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1、 HIV抗体筛查试验体会及经验交流 宣武医院艾滋病筛查实验室 李秀玉首都医科大学宣武医院艾滋病防治工作制度首都医科大学宣武医院艾滋病防治工作制度工作小组及工作职责工作小组及工作职责（一）工作小组 组 长：主管院长 副组长：门诊部主任、保健科主任 组 员：皮肤性病科主任、妇产科主任、泌尿外科主任、检验科主任、医院感染管理科（副）主任、健康教育科负责人、门诊部护士长（二）工作职责 负责我院艾滋病防治的管理工作。督导艾滋病诊断、登记、报告、实验室初筛、宣传教育、专业培训等工作的落实。检验科初筛初筛HIV阳性阳性保健科接到检验科通知标本送至市CDC门急诊初筛阳性病人住院初筛阳性病人市CDC确证确证HI
2、V阳性阳性皮肤性病科流调、告知签字保健科协助病房流调、告知签字检验科到市CDC取报告、复印报告保健科接到检验科通知门急诊确证阳性病人住院确证阳性病人病房主管医生填报传染病卡通知病人取确证报告保健科填报传染病卡（非皮科）皮肤性病科填报传染病卡通知所有门诊病人取确证报告保健科统一网报宣宣武武医医院院HIV抗抗体体初初筛筛阳阳性性流流调调告告知知及及确确证证阳阳性性报报告告流流程程图图样样样样品品品品初筛初筛初筛初筛 试验试验试验试验一阴一一阴一一阴一一阴一阳阳阳阳 均阳性反应均阳性反应均阳性反应均阳性反应报告阴性报告阴性报告阴性报告阴性确证试验确证试验确证试验确证试验 复检试验复检试验复检试验复检
3、试验 报告阴性报告阴性报告阴性报告阴性均阴性反应均阴性反应均阴性反应均阴性反应阳性阳性阳性阳性 反应反应反应反应原有试剂另一原有试剂另一原有试剂另一原有试剂另一 不同原理（或厂家）不同原理（或厂家）不同原理（或厂家）不同原理（或厂家）试剂或另外两种不同试剂或另外两种不同试剂或另外两种不同试剂或另外两种不同原理（或厂家）原理（或厂家）原理（或厂家）原理（或厂家）试剂试剂试剂试剂选用筛查试剂选用筛查试剂选用筛查试剂选用筛查试剂阴性反应阴性反应阴性反应阴性反应HIVHIV抗体筛查检测流程图抗体筛查检测流程图HIV筛查实验室的SOP文件n人类免疫缺陷病毒抗原抗体（万泰）检查标准操作程序（SOP）n人类
4、免疫缺陷病毒抗体（丽珠）检查标准操作程序（SOP）n XD711酶标分析仪标准操作程序（SOP）nThermo Wellwash 4 MK型自动洗板机标准操作程序（SOP）n生物安全手册n艾滋病实验室安全防护和职业暴露预防程序(SOP)HIV标本接收n样本接收：每个检测标本均有唯一电子条码标识，经检验科扫码确认接收，信息经过LIS系统编辑，自动生成HIV检测信息名单，并在信息中心有备份。n信息包括患者姓名，年龄，科室等，本筛查实验室已经取消手工登记，可随时打印电子版。HIV抗体筛查检测试剂盒nHIV抗体初筛试剂盒 万泰四代试剂盒nHIV抗体复检试剂盒 丽珠三代试剂盒nHIV抗体快速检测试剂 雅
5、培金标试剂 仅用于HIV初筛质评 万泰金标试剂HIV初筛试剂盒（万泰四代）HIV Ag检测检测:HIV AgHIV Ag固相固相 血清血清/血浆血浆 结合物结合物1/结合物结合物2HIV 1 Ab:抗抗p24单克隆抗体单克隆抗体.生物素标记的抗生物素标记的抗HIV单克隆抗体单克隆抗体 过氧化物酶标记的亲和素过氧化物酶标记的亲和素 TMB/H2SO4P在同一孔中同时在同一孔中同时检测检测HIV Ab:IgG,IgA,IgM固相固相 血清血清/血浆血浆 结合物结合物1HIV 1 Ag:gp 160 重组抗原重组抗原.过氧化物每标记的过氧化物每标记的gp 41肽段肽段f功能性保守肽段功能性保守肽段.
