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1、实验二、三实验二、三 培养基制作及培养基制作及灭菌灭菌实验二、三实验二、三 培养基配置和灭菌、无菌检测培养基配置和灭菌、无菌检测n n一、实验目的一、实验目的n n1.1.掌握微生物学实验中常用的玻璃器皿的包扎方掌握微生物学实验中常用的玻璃器皿的包扎方法与棉塞的制作法与棉塞的制作n n2.2.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤般方法和步骤n n3.3.了解加压蒸汽灭菌的原理，并掌握其具体操作方了解加压蒸汽灭菌的原理，并掌握其具体操作方法法二、实验原理二、实验原理n n（1）微生物学常用的玻璃仪器 培养皿，试管，三角瓶（锥形瓶）、吸量
2、管，（大小）培养皿，试管，三角瓶（锥形瓶）、吸量管，（大小）（2）培养基的分类 按物理状态分、按组成成分分、按用途分按物理状态分、按组成成分分、按用途分 配置培养基时注意的事项：配置培养基时注意的事项：pHpH（不能回调不能回调不能回调不能回调），），T T （3 3）培养基的灭菌）培养基的灭菌 培养基配置好后应立即灭菌，且不能再次灭菌培养基配置好后应立即灭菌，且不能再次灭菌 化学灭菌化学灭菌(甲醛，洁尔灭、升汞），甲醛，洁尔灭、升汞），物理灭菌（干热，紫外线等、过滤除菌）、物理灭菌（干热，紫外线等、过滤除菌）、湿热灭菌湿热灭菌湿热灭菌湿热灭菌干燥箱干燥箱细菌过滤器细菌过滤器用于滤过除菌的各式
3、滤器用于滤过除菌的各式滤器手提式灭菌锅手提式灭菌锅坐坐式式灭灭菌菌锅锅高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器卧式灭菌锅卧式灭菌锅三、实验器材三、实验器材 n n1.药品及试剂：1 1 牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏牛肉膏 3g3g、蛋白胨、蛋白胨5g5g、氯化钠、氯化钠 10g10g、琼脂、琼脂1520g1520g、pH7.07.2pH7.07.2水水1000mL 1211000mL 121灭菌灭菌20min20min。n n22高氏（高氏（高氏（高氏（GauseGause）1 1号培养基（培养放线菌
4、用）号培养基（培养放线菌用）号培养基（培养放线菌用）号培养基（培养放线菌用）n n可溶性淀粉可溶性淀粉20g 20g、硝酸钾、硝酸钾1g1g、氯化钠、氯化钠 0.5g0.5g、磷酸氢二钾、磷酸氢二钾 0.5g0.5g 硫酸镁硫酸镁0.5g0.5g、硫酸亚铁、硫酸亚铁 0.01g0.01g、琼脂、琼脂20g20g、水、水1000mL1000mL、pH7.2-7.4pH7.2-7.4n n 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1
5、000mL1000mL。121121灭菌灭菌20min20min。n2.仪器及其它 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸(5.5-9.0)、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、干燥箱、培养皿、涂布棒、吸管（1ml）、玻璃珠四、实验方法和步骤四、实验方法和步骤1.1.微生物常用玻璃仪器的包扎和棉塞的制作微生物常用玻璃仪器的包扎和棉塞的制作n n a.培养皿的包装每10套一包，用旧报纸包扎（或放在特制铁皮圆筒里，加盖扣严）。n n b.吸管的包装首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用长纸条包扎、打结。n n c.玻璃涂布棒的包装方法同吸管的包装。n n d.三角瓶的包扎2
6、.培养基的制备与分装培养基的制备与分装n n（1 1）三角瓶固体培养基的制备）三角瓶固体培养基的制备 a.a.称量按培养基配方比例依次准确地称取药品，称量按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入在瓷缸内。放入在瓷缸内。（注意药品称量顺序）（注意药品称量顺序）（注意药品称量顺序）（注意药品称量顺序）b.b.加入定量的琼脂、水，煮沸，溶解加入定量的琼脂、水，煮沸，溶解 c.c.完全溶解后，补充水分，调完全溶解后，补充水分，调pHpH值（值（不要调过不要调过不要调过不要调过头头头头）d.d.分装置三角瓶中，分装置三角瓶中，注意装液量注意装液量注意装液量注意装液量 e.e.加棉塞，包扎，加棉塞，包扎，
7、高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌,121,121,0.10Mpa,20min,0.10Mpa,20min（2）试管斜面固体培养基的制备）试管斜面固体培养基的制备n n a.称量按培养基配方比例依次准确地称取药品，放入在瓷缸内。（注意药品称量顺（注意药品称量顺序）序）b.加入定量的琼脂、水，煮沸，溶解 c.完全溶解后，补充水分，调pH值 d.在培养基未融化之前，用10mL移液管快速加入试管内，每根7-8mL，塞上棉塞，包扎，灭菌，灭菌完后摆斜面。3.培养基、无菌水、器皿的灭菌培养基、无菌水、器皿的灭菌 n na.将培养基、无菌水放入高压蒸汽灭菌锅内，湿热灭菌。n nb.灭菌完毕，将试管培养基搁成斜面。n
8、 nc.器皿放入干热灭菌箱内，加热灭菌。思考题思考题n n1.1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养菌是无菌的？灭菌后的培养菌是无菌的？n n2.2.加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上加压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？为什么？n n3.3.干热灭菌应该注意哪些事项？干热灭菌应该注意哪些事项？n n4.4.管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？为什么？塞代替？为什么？实验报告注意事项实验报告注意事项n n1.上课前必须写好预习实验报告n n2.实验报告内容必须填写完整，如 实验课程，实验时间，指导教师等n n3.本次实验结束后必须记录好原始记录，由老师签完名后方可离开n n4.值日生打扫卫生值日生打扫卫生n n5.实验成绩占期末总评成绩的20%