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1、关于菌落总数的测定第一页，本课件共有21页一、一、菌落总数菌落总数食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。第二页，本课件共有21页二、菌落总数测定的意义二、菌落总数测定的意义1 1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。2 2、预测食品存用的期限长短。、预测食品存用的期限长短。3 3、了解细菌在食品中的繁殖动态。、了解细菌在食品中的繁殖动态。第三页，本课件共有21页三、三、设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36 1，30 1。冰箱：2 5。
2、恒温水浴箱：46 1。天平：感量为0.1 g。均质器。振荡器。无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。无菌培养皿：直径90 mm。pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。放大镜或/和菌落计数器。第四页，本课件共有21页四、平板倾注法测定菌落总数四、平板倾注法测定菌落总数检验步骤检验步骤(程序程序)：检样检样稀释处理稀释处理做平板做平板培养培养菌落菌落计数计数报告结果报告结果第五页，本课件共有21页（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板1、固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛
3、有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min10000 r/min 均质1 min2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min2 min，制成1:10 的样品匀液。第六页，本课件共有21页2、液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板第七页，本课件共有21页3、用、用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液样品匀液
4、1 mL，沿管壁缓慢注于盛有，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。的样品匀液。4、上述、上述 操作程序，制备操作程序，制备10 倍系列稀释样品倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用匀液。每递增稀释一次，换用1 次次1 mL 无无菌吸管或吸头。菌吸管或吸头。（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板第
5、八页，本课件共有21页5、根据对样品污染状况的估计，选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板第九页，本课件共有21页6、及时将15 mL20 mL 冷却至46 的平板计数琼脂培养基（可放置于46 1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平板（一）、样品的稀释及做平
6、板（一）、样品的稀释及做平板第十页，本课件共有21页1ml1ml1ml1:101:10001:1001:100001ml1ml1ml1ml加入加入46营养琼脂营养琼脂1215ml25g/ml样品生理盐水第十一页，本课件共有21页 注意：注意：检样从开始稀释到倾检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜注最后一个平皿所用时间不宜超过超过20min，以防止细菌有所，以防止细菌有所死亡或繁殖。死亡或繁殖。第十二页，本课件共有21页（二）培养（二）培养1、待琼脂凝固后，将平板翻转，、待琼脂凝固后，将平板翻转，36 1 培养培养48 h2 h。水产品。水产品30 1 培养培养72 h3 h。2、如果样
7、品中可能含有在琼脂培养基表面、如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层面覆盖一薄层3、琼脂培养基（约、琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平），凝固后翻转平板，按板，按1、条件进行培养。、条件进行培养。第十三页，本课件共有21页（三）计数和报告（三）计数和报告 到达规定培养时间，应立即到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将计数。如果不能立即计数，应将平板放置于平板放置于0 044，但不得超过，但不得超过24h24h。第十四页，本课件共有21页1、菌落的选择（1 1）、单个菌做一个菌落计）、单个菌做一个菌
8、落计（2 2）、呈链状生长的菌落之间无任何明显界）、呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，作为一个菌落计，如存在有几条不同来限，作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算。源的链，则每条链均应按一个菌落计算。（3 3）、如片状菌落不到平板一半，而另一半）、如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2 2代表全平板的菌落数。代表全平板的菌落数。第十五页，本课件共有21页2、平板菌落计数的选择、平板菌落计数的选择 （1 1）、选取菌落数在）、选取菌落数在30300之间的平之间的平板板，若有二个稀释度均在若有二个稀
9、释度均在30300之间时，之间时，比值小于或等于比值小于或等于2取平均数，比值大于取平均数，比值大于2则其较小数字。则其较小数字。第十六页，本课件共有21页（2 2）、如均大于）、如均大于300300，则取最高稀释度的平均，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告菌落数乘以稀释倍数报告（3 3）、如均小于）、如均小于3030，则以最低稀释度的平均菌，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告落数乘稀释倍数报告（4 4）、如菌落数有的大于）、如菌落数有的大于300300，有的又小于，有的又小于3030，不在，不在3030300300之间，以最接近之间，以最接近300300或或3030的平的平均菌
10、落数乘以稀释倍数报告均菌落数乘以稀释倍数报告（5 5）、如所有稀释度均无菌落生长，则应按小）、如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于于1 1乘以最低稀释倍数报告。乘以最低稀释倍数报告。第十七页，本课件共有21页3、菌落数的报告菌落数在菌落数在1100时，按实有数字报告，时，按实有数字报告，1)1)如大于如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。数按四舍五入计算。2)2)固体检样以克（固体检样以克（g)为单位报告，为单位报告，3)3)液体检样以毫升（液体检样以毫升（ml）为单位报告，）为单位报告，4)4)表面涂擦则以平方厘米（表面涂擦则以平方
11、厘米（cm2）报告。）报告。第十八页，本课件共有21页(四四)、检验注意事项、检验注意事项1、对照平板出现几个菌落时，要追加对照、对照平板出现几个菌落时，要追加对照平板；平板；2、吸管进出瓶子或试管时，吸管口不得触、吸管进出瓶子或试管时，吸管口不得触及瓶口、管口的外围部分；及瓶口、管口的外围部分；3、吸管插入试样液内的深度不得小于、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm,调整时要使管尖与容器内壁紧贴调整时要使管尖与容器内壁紧贴;4、进行稀释时、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触吸管口不得与稀释液接触;第十九页，本课件共有21页5 5、检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所、检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过用时间不宜超过20min.6 6、稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数、稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，不可作为检样计数报告的依据。不可作为检样计数报告的依据。第二十页，本课件共有21页感谢大家观看第二十一页，本课件共有21页