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1、Bio-EnocheGM试验的原理、试验的原理、操作及应用操作及应用客服技术培训中心2013年8月Bio-Enoche目目 录录一、侵袭性曲霉菌病一、侵袭性曲霉菌病二、二、GM试验原理及使用方法试验原理及使用方法三、三、GM试验的临床应用试验的临床应用Bio-Enoche曲霉菌曲霉菌曲霉菌(Aspergillus)是广泛存在于自然界一种腐生菌，孢子较小，直径23um，可在空气中漂浮，可通过呼吸道进入人体。1 Lin SJ,et al.J Clin Infect Dis,2001,32(3):358-366多种曲霉菌都可引起侵袭性曲霉病，如烟曲霉、黑曲霉、土曲霉、黄曲霉和构巢曲霉等，90%报道的
2、患者都是由烟曲霉感染所致病1。烟曲霉黄曲霉黑曲霉Bio-Enoche 侵袭性曲霉患者在血液科和血液科和ICU最为常见1994-1999年法国一项前瞻性流行病学调查结果Cornet m et al.J Hosp infect.2002;514:288-296曲霉菌感染的发生率曲霉菌感染的发生率相关重点科室：血液科，呼吸科，ICU科，肿瘤科，移植科室等Bio-EnocheTeutsch,et al.Clin Infect Dis.2001,32:358不同基础疾患下侵袭性曲霉感染的死亡率不同基础疾患下侵袭性曲霉感染的死亡率100%90%80%70%60%50%40%30%20%0%白血病白血病骨髓
3、移植骨髓移植肾移植肾移植肺肺/心脏移植心脏移植肝移植肝移植AIDS49%92%68%44%75%89%曲霉菌感染的死亡率曲霉菌感染的死亡率Bio-Enoche不同诊治情况下侵袭性曲霉不同诊治情况下侵袭性曲霉感染的死亡率感染的死亡率100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%死亡率死亡率未能诊断，未治疗未能诊断，未治疗病程病程10天以上天以上经验性早期诊治经验性早期诊治有效药物治疗有效药物治疗100%90%65%40%David W Denning,The Lancet,2000,February 5,Vol 355Bio-EnocheIFD诊断延断延迟时间与死亡率的关系与
4、死亡率的关系50%40%30%20%10%0%死亡率死亡率IFD诊断延迟诊断延迟1天天IFD诊断延迟诊断延迟2天天IFD诊断延迟诊断延迟3天及以上天及以上36%41%24%Garey KW et al.Clin Infect Dis 2006,43:2531早期诊断和治疗已成为当今医学领域共同关注的重大问题早期诊断和治疗已成为当今医学领域共同关注的重大问题！Bio-Enoche 临床及影像学表现临床及影像学表现 病原学证据病原学证据 无菌部位培养阳性无菌部位培养阳性 （培养和非培养方法）（培养和非培养方法）组织病理学阳性组织病理学阳性 高危患者高危患者 拟诊拟诊 临床诊断临床诊断 确诊确诊 预
5、防用药预防用药 经验性治疗经验性治疗 抢先治疗抢先治疗 靶向治疗靶向治疗 深部真菌病诊断与治疗策略深部真菌病诊断与治疗策略 Bio-Enoche曲霉菌的实验室检测方法曲霉菌的实验室检测方法涂片：敏感性和特异性均较低。无菌体液培养：耗时长，阳性率低。1,3-D-葡聚糖检测：G试验不能鉴别菌属半乳甘露聚糖抗原检测：GM试验 曲霉菌抗体检测：抗半乳甘露聚糖抗体检测试验一、传统方法一、传统方法二、针对真菌感染标记物的早期快速检测方法二、针对真菌感染标记物的早期快速检测方法病理切片：取材困难，阳性率低。金标准检测曲霉菌属Bio-EnocheGM试验被列入真菌诊断和治疗的指南试验被列入真菌诊断和治疗的指南
