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1、关于超低温冷冻保存种质第一页，本课件共有32页种质保存种质保存是指利用天然或人工创造的适宜环境是指利用天然或人工创造的适宜环境保存种质资源，使个体中所含有的遗保存种质资源，使个体中所含有的遗传物质保持其完整性，有高的活力，传物质保持其完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。能通过繁殖将其遗传特性传递下去。第二页，本课件共有32页按保存类型分类按保存类型分类 按保存类型分类按保存类型分类可分为两种类型可分为两种类型非原生境保存非原生境保存 原生境保存原生境保存第三页，本课件共有32页亚马逊热带雨林亚马逊热带雨林第四页，本课件共有32页第五页，本课件共有32页第六页，本课件共有32页第
2、七页，本课件共有32页离体保存离体保存种植保存种植保存种子保存种子保存超低温冷冻保存超低温冷冻保存常用的种质保存方法常用的种质保存方法第八页，本课件共有32页抑抑制制外外植植体体生生长长的的离离体体保保存存方方法法n n降降低低温温度度：抑抑制制生生长长最最常常见见的的方方法法。n n降降低低环环境境中中的的氧氧含含量量：低低气气压压处处理理、低低氧氧分分压压处处理理n n使使用用生生长长延延缓缓剂剂：多多效效唑唑、矮矮壮壮素素n n其其他他方方法法：第九页，本课件共有32页种子保存种子保存优点：优点：占用空间少，保存期较长，易干占用空间少，保存期较长，易干燥，易包装和运输。燥，易包装和运输。
3、缺点：缺点：不适用于无性繁殖的植物种类，不适用于无性繁殖的植物种类，随着时间的延长，种子的生活力逐渐下随着时间的延长，种子的生活力逐渐下降，同时易受到病虫害的侵袭。降，同时易受到病虫害的侵袭。第十页，本课件共有32页种植保存种植保存w自然保护区，植物园，森林公园自然保护区，植物园，森林公园w缺点：缺点：占地多，需要大量的人力物力，费占地多，需要大量的人力物力，费用高，易受到自然灾害的影响用高，易受到自然灾害的影响第十一页，本课件共有32页离体保存离体保存w优点：优点：占用空间少，无病虫害以及自然灾害占用空间少，无病虫害以及自然灾害的影响，不受季节限制。短时间可实现大量的影响，不受季节限制。短时
4、间可实现大量植物的增殖，无病毒。植物的增殖，无病毒。w缺点：缺点：连续不断的继代培养可能会引起染色连续不断的继代培养可能会引起染色体和基因型的变异。体和基因型的变异。第十二页，本课件共有32页n种质资源超低温保存种质资源超低温保存是将植是将植物的细胞或组织经过防冻处物的细胞或组织经过防冻处理后理后,在液氮超低温在液氮超低温-196下保存的方法。下保存的方法。第十三页，本课件共有32页超低温冰箱超低温冰箱第十四页，本课件共有32页离体植物材料的超低温冰冻保存技术离体植物材料的超低温冰冻保存技术植物材料的选取植物材料的选取材料的预处理材料的预处理冰冻保护剂预处理冰冻保护剂预处理降温冷冻操作降温冷冻
5、操作化冻操作化冻操作化冻材料的活力检测化冻材料的活力检测第十五页，本课件共有32页材材料料的的选选择择n n常常用用于于离离体体超超低低温温保保存存的的常常用用植植物物材材料料l l 愈愈伤伤组组织织、悬悬浮浮细细胞胞、原原生生质质体体l l花花粉粉和和花花粉粉胚胚l l茎茎尖尖、胚胚、幼幼龄龄植植株株第十六页，本课件共有32页v材料的低温材料的低温预处理预处理材料的预处理v材料的预培养材料的预培养第十七页，本课件共有32页冰冻保护剂预处理冰冻保护剂预处理n n常用的冷冻防护剂：常用的冷冻防护剂：多为小分多为小分子中性物质，在溶液中易结合子中性物质，在溶液中易结合水分子发生水合作用，使溶液水分
