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1、 压力蒸汽消毒压力蒸汽消毒(xio d)(xio d)锅灭菌验证锅灭菌验证 孙雪奇 2006年6月第一页，共四十三页。消毒(xio d)n用物理或化学方法杀灭物体上大部分或所有病原微生物(芽胞除外)的过程。是指杀灭细菌的繁殖体,使活体细菌的绝大部分或全部被杀灭而不致引起感染或致病,但不能杀灭细菌芽胞。在外界环境适宜时,芽胞会引起细菌的繁殖，因而(yn r)消毒潜伏着再致病或感染的因素。第二页，共四十三页。不同(b tn)微生物对消毒因子的敏感性n最强 朊病毒（感染性蛋白质）n 细菌芽孢n 分支杆菌(gnjn)n 亲水病毒（非脂类病毒）：甲肝Vn 真菌n 细菌繁殖体n 亲脂病毒：流感V、HBV、
2、HIVn最弱第三页，共四十三页。灭菌(mi jn)n用物理或化学的方法清除杀灭所有形式的微生物。使物品无任何类型的存活(cn hu)微生物存在的过程。即使其达到无菌。第四页，共四十三页。验证(ynzhng)n按照规定的程序，评价灭菌周期所采用的灭菌工艺参数是否达到灭菌要求(yoqi)的过程和方法。第五页，共四十三页。灭菌(mi jn)的方法n目前常用的灭菌方法(fngf)有高温湿热灭菌、高温干热灭菌、气体灭菌、辐射灭菌、等离子体协同灭菌、过滤除菌等。第六页，共四十三页。如何确保灭菌(mi jn)效果n适当的:清洁，洗涤n 准备，包装n 灭菌锅装载及排列n 正确的灭菌方法n 灭菌锅操作(cozu
3、)n 灭菌监测:化学,生物和物理n 物品储存n 灭菌记录n第七页，共四十三页。为什么要监控(jin kn)灭菌过程?n是否无菌 无法看到n灭菌(mi jn)过程监控n 物理监测 n 化学监测 n 生物监测 第八页，共四十三页。灭菌过程(guchng)的物理监控n即灭菌器的机械指示 指灭菌器本身的状态，如:压力,温度,时间等n直接表明灭菌状态是否已达到,以及(yj)灭菌器是否正常工作，不能保证在灭菌器内的被灭菌物是否已处在要求的灭菌过程和灭菌条件下第九页，共四十三页。灭菌(mi jn)过程的化学监测 n生产时用，如EO灭菌时捆在产品外的指示纸带，压力蒸气消毒锅一般(ybn)不用第十页，共四十三页
4、。灭菌过程的生物灭菌过程的生物(shngw)(shngw)监测监测n将最难杀灭的微生物，放在灭菌器内最难杀灭部位(bwi)和标准测试包内，是灭菌质量最可靠的保证。n灭菌过程的生物监测不同于无菌试验第十一页，共四十三页。生物监测(jin c)常用两种菌n嗜热脂肪杆菌芽胞：压力蒸汽灭菌(mi jn)n枯草杆菌黑色变种芽胞：EO和干热灭菌第十二页，共四十三页。灭菌灭菌(mi jn)(mi jn)生物监测的目的：生物监测的目的：n达到：无菌保证水平(shupng)(SAL)10-6n在灭菌试验中，为便于给结果做出评价，除有特殊规定外，将试验菌芽孢（菌量 106 cfu/片）灭菌指数达到106，也就是说
5、，灭菌后1000000（一百万）件灭菌物中，只允许有一件以下有活的微生物存在，或自然微生物全部杀灭者为灭菌合格99.9999%。第十三页，共四十三页。压力蒸气压力蒸气(zhn q)(zhn q)灭菌原理灭菌原理n组成菌体的蛋白质分子的功能取决于它的特殊结构，在一定高温条件下受热时，沾染在被灭菌物品上的菌体蛋白质和核酸间分子内氢键发生断裂,影响(yngxing)了分子空间构型的重排,尤其是其中的酶失活，从而导致微生物的死亡。n高温高湿的环境能使一切微生物的蛋白质发生凝固和变性第十四页，共四十三页。n试验表明(biomng),饱和蒸汽的穿透性比干热空气及过热蒸汽穿透强得多,蒸汽冷凝时放出的潜热传给