6、欧洲癌症治疗研究组织(EORTC)美国国家过敏症与传染病研究所霉菌病研究组(MSG)批准用于真菌诊断中国血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准与治疗原则(第3次修订)Bio-EnocheGM实验在欧洲已用了十多年，实验在欧洲已用了十多年，2003年经年经FDA认可在美国认可在美国使用。使用。有有2/3的的血液肿瘤血液肿瘤患者在其他诊断方法阳性之前患者在其他诊断方法阳性之前6-14d（平（平均均8天）天）即可检测到即可检测到GM抗原抗原【1】。适于侵袭性曲霉感染的。适于侵袭性曲霉感染的早期诊断。早期诊断。【1】Maertens J,Van-Eldere J,Verhagen J,et al
7、.Use of circulating galactomannan screening for early diagnosis of invasive aspergillosis in allogeneic stem cell traspants.J Infect Dis,2002,186(9):1297-1306Bio-Enochea.GM 试验阳性是侵袭性曲霉菌感染诊断标准中重要的微生物学依据微生物学依据b.可实现侵袭性曲霉菌感染的早期诊断早期诊断c.可实现对高危人群曲霉菌感染的动态监测动态监测d.可对抗真菌治疗提供用药依据提供用药依据和进行药效学评价药效学评价GM试验的临床意义试验的临床
8、意义Bio-Enoche侵袭性真菌感染的诊断标准侵袭性真菌感染的诊断标准 欧洲癌症研究和治疗组织/侵袭性真菌感染协作组（EORTC/MCG）（2008修订版）宿主因素 临床表现 微生物学依据 脑脊液隐球菌荚膜多糖抗原阳性确诊 半乳甘露聚糖（GM）试验、G试验临床诊断 组织病理依据Bio-Enoche早期诊断早期诊断 GM试验检测的是半乳甘露聚糖半乳甘露聚糖，主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断，是曲霉菌特有的细胞壁成分，当菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放最早释放的抗原的抗原。GM试验检测早于临床症状和影像学判断早于临床症状和影像学判断【1】：1.可比侵袭性曲霉病(IA)临
9、床症状平均早5-8天；2.比高分辨CT扫描平均早7.2天；3.比开始经验性抗真菌治疗平均早125天。【1】Pazos C et al.J Clin Microbiol,2005,43:299-305Bio-Enoche为临床用药提供依据为临床用药提供依据不同病原不同病原感染在临床用药方面的差异感染在临床用药方面的差异曲霉菌曲霉菌:伏立康唑伏立康唑,伊曲康唑伊曲康唑,卡泊芬净卡泊芬净,两性霉素两性霉素-B-B等等念珠菌:白色念珠菌:氟康唑;非白念:伏立康唑或卡泊芬净;卡氏肺囊虫:复方新诺明、卡泊芬净毛霉菌:目前只有两性霉素-BBio-Enoche2012年卫生部对抗菌药物分级管理政策年卫生部对抗
10、菌药物分级管理政策非限制使用级，如：青霉素，苯唑西林 氟康唑氟康唑限制使用级，如：哌拉西林/他唑巴坦 伏立康唑伏立康唑特殊使用级，如：亚胺培南 卡泊芬净卡泊芬净2012年年“专项整治专项整治”重点内容重点内容非限制级抗菌药物使用前送检率非限制级抗菌药物使用前送检率30%限制级抗菌药物使用前送检率限制级抗菌药物使用前送检率50%特殊级抗菌药物使用前送检率特殊级抗菌药物使用前送检率80%GM试验是真菌送检项目之一，对控制抗菌药物滥用有重要意义。试验是真菌送检项目之一，对控制抗菌药物滥用有重要意义。Bio-Enoche评价疗效和病情监测评价疗效和病情监测 GM释放量与菌量成正比，可以反映感染程度，动