6、过氧化物每标记的过氧化物每标记的f功能性保守肽段功能性保守肽段HIV 2 Ag:gp36 肽段肽段.过氧化物每标记的过氧化物每标记的gp 36肽段肽段TMB/H2SO4P第四代HIV酶免试剂的实验原理实验原理HIV酶免四代诊断试剂的窗口期 infectivity3rd gen1st-2nd genHIV antigenIgM abIgG abDetection limit=window4th3周周2周周1个月个月HIV抗原抗体联合检测（万泰四代）1.按照所需数量在板架上放好酶标板条.2.设3孔阴性对照，2孔质控，1型、2型、抗原阳性对照共3孔 3.每孔加入20ul生物素试剂.4.每孔加入100
7、ul样品、对照或质控，轻轻震荡.4.37孵育60分钟.5.洗板5次.拍干.6.加入100ul酶标记物.7.37孵育30分钟.8.洗板5次.拍干.9.每孔加入显色剂A、B各50ul，轻轻震荡混匀 10.37孵育30分钟.11.每孔加入50ul终止液，10分钟内测结果 12.在450nm/620nm双波长下读数.13.计算界限值:界限值(Cut-off)=阴性对照平均值+0.12 14.判断结果：大于等于界限值判为阳性,小于界限值判为阴性.HIV抗体检测（丽珠）实验程序 1.按照所需数量在板架上放好酶标板条,撕去封条.2.设阴性对照3孔，HIV-1阳性对照2孔，HIV-2阳性对照2孔,质控1孔 3
8、.加入50ul样品、对照或质控.4.37孵育60分钟.5.洗板6次.6.每孔加入50ul酶标记物 7.37孵育30分钟.8.弃去孔内液体，洗板6次 9.加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，振荡混匀，37孵育30分钟 10.加入终止液50ul 9.在450nm/620nm波长下读数.10.计算界限值：界限值(Cut-off)=阴性对照平均值+0.15，阴性对照平均值小于0.08按0.08计算 11.判断结果：大于等于界限值判为阳性,小于界限值判为阴性.HIV抗体初筛阳性患者信息查询n根据北京市CDC预防控制中心所下发的新版HIV抗体复检化验单要求（2011年7月1日开始实行），更好的配
9、合流行病学调查，填写HIV抗体初筛阳性患者信息n通过信息中心制作的软件，输入患者就诊的卡号，有权限的查询，姓名，性别，年龄，身份证号，籍贯，现住址，电话等。送检单位首都医科大学宣武医院检验科送检日期2012年 3月5日 送检标本血清所属人群内科门诊患者姓名李XX性别男年龄29职业不详身份证号码220204198302061XXX手机号码1352238XXX现住址吉林省吉林市船营区桃源路60-3-45号户籍所在地吉林国籍或民族汉既往病史不详初 筛 试 验复 检 试 验第一次第二次检测日期2012-03-052012-03-052012-03-05检测方法ELISAELISAELISA试剂厂家万泰
10、（四代）万泰（四代）珠海丽珠批 号H20111211H201112112011040908有 效 期201212082012120820120412ELISA法OD值空 白双波长无空白双波长无空白双波长无空白阴性对照均值0.0010.0080.005阳性对照3.1292.6273.12临 界 值0.1210.1280.23送检标本2.1632.3522.964结 果阳性 阴性阳性 阴性阳性 阴性复检结论HIV抗体待确认 阴性检测者（签字）：审核者（签字）：送检单位（公章）电话：83198361邮编:100053备注：HIV抗体复检化验单抗体复检化验单秘密编 号2012030501 HIV阳性上
11、报记录表阳性上报记录表n万泰四代酶免试剂进行初筛，n发现初筛阳性标本后，先用相同试剂重复试验，n结果如为阳性，再用丽珠酶免试剂重复试验，n如结果仍为阳性，则应先通知保健科，n然后填好HIV初筛阳性送检单，由医务处联系专车送市CDC的HIV确证实验室进行确证试验。n送到后领取回执，并按回执上的取报告时间,尽量由送检人领取确证报告。n取回后通知保健科，门诊病人由病人本人或监护人领取确证报告，病房病人可由责任医生领取，其他人不得领取确证报告。病人资料初次试验结果复检结果二次复检结果送检时间送检人取报告人取报告时间确证试验结果领取人签名HIV抗体检测阳性上报记录表抗体检测阳性上报记录表HIV抗体检测质
12、量控制n感染性疾病血清标志物系列C（卫生部室间质评)每年三次n北京市艾滋病筛查实验室质控考评 每年两次nHIV抗体检测室内质控 每批次/每日nHIV抗体检测月质控图（总结表）HIV抗体检测室内质控n试剂盒内的阴性、阳性对照质控品n外部质控品的选择：万泰康彻思坦有限公司HIV弱阳性质控品 n规格0.5NCU/ml,1ml/支n每天每一批次都做质控条带包括3个阴性对照，两个质控，三个阳性（HIV-1,HIV-2,P24）对照ELISAELISA定性试验室内质控记录表定性试验室内质控记录表日期Level1（阴性对照）Level2（弱阳性对照）Level3（阳性对照）ODS/CO定性ODS/CO定性O
13、DS/CO定性12345678910项目：HIV抗体 质控批号：日期：HIV抗体检测室内质控规则n室内质控图是Levey-Jennings质控图n外部对照质控品的平均值和标准差采取实验室常规使用方法对质控品重复测定至少20次的基础上,取得至少20个数据.n以光密度值（OD）与临界值(CUTTOFF)的商(SC0)为统计值。n计算平均值()和标准差(s)，定出控制限。以2s为警告限(2s)，以3s为失控限(3s)，做成质控框架图。以后每次外部对照质控品的测定值，点入质控图。n质控规则 13S;22S;10X 实验室生物安全n进入实验室应穿隔离衣、戴手套。n工作完毕，要对工作台面消毒。工作台面用0.1%次氯酸溶液消毒；n每日工作完毕紫外线灯消毒2小时n工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手。n HIV抗体阴性标本冷藏保存1周；HIV抗体初筛阳性血清样品送CDC,其余高压处理。谢 谢