不能装过量，否则会溢出，造成污染11.离心第三及第四等级危险之病原体必须用有气密盖之安全离心管套12.每日查看离心机腔室内转子旋转高度处之
13、污秽，如有污秽应重新评估protocol13.使用前查看转子及离心管套是否有腐蚀或线状龟裂14.每次使用后离心管套、转子及离心机腔室要作清洁消毒15.离心时转速不可加速太快16.用蒸馏水或70%propanol平衡空离心管套(Empty buckets)，不可用生理食盐水或次氯酸钠液因为会腐蚀金属17.离心机定期安全检测高压蒸气灭菌锅高压蒸气灭菌锅 (I)(I)1.欲灭菌之液状物容器不可装满超过三分之二以上的容量且不可紧闭容器口。2.用过耗材要装进内衬耐高温灭菌袋之不锈钢桶才可送进高压蒸气灭菌锅内。3.灭菌物贴灭菌温度指示带。4.随时紧闭锅门。6.灭菌完成欲打开锅门必先确认内锅压力已归零才可打
14、开锅门。高压蒸气灭菌锅高压蒸气灭菌锅 (II)(II)7.排气过滤8.安全阀检查9.定期清洗10.年度安全检查二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱1.培养容器外面应标示2.水盘定期清洗及更换蒸馏水3.注意二氧化碳桶气体量4.定期检测及校正培养箱内CO25.纪录培养箱温度及CO2厚度6.有培养物渗漏、污染立即清除消毒恒温水槽1.注意水位不可以低于电热管，随时添加水量2.定期清洗恒温水槽3.下班之前关闭不用的水槽加热器4.有感染物污染时水温调高到75持续加温一小时，待温度降下后加适量维康粉(约1%)消毒，清洗，更换蒸馏水冰箱、冰柜之使用与管理1.冰箱、冰柜要定期清理，贮存中容器如有破裂立即处理，清理时戴面
15、罩及厚橡胶手套、清理完，冰箱、冰柜内面要消毒2.超低温冰柜要定期更换温度纪录纸及散热风扇滤网3.冰箱、冰柜内要放温度计，并每日作温度纪录4.超低温冰柜内保存物少时应放些冰宝以维温度之稳定5.所有保存于冰箱、冰柜内之容器外表要清楚标示内容物、保存者姓名、日期、未标示及过期的材料灭菌、弃置6.易燃性液体不可以存放在冰箱(柜)内7.冰柜内保存物必须列列表保存8.超低温冰柜需加锁且专人管理玻璃及尖锐物 1.尽可能以塑料装品替代玻璃品，只有Borosilicate glass可以用，有裂痕或瑕疵品都不可以用2.注射针筒不可当吸管使用3.欲推出注射筒内(有感染性液体)之空气，针头必须置于纱布上，注射筒才缓
16、缓推出空气 冻结乾燥安瓶(装感染性材料)之开封 开冻结乾燥安瓶一定要特别小心，因内容物可能是在负压状态折断安瓶突然间空气进入可能有些内容物会冲出，开安瓶一定要在BSC内操作步骤如下:消毒安瓶外表2 手戴双层手套(手术手套外加防切割手套)3 在安瓶上端之适当位置以安瓶切割器割一下，切割处消毒后，安瓶挿入塑料试管，切割部位露出管口，再取一支塑料试管套在安瓶上端使安瓶切割部位介于两支试管之间，安瓶覆盖数层灭菌纱布后放入塑料袋，手在塑料袋外面，两手握试管轻轻用力一折安瓶就断4 慢慢注入灭菌蒸馏水或缓冲液溶解内容物。避免产生气泡显微镜观察之抹片 血液之染色、固定，痰、粪便之显微镜观察不一定杀死所有在玻片
17、上的微生物、病毒，这些抹片之处理要使用铗子，在作清消、高压灭菌弃置之前要做适当的保存 生物安全柜生物安全柜(感染性物感染性物)污染之处理污染之处理1.先以厚纸巾或吸水性良好之抹布覆盖污染处 2.消毒液倾注于覆盖纸巾上 3.以电话向实验室负责人及生物安全管理人报告 4.30分钟后，清除纸巾及破裂物(玻璃片用镊子夹取，细碎片用刷子处理)，废弃物置入生物安全柜内之 弃物容器内5.用浸消毒液厚纸巾擦拭污染区域二次 (不可用手直接擦拭)6.数分钟后用清水擦拭7.更换外层手套，脱下之手套放入生物安全柜内之 弃物容器内8.先打开高压灭菌锅门9.废弃物连同容器送进高压灭菌锅灭菌10.灭菌过之废弃物处理11.填写意外事件处理报告书，呈报实验室负责人及 生物安全管理委员会以上之处理限用于生物安全柜内之少量污染处理，如果是大量的污染，人员必须尽速离开实验室(生物安全柜不可停止运转)，张贴警示标志，并报告实验室负责人及生物安全业务主管，由生物安全委员会指派专人处理。生物安全柜生物安全柜(感染性物感染性物)污染之处理污染之处理