11、态监测血清GM水平的变化有助于判断抗真菌治疗的效果。在治疗期间,如果病人GM持续阳性或保持较高水平则预后差。GM抗原清除早的病人预后好，提示连续的血清GM检测能够监测病情变化。Bio-Enoche不同患者BG()and GM()体液变化情况GM试验与疗效评价试验与疗效评价GM抗原含量随着抗真菌药物的使用逐渐降低Bio-EnocheGM试验原理及使用方法试验原理及使用方法Bio-Enoche半乳甘露聚糖（半乳甘露聚糖（Galactomannan，简写，简写GM）是曲霉菌细是曲霉菌细胞壁上的一种多聚抗原，其包含了甘露糖骨干与半乳糖旁胞壁上的一种多聚抗原，其包含了甘露糖骨干与半乳糖旁基的多糖，更准确
12、的一点来说，是直线状（基的多糖，更准确的一点来说，是直线状（1-4）-D型型甘露糖骨架于它们甘露糖骨架于它们6-连接点连接到连接点连接到-D型半乳糖的多糖，型半乳糖的多糖，即即1-6-连结的连结的-D型吡喃半乳糖。型吡喃半乳糖。Bio-Enoche曲霉菌半乳甘露聚糖抗原检测（曲霉菌半乳甘露聚糖抗原检测（GM试验）试验）产品名称：曲霉菌半乳甘露聚糖检测试剂盒方法：竞争法ELISA规格：96人份/盒检测样本：血清检测物质：半乳甘露聚糖抗原敏感性和特异性：敏感性83%，特异性90%检测时间：2小时阴阳性判断：阳性 GM浓度0.95g/L 疑似 0.95g/L GM浓度0.75g/L 阴性 GM浓度0
13、.75g/Ll获得欧盟CE认证l获得国家SFDA认证Bio-Enoche一、酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)技术是以抗原、抗体的特异性结合反应为基础，将抗原或抗体的检测与酶对底物的高效催化作用结合起来的一种敏感性很高的免疫检测技术。二、按反应方式的不同，ELISA实验的方法分多种。本次推出的真菌抗原和抗体检测产品分别采用了竞争法和间接法。三、ELISA试验的操作过程由样本处理、加样、孵育、洗涤、显色、终止等几个基本环节组成。各环节的具体要求因产品而异。ELISA的基本原理的基本原理Bio-Enoche本公司使用竞争本公司使用竞争
14、ELISA法，其原理是标本中的抗原和酶标板上包被的固相法，其原理是标本中的抗原和酶标板上包被的固相抗原均与试剂中半乳甘露聚糖抗体结合。标本中抗原量含量愈多，与试剂抗原均与试剂中半乳甘露聚糖抗体结合。标本中抗原量含量愈多，与试剂中半乳甘露聚糖抗体结合越多，剩余的抗体与包被抗原结合的越少，抗原中半乳甘露聚糖抗体结合越多，剩余的抗体与包被抗原结合的越少，抗原抗体结合物与酶标抗体结合的越少，最后的显色也愈浅。抗体结合物与酶标抗体结合的越少，最后的显色也愈浅。标本和试剂反应后所产生的标本和试剂反应后所产生的OD值与标本中待测定的值与标本中待测定的GM含量成反比关系。含量成反比关系。通过标准曲线，便可以从
15、反应显色的通过标准曲线，便可以从反应显色的OD值上计算出待测标本中值上计算出待测标本中GM的含量。的含量。Y包被抗原包被抗原一抗一抗Y标本标本（含抗原）（含抗原）YY酶标酶标抗体抗体底物底物YE洗涤洗涤Y包被抗原包被抗原YYE包被抗原包被抗原YEBio-Enoche曲霉菌半乳甘露聚糖检测（曲霉菌半乳甘露聚糖检测（GM试验）试验）试剂盒使用方法试剂盒使用方法一、实验前准备二、样本处理三、样本混合四、样本转移五、洗涤六、加酶标抗体七、洗涤后显色八、读数Bio-Enoche开展开展GM实验需具备的基本条件实验需具备的基本条件单道及多道移液器单道及多道移液器高速离心机高速离心机酶标仪（酶标仪（450n