6、子发生水合作用，使溶液粘性增加，弱化水的结晶过程，粘性增加，弱化水的结晶过程，达到保护的目的。达到保护的目的。第十八页，本课件共有32页 所使用的冷冻保护剂所使用的冷冻保护剂应具有以下特性：应具有以下特性：分子质量较小分子质量较小 易于与溶剂混合易于与溶剂混合 快速渗入细胞快速渗入细胞 无毒或毒性小无毒或毒性小 易洗脱易洗脱 常用的是常用的是DMSO。第十九页，本课件共有32页保保护护剂剂预预处处理理n n配配制制保保护护剂剂时时，应应该该将将其其溶溶解解在在培培养养基基里里，或或者者是是溶溶解解在在有有糖糖或或无无糖糖的的水水中中。n n保保护护剂剂应应当当缓缓慢慢加加入入。n n使使用用复
7、复合合冰冰冻冻保保护护剂剂比比单单独独使使用用更更为为有有效效。第二十页，本课件共有32页降降温温冰冰冻冻操操作作n n快快速速冷冷冻冻法法n n慢慢速速冷冷冻冻法法n n预预冷冷冻冻法法n n干干燥燥冷冷冻冻法法n n包包埋埋脱脱水水法法n n玻玻璃璃化化法法第二十一页，本课件共有32页1、快速冷冻法、快速冷冻法 指将植物材料从指将植物材料从0或者其他预处理温度直接投或者其他预处理温度直接投入液氮中保存的方法，降温速度入液氮中保存的方法，降温速度1000/min。2、慢速冷冻法、慢速冷冻法将处于将处于0或其他预处理温度的材料以或其他预处理温度的材料以12/min的降温速度从起始温度降到的降温
8、速度从起始温度降到-100，稳定，稳定1h后，后，投入到液氮保存或以此降温速度连续降温至投入到液氮保存或以此降温速度连续降温至-196的方法。的方法。第二十二页，本课件共有32页c、预冷冻法、预冷冻法 指将植物保存材料放入液氮前，需经过短暂指将植物保存材料放入液氮前，需经过短暂时间的低温锻炼的方法。时间的低温锻炼的方法。d、干燥冷冻法、干燥冷冻法 将材料置于将材料置于2729烘箱内降低植物含水量，烘箱内降低植物含水量，再投入液氮中保存的方法。再投入液氮中保存的方法。第二十三页，本课件共有32页(e包埋冻存法包埋冻存法第二十四页，本课件共有32页f玻璃化法玻璃化法n n玻璃化冻存：玻璃化冻存：采
9、用添加高浓度抗采用添加高浓度抗冻剂冻剂,使细胞内水分固化形成玻璃使细胞内水分固化形成玻璃态的超低温贮存方法态的超低温贮存方法。特点特点n n设备简单设备简单n n操作方便操作方便n n冻存效果好冻存效果好第二十五页，本课件共有32页化冻操作化冻操作wa、快速解冻法、快速解冻法w指将液氮中保存的材料直接投入到指将液氮中保存的材料直接投入到3740温水浴中进行解冻的方法。解冻的升温速度温水浴中进行解冻的方法。解冻的升温速度为为500750/min。wb、慢速解冻法、慢速解冻法w将液氮中保存的材料先置于将液氮中保存的材料先置于0低温下解冻，低温下解冻，再逐渐升至室温下进行解冻的方法。再逐渐升至室温下
10、进行解冻的方法。第二十六页，本课件共有32页化冻材料的活力检测化冻材料的活力检测检验化冻后材料的生活力和存活率的最检验化冻后材料的生活力和存活率的最根本方法是再培养。根本方法是再培养。FDA、TTC等染色的方法进行快速检测，等染色的方法进行快速检测，只能作为生活力的预测指标只能作为生活力的预测指标第二十七页，本课件共有32页第二十八页，本课件共有32页 1973年科学家首次成功地超低温保存了年科学家首次成功地超低温保存了 胡萝卜悬浮细胞。胡萝卜悬浮细胞。l l1993年，英国国家种质库采用超低温保存离体年，英国国家种质库采用超低温保存离体的苹果种质进行再培养成功。的苹果种质进行再培养成功。超低
11、温保存技术的发展超低温保存技术的发展第二十九页，本课件共有32页超低温保存种质技术的应用前景超低温保存种质技术的应用前景悬浮细胞和愈伤组织的保存悬浮细胞和愈伤组织的保存生长点冷冻保存生长点冷冻保存胚状体（体细胞胚、花粉胚）冷冻保存胚状体（体细胞胚、花粉胚）冷冻保存原生质体冷冻保存原生质体冷冻保存第三十页，本课件共有32页小结小结w生物细胞的低温冻存是防止生物种质灭绝的生物细胞的低温冻存是防止生物种质灭绝的重要途径重要途径w低温冻存技术的应用取决于冻存技术和在培低温冻存技术的应用取决于冻存技术和在培养技术的成熟程度养技术的成熟程度w根据细胞类型选择冻存和解冻方法是再培养根据细胞类型选择冻存和解冻方法是再培养成功的前提成功的前提第三十一页，本课件共有32页感谢大家观看第三十二页，本课件共有32页