6、待灭菌品,使之升温并使待灭菌品所带的微生物尤其是表面的微生物发生水合作用,从而加速了它们的死亡。第十五页，共四十三页。饱和饱和(boh)(boh)蒸汽蒸汽n干燥度在0.85 与1.0之间的蒸汽(即液体水含量不超过15%(m/m)n温度与汽化压力相对应。饱和蒸汽的压力和温度存在以下关系n温度T（）=106+143*压力（MP a）n表压（MP a）0.07 0.11 0.14 0.21 n蒸汽温度（）115 121 126 134 n如有水分(shufn)或冷空气，一定压力下相应温度要低一些-排冷凝水和冷空气第十六页，共四十三页。湿热湿热(sh r)(sh r)灭菌的对数规则灭菌的对数规则n灭菌
7、时微生物的死亡遵循对数规则,灭菌过程(guchng)可以用阿伦乌丝的一级反应式来描述。根据质量作用定律，在恒定温度及保持其它条件不变的情况下，单位时间内被杀灭的微生物数正比于t0时的原有的数目第十七页，共四十三页。D D值值-对数对数(du sh)(du sh)单位灭菌时间单位灭菌时间nD值,用以定量地描写一定温度下某种微生物在灭菌过程中的热忍耐性参数(cnsh)，系指一定温度下将微生物杀灭 90%或使之下降一个对数单位所需的时间（min）。第十八页，共四十三页。第十九页，共四十三页。Z Z值值-灭菌温度灭菌温度(wnd)(wnd)系数系数 Z值系指使某一种微生物的D值下降一个对数单位，灭菌温
8、度应升高的度数。不同(b tn)的微生物孢子，在不同(b tn)的溶液中有各不相同的Z值。Z值越大，微生物对温度变化的“敏感性”就越弱，Z值被用于定量地描述微生物对灭菌温度变化的“敏感性”。此时，企图通过升高灭菌温度的方式来加速杀灭微生物收效就不明显。第二十页，共四十三页。同种孢子的同种孢子的Z Z值在不同的溶液中亦有差异值在不同的溶液中亦有差异(chy)(chy)。下表列举了嗜热脂肪杆菌在不同溶液中的下表列举了嗜热脂肪杆菌在不同溶液中的Z Z值。值。第二十一页，共四十三页。F Ft t值值-T-T灭菌灭菌(mi jn)(mi jn)值值指一个给定Z值下，灭菌(mi jn)程序在温度T下的等效
9、灭菌(mi jn)时间。可以把 FT 理解为“T灭菌值”即“灭菌程序所赋予待灭菌品在T下的灭菌时间”。第二十二页，共四十三页。由于D值随温度的变化而变化，所以不同温度下达到相同(xin tn)灭菌效果时,FT值将随D值的变化而变化。灭菌温度高时，所需的“T灭菌时间”就短；灭菌温度较低时，则所需的“T灭菌时间”就长。第二十三页，共四十三页。F F0 0值值-标准标准(biozhn)(biozhn)灭菌值灭菌值 F0系T=121及Z=10下的FT值。如果把121理解为“标准状态”,那么F0可理解为“标准灭菌值”。蒸汽灭菌的F0值以分钟表示的灭菌值。系指对具有Z值为10的微生物而言,灭菌过程赋予产品
10、(chnpn)的标准灭菌时间。第二十四页，共四十三页。灭菌(mi jn)率LFo和FT的比值 下表列举了下表列举了Z=10Z=10时不同温度时不同温度(wnd)(wnd)下的灭菌率值，下的灭菌率值，表表1 Z=101 Z=10时，不同温度下的灭菌率和所相时，不同温度下的灭菌率和所相当的当的TT灭菌时间灭菌时间第二十五页，共四十三页。比较110和121的灭菌率，可以得出结论：-110灭菌12.6min和121灭菌1min等效。-灭菌时间相同(xin tn)，110灭菌效果只有121灭菌效果的7.9%。第二十六页，共四十三页。微生物从所施加的一定程度微生物从所施加的一定程度(chngd)(chng
11、d)(chngd)(chngd)的灭菌的灭菌中存活的概率取决于：中存活的概率取决于：n微生物的种类和数量n灭菌前和灭菌中微生物所处(su ch)的环境 n被灭菌产品中任何单个产品的无菌程度只能用总体中存在非无菌产品的概率来表示 第二十七页，共四十三页。一定的F0值下，灭菌的效果(xiogu)除了与药液中待杀灭的微生物的D值有关外，还与产品的带菌量有关；产品灭菌前的含菌量越高，无菌保证的可信度就越小。第二十八页，共四十三页。n药典规定：湿热灭菌条件通常采用n12115min，121 30min或116 n40min的程序(chngx)，也可以采用其它温度和时间参数，但必须保证物品灭菌后的nSAL