16、m450nm波长）波长）恒温培养箱恒温培养箱Bio-EnocheGM试验试验必需仪器必需仪器设备设备1.酶标仪酶标仪：必须能使用450nm波长用于检测。2.高速离心机高速离心机：必须达到10,000g离心力以上，一般迷你离心机达不到这个离心力的要求。如果离心机不能制冷，可在样本经沸水浴处理之后室温冷却15min再离心。3.37恒温培养箱（或其他可替代的恒温空气浴设备）恒温培养箱（或其他可替代的恒温空气浴设备）：必须设置温度为37，其他温度（如35）不可以使用，否则会影响检测值，同时要保证恒温箱的洁净。4.沸水浴沸水浴：一般的电磁炉或者其他可以保证沸水浴的设备皆可，但暂不推荐干浴5.漩涡混合仪漩
17、涡混合仪Bio-EnocheGM试验必需器具及耗材试验必需器具及耗材1.100L和300L多道移液器多道移液器（排枪）及配套吸头：可以减少不同孔的加样时间差。如果使用洗板机，无需用300L多道移液器。2.100L和1000L单道移液器及配套吸头3.配制洗液的量筒和保存洗液的试剂瓶4.混合板混合板：必须用厂家标配厂家标配的混合板，可以有效地缩短转移时间5.加样槽加样槽：每种试剂使用专用加样槽加样，使用后清洗干净。6.封板膜：需用户根据每盒试剂做实验次数自备一部分备用7.浮漂：沸水浴使用数据处理软件数据处理软件厂家提供的配套数据处理软件Bio-Enoche推荐耗材：推荐耗材：带锁扣的离心管：密闭性
18、强，可以有效防止沸水浴时，EP管因加热而导致盖子弹开和引入污染。也可以用普通离心管代替，但是注意离心管内液面低于管外液面3mm左右即可，以保证沸水浴时管盖不弹开。选配仪器：选配仪器：微孔板孵育/振荡器，洗板机，全自动酶免分析仪推荐设备：推荐设备：1.酶标仪：酶标仪：Bio-Tek：Elx808IU,Thermo：Multiskan FC with incubator,Tecan：sunrise RC2.洗板机：洗板机：Bio-Tek Elx50GM实验操作流程实验操作流程预处理预处理混匀，混匀，100水浴水浴3min待测样本待测样本(300L)样本处理液样本处理液(100L)+4，10000g
19、离心离心10min取上清检测取上清检测样本检测样本检测取取100L对应转移到对应转移到酶标板内酶标板内洗板后加洗板后加100L酶标抗体酶标抗体洗板后加洗板后加100L显色液显色液加加50L终终止液并读数止液并读数37,30min37,30min37,30min37,15min60L样本与一抗样本与一抗1:1混合混合混合混合转移转移加酶标抗体加酶标抗体显色显色终止终止Bio-Enoche样本采集与保存样本采集与保存样本种类样本种类采集要求采集要求离心条件离心条件保存条件保存条件血清按采血管采血标准操作流程操作（建议使用含促凝剂的BD红头采血管）3000rpm,10-15分钟原始标本2-8保存48
20、小时，血清-20以下保存一周Bio-Enoche一、试验前准备一、试验前准备产品全貌产品全貌浓缩洗液浓缩洗液20倍稀释，倍稀释，配制洗涤工作液配制洗涤工作液取出酶标板，根取出酶标板，根据需要拆分板条据需要拆分板条Bio-Enoche二、样本处理二、样本处理100L处理液处理液取取300L血清血清+Bio-Enoche二、样本处理二、样本处理1.沸水浴沸水浴3minBio-Enoche二、样本处理二、样本处理2.10,000g离心10minBio-Enoche三、样本混合三、样本混合60L样本样本+60L抗半乳甘露聚糖抗体抗半乳甘露聚糖抗体水平震荡混匀后，水平震荡混匀后，37温浴温浴30min。
21、Bio-Enoche四、样本转移四、样本转移将混合液转移至酶标板将混合液转移至酶标板贴好封板膜，贴好封板膜，37温浴温浴30min。转移时各反应孔转移时各反应孔一一对应！一一对应！Bio-Enoche五、洗涤五、洗涤3次次 先甩尽孔中液体先甩尽孔中液体然后在吸水纸上拍干然后在吸水纸上拍干Bio-Enocheb.静置静置40秒，甩尽孔中液体秒，甩尽孔中液体c.在吸水纸在吸水纸上拍干上拍干a.每次每孔加入每次每孔加入300L洗涤液洗涤液bca重复此操作重复此操作3次次（可使用洗板机完成（可使用洗板机完成）Bio-Enochea.每孔加每孔加100L酶标抗体酶标抗体b.贴好封贴好封板膜板膜c.37恒
22、温恒温30分钟分钟六、加酶标抗体六、加酶标抗体Bio-Enoche七、洗涤后显色七、洗涤后显色1.洗板洗板3次次2.加显色底物加显色底物3.加终止液并用酶标仪读取加终止液并用酶标仪读取OD450值值洗涤洗涤3次后每孔加次后每孔加100L显色底物显色底物37恒温恒温15分钟后，加入分钟后，加入终止液（终止液（50L/孔）孔）450nm波长波长下读数下读数Bio-Enoche注意事项注意事项（1）4.洗涤操作时每孔的加样量应保持一致，拍板时应确保孔内无明显液洗涤操作时每孔的加样量应保持一致，拍板时应确保孔内无明显液滴残留滴残留。1.使用移液器时排液不宜过快，防止溅出孔外，也不宜过慢，以免增大使用移
23、液器时排液不宜过快，防止溅出孔外，也不宜过慢，以免增大不同样本反应时间的差异（用户一定要使用不同样本反应时间的差异（用户一定要使用多道移液器多道移液器加样；推荐使加样；推荐使用抗原检测产品配套耗材用抗原检测产品配套耗材混合板混合板）。2.处理样品时应处理样品时应沸水浴沸水浴，否则将影响结果，否则将影响结果。3.严格按说明书要求控制孵育过程的严格按说明书要求控制孵育过程的温度及时间温度及时间，不能随意变动，不能随意变动。Bio-Enoche1.试剂、血液样本应在适当的温度下保存，并避免反复冻融。2.为了防止污染，请使用洁净无菌的吸头。3.配制洗液时要混合充分，并使用无菌去离子水或超纯水无菌去离子
24、水或超纯水。4.不能使用洗瓶洗涤酶标板。5.试剂盒组分使用前请先取出组分使用前请先取出30min，平衡至室温，平衡至室温。6.使用校验合格的移液器，移液器与吸头请契合紧密，确保移液精准。7.试剂盒中TMB底物溶液（底物溶液（R9）易氧化，尽量缩短开盖时间且避免强光）易氧化，尽量缩短开盖时间且避免强光照射照射，若溶液颜色变为浅蓝色时（正常使用时应为无色），应弃用。8.终止液具腐蚀性，易发生灼伤，在操作时请注意人身安全。9.各产品同时使用时，除浓缩洗液及终止液外，请勿将同一名称试剂互相替代使用。注意事项（注意事项（2）Bio-Enoche阴阳性判定阴阳性判定阳性：GM0.95g/L阴性：GM0.7
25、5g/L灰区：0.75GM0.95g/L，建议连续多次检测并应结合临床资料综合评价Bio-Enoche质量控制质量控制 R2a：试验OD值控制在1.00.3；R2e：试验OD值控制在0.50.2；空白对照：试验OD值控制在0.1以下。标准曲线：r20.98 如果没有达到上述指标，则影响分析的可靠性，检测结果不予报告，需重新检测。Bio-EnocheBio-Enoche第一步：整理原始数据并复制第一步：整理原始数据并复制1.将所有原始数据粘贴到EXCEL单元格内。2.选定区域后复制单元格123A0.90.6930.818B0.8280.830.821C0.7310.818D0.6090.821E
26、0.4890.799F0.9360.885G0.8990.818H0.810.693复制区域数据处理数据处理Bio-Enoche第二步：粘贴到软件的计算窗格内第二步：粘贴到软件的计算窗格内在软件初始界面直接点击“粘贴”即可。Bio-Enoche第三步：选择计算条件第三步：选择计算条件请从“请选择检测试剂盒的类别”处选择“曲霉菌半乳甘露聚糖检测试剂盒”，出现如下所示画面：Bio-Enoche第四步：拟合曲线第四步：拟合曲线 点击“回归/拟合”，得到拟合好的曲线。“直线拟合”得到的曲线如下：Bio-Enoche第五步：计算样本中的抗原浓度并第五步：计算样本中的抗原浓度并判断阴阳性判断阴阳性点击“返