12、10-6第二十九页，共四十三页。n对热稳定的物品，可采用过度(gud)杀灭法，其SAL10-12。n热稳定性较差的产品的的标准灭菌时间F0【指灭菌温度为121.1，生物指示菌的耐热参数D值为1分，灭菌温度系数Z值为10.0 时的标准灭菌时间】一般不低于8分钟。第三十页，共四十三页。n如产品的热稳定性很差可允许F0低于8，此情况下，应在生产全过程中，对产品中污染的微生物严加监控，并采取各种措施降低(jingd)微生物污染水平，确保被灭菌产品达到无菌保证要求。第三十一页，共四十三页。如何如何(rh)(rh)进行灭菌效果的验证进行灭菌效果的验证n1.温度均匀性实验(shyn)（热分布试验）n2.灭菌
13、效果的生物验证（热穿透试验）第三十二页，共四十三页。压力蒸汽消毒压力蒸汽消毒(xio d)(xio d)锅灭菌验证锅灭菌验证n原则(yunz)n目的n要求第三十三页，共四十三页。原则原则(yunz)(yunz)n验证是GMP的重要组成部分，应按预定(ydng)的方案进行，总结验证的结果应记录在案备查。生产工艺和程序应建立在验证的基础上，并进行定期的再验证，以确保它们能达到预期的结果。第三十四页，共四十三页。目的目的(md)(md)灭菌器及灭菌程序验证的目的(md)是:调查确定灭菌过程中冷点的位置,设定灭菌程序有关参数,用试验来证实运行的可靠性及灭菌程序的重现性,以确保产品灭菌后达到低于百万分之
14、一的微生物污染率。第三十五页，共四十三页。基本基本(jbn)(jbn)要求要求第三十六页，共四十三页。运行运行(ynxng)(ynxng)确认确认 运行确认包括设备的检查及通过试运行对灭菌性能的调查检查,及设定灭菌程序的重复性试验。运行确认中应保证(bozhng):在设定的蒸汽压力和温度范围内,蒸汽、水、压缩空气和液体无渗漏;门的联锁系统安全可靠;第三十七页，共四十三页。热分布热分布(fnb)(fnb)试验试验该试验分两步进行(jnxng):一是作空载的热分布试验,二是装载的热分布试验。试验要点如下:将温度探头(或留点温度计)编好号,固定在灭菌器腔室的不同位置，温度探头的放置应包括可能的高温点
15、及低温点。应有一个探头放在灭菌器温度控制探头处，一个放在靠近温度记录控制探头附近，其余均匀分布于灭菌器腔室内，以使温度的监测具有好的代表性。在装载热分布试验中，装载应尽可能使用待灭菌产品或类似物，第三十八页，共四十三页。按设定的灭菌程序如121 30min或115 40min进行(jnxng)灭菌，试验中采用的参数及装载方式与正常生产所采用的相同;每种装载方式进行3次重复试验,确定空载的冷点位置;试验前后温度探头都要进行校正。通过试验证明:最冷点和腔室平均温度间差值应2.0。第三十九页，共四十三页。热穿透热穿透(chun tu)(chun tu)试验试验 在灭菌器负载状态下(一般为最大负载),
16、将5支经过校正的标准热电阻（留点温度计）和生物指示剂插入到灭菌物品中按正常灭菌程序进行 灭菌结束后，待灭菌锅自然冷却后打开(d ki)盖子，记录各位置留点温度计读数，取出生物指示剂在55度培养，在24和48小时后观察生物指示剂是否有颜色变化，记录结果第四十页，共四十三页。灭菌器验证(ynzhng)的时间第四十一页，共四十三页。综合以上所述,对灭菌器主要性能的要求可归结为:灭菌程序重现性好 有好的热分布(fnb)状态 微生物标的验证的试验达到要求;灭菌程序能确保达到设定的Fo值。第四十二页，共四十三页。内容(nirng)总结压力蒸汽消毒锅灭菌验证。亲脂病毒：流感V、HBV、HIV。干燥度在0.85 与1.0之间的蒸汽(即液体水含量不超过15%(m/m)。可以把 FT 理解为“T灭菌值”即“灭菌程序所赋予待灭菌品在T下的灭菌时间”。-灭菌时间相同，110灭菌效果只有。灭菌前和灭菌中微生物所处的环境。被灭菌产品中任何单个产品的无菌程度只能用总体中存在非无菌产品的概率(gil)来表示第四十三页，共四十三页。