27、回数据按钮”，出现如下画面：Bio-Enoche第六步：数据保存、打印第六步：数据保存、打印点击保存数据按键，出现保存成功提示，之后点击查询键，出现打印页面Bio-Enoche第八步：数据清场、退出软件第八步：数据清场、退出软件点击清空键清除数据，之后点击退出键退出软件Bio-Enoche造成GM实验假阳性假阳性的因素主要有：（1）半合成青霉素，如哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉维酸（2）与其他细菌或真菌成分交叉反应（3）肠道中定植的曲霉释放GM进入血液（4）谷物食物中存在GM（如大豆），通过受损肠粘膜进入血液（5）接受白蛋白、免疫球蛋白和其他营养液治疗（6）血液透析（7）接受心肺旁路手术（
28、8）自身免疫性肝炎等免疫性疾病（9）新生儿和儿童（FP 83%，与双歧杆菌交叉反应）52GM试验干扰因素试验干扰因素Bio-Enoche造成GM实验假阴性假阴性假阴性假阴性的因素主要有：（1）抗体多，抗原被抗体中和（2）释放入血的半乳甘露聚糖不持续，而很快被清除（3）抗真菌药物使用（如两性霉素B、三唑类药物），抑制菌丝生长从而减少GM分泌（4）局部感染，包括慢性肉芽肿（5）菌丝少，侵血管性弱（6）非粒细胞缺乏患者Bio-Enoche曲霉曲霉不同种，不同种，GM释放量不同，因此在检测结果上也释放量不同，因此在检测结果上也有有差异：差异：烟烟曲霉和黄曲霉曲霉和黄曲霉GM释放量偏释放量偏低；低；土土
29、曲霉、黑曲霉和构巢曲霉曲霉、黑曲霉和构巢曲霉GM释放量较高。释放量较高。Bio-EnocheGM试验的试验的临床应用临床应用Bio-Enoche表表1GM试验结果判断及临床意义试验结果判断及临床意义-诊断值诊断值血清（血清（cutoff）临床解释临床解释-阴性值阴性值GM 0.75g/L如果无宿主因素和临床表现可排除侵袭性曲霉菌感染如果无宿主因素和临床表现可排除侵袭性曲霉菌感染阳性值阳性值GM0.95g/L如果有宿主因素和如果有宿主因素和/或临床表现可诊断侵袭性曲霉菌感染或临床表现可诊断侵袭性曲霉菌感染，如无宿主因素和侵袭性曲霉菌感染临床症状，则不能诊断如无宿主因素和侵袭性曲霉菌感染临床症状，
30、则不能诊断灰色区间灰色区间0.75GM 0.95g/L结合临床和其他曲霉菌检查综合评判，结合临床和其他曲霉菌检查综合评判，并需动态观察并需动态观察-检测检测结果结果的的解释解释2.多数临床指南和专家认为：多数临床指南和专家认为：GM试验连续两次检验阳性才被认定为具有诊断价值。试验连续两次检验阳性才被认定为具有诊断价值。3.GM试验仅是综合评价中的指标之一试验仅是综合评价中的指标之一Bio-Enoche表表227项项GM试验诊断侵袭性曲霉病（试验诊断侵袭性曲霉病（IA）荟萃研究结果）荟萃研究结果1-研究对象研究对象敏感度敏感度特异度特异度-确诊的确诊的IA77%81%确诊或拟诊确诊或拟诊IA69
31、%93%骨髓移植患者骨髓移植患者82%86%恶性血液肿瘤患者恶性血液肿瘤患者70%92%实体器官移植患者实体器官移植患者22%84%-结论：推荐结论：推荐GM试验用于恶性血液肿瘤和骨髓移植（试验用于恶性血液肿瘤和骨髓移植（HSCT）患者）患者IA的的筛查，而不推筛查，而不推荐用于实体器官移植（荐用于实体器官移植（SOT）患者）患者IA的的筛查。筛查。1Pfoiffer CD,et al.Clin Infect Dis,2006,42:1417-1727Bio-Enoche如果将如果将G试验和试验和GM试验联合检测，有助于真菌属的鉴别试验联合检测，有助于真菌属的鉴别：表表3G试验和试验和GM试验
32、联合检测的意义试验联合检测的意义-种属种属G试验试验GM试验试验-念珠菌属念珠菌属+-镰刀菌属镰刀菌属+-隐球菌属隐球菌属-/可有假阳性可有假阳性曲霉菌属曲霉菌属+青霉素青霉素/拟青霉拟青霉+-/可有假阳性可有假阳性接合菌纲接合菌纲-Bio-Enoche文献报道文献报道1G试验和试验和GM试验联合检测可提高诊断的阳性预期值和阴性预期试验联合检测可提高诊断的阳性预期值和阴性预期值，保证诊断的可靠性值，保证诊断的可靠性（资料来源于对（资料来源于对78例病人的分析）：例病人的分析）：表表4抗原检测组合对诊断抗原检测组合对诊断IPA的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值的敏感度、特异度、阳性预测值和
33、阴性预测值-抗原检测组合抗原检测组合敏感度（敏感度（%）特异度（特异度（%）阳性预测值（阳性预测值（%）阴性预测值阴性预测值（%）-G2次次88（28/32）64（21/33）58（23/40）92（35/38）GM2次次72（23/32）91（30/33）89（32/36）78（33/42）G1次次+GM1次次84（27/32）88（29/33）87（45/52）88（23/26）-1徐金富,李惠萍,瞿介明.两种抗原联合检测对诊断侵袭性肺曲霉病的诊断价值.中华结核和呼吸杂志,2009,32(9):709-710 Bio-Enoche典型病例典型病例男性男性59岁岁因急性粒细胞白血病和肺炎住院
34、。由于诱导化疗后中性粒细胞因急性粒细胞白血病和肺炎住院。由于诱导化疗后中性粒细胞减少到减少到0.45 109/L，出现持续性高热，肺炎加重（见图，出现持续性高热，肺炎加重（见图6）。）。G试验结果：试验结果：271pg/ml，GM试验结果：试验结果：1.67（定性法，（定性法，参考范围参考范围 0.5）。肺组织活检见）。肺组织活检见图所示。确诊肺烟曲霉病。图所示。确诊肺烟曲霉病。图图5患者患者x胸片显示右肺致密阴影胸片显示右肺致密阴影图图6肺组织镜检可见烟曲霉肺组织镜检可见烟曲霉Bio-Enoche近年来近年来COPD并发侵袭性肺曲霉病（并发侵袭性肺曲霉病（IPA）病例报道逐渐）病例报道逐渐增
35、多。增多。COPD并发并发IPA原因和发病机制尚不明确。原因和发病机制尚不明确。Guinea等等1研究发现入院前研究发现入院前3个月或入院至分离出曲霉时累个月或入院至分离出曲霉时累计使用激素计使用激素 700mg强的松、入住强的松、入住ICU、慢性心衰、在入院前、慢性心衰、在入院前3个月曾接受抗生素治疗是个月曾接受抗生素治疗是COPD并发并发IPA的独立预测因素。的独立预测因素。机械通气、侵入性操作和低白蛋白血症也可能与之有关机械通气、侵入性操作和低白蛋白血症也可能与之有关2。1 Guinea J,Torres-Narbona M,Gijon P,et al.Pulmonary aspergi
36、llosis in patients with chronic obstructive pulmonary disease:incidence,risk factors,and outcome.Clin Microbiol Infect,2010,16:870-72 许虹，袁伟峰，王露霞，等。慢性阻塞性肺疾病患者曲霉感染25例。中国感染与化疗杂志2010，10:143-146Bio-Enoche研究都表明研究都表明GM试验特异性较高，而敏感度波动较大（试验特异性较高，而敏感度波动较大（29%-100%）。）。Mennink-Kersten等认为等认为1有有以下几个原因。以下几个原因。（1）曲霉
37、菌生长和抗原释放与周围环境的营养条件和）曲霉菌生长和抗原释放与周围环境的营养条件和pH有关。有关。如果营养充分，如果营养充分，pH在在7.5，真菌可持续生长并释放，真菌可持续生长并释放GM，但是，但是当炎症发展时，真菌生长受到抑制，当炎症发展时，真菌生长受到抑制，GM释放会减少。释放会减少。1Mennink-Kersten MA,Donnelly JP,Verweij PE.Detection of circulating galactomannan for the deagnosis and management of invisive aspergillosis.Lancet Infect
38、,2004,4(6):349-359Bio-Enoche（2）与单克隆关联的抗原决定簇的）与单克隆关联的抗原决定簇的暴露有关。暴露有关。单克隆抗单克隆抗体是否和抗原表面决定簇识别结合是影响方法敏感性的重体是否和抗原表面决定簇识别结合是影响方法敏感性的重要因素。因为要因素。因为GM抗原与血液中的某些物质结合遮蔽了与抗原与血液中的某些物质结合遮蔽了与抗体相结合的抗原决定簇。抗体相结合的抗原决定簇。Bio-Enoche（3）宿主的抗真菌治疗：检测前是否进行抗真菌的治疗是关）宿主的抗真菌治疗：检测前是否进行抗真菌的治疗是关系到实验灵敏性的重要因素。系到实验灵敏性的重要因素。Marr等等1对对67位患者
39、的位患者的986份血清进行分析，发现在未接受份血清进行分析，发现在未接受抗真菌治疗的患者里面抗真菌治疗的患者里面EIISA方法的敏感度可达到方法的敏感度可达到80%，而，而经抗真菌治疗患者的敏感度仅为经抗真菌治疗患者的敏感度仅为20%。1Marr KA,Balajee SA,Mcl aughlin L,et al.Detection of galactomannan antigenemia by enzyme imminoassay for the diagnosis of invasive aspergillosis:variable that affect perfomane,J Infe
40、ct Dis,2004,190(3):641-649Bio-Enoche与与Bio-Rad公司公司GM试验产品对比结果（试验产品对比结果（1）用本公司GM试验产品对Bio-Rad公司试剂盒检测出的阳性样本40例，阴性样本195例进行检测。检出阳性样本22例，疑似样本21例，阴性样本192例。与Bio-Rad公司试剂盒阳性符合率为85.0%，阴性符合率为95.3%。本公司曲霉菌半乳甘露聚糖检测试剂盒与Bio-Rad公司试剂盒阴性符合率、阳性符合率都较高；北京佑安医院北京佑安医院Bio-Enoche 我公司与Bio-Rad公司的GM试剂盒同时检测37例样本，我公司产品检出阳性标本5例，阴性标本32例。Bio-Rad公司检测，共有阳性标本4例，阴性标本33例。法国法国Bio-Rad+-TotalBio-Enoche+325-13132Total43337阳性符合率：3/4100%=75%阴性符合率=31/33100%=93.9%总符合率=34/37100%=92.9%安徽医科大学附属第一医院安徽医科大学附属第一医院与与Bio-Rad公司公司GM试验产品对比结果（试验产品对比结果（2）Bio-EnocheBio-Enoche感 谢 您 的 关 注 与 支 持公司热线电话：公司热线电话：400-811-9958文件编写人通讯方式：文件编写人通讯方式：sdwbio-