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1、关于红细胞血型系统及其检测第一页，本课件共有56页一、免疫学基础原理一、免疫学基础原理第二页，本课件共有56页（一）（一）抗原抗原（antigen）免疫原免疫原(immunogen(immunogen）是能够刺激机体免疫）是能够刺激机体免疫系统引起特异性免疫应答的非己物质。它可以系统引起特异性免疫应答的非己物质。它可以在体内和体外与其特异性抗体或致敏淋巴细胞在体内和体外与其特异性抗体或致敏淋巴细胞结合结合,产生免疫反应。产生免疫反应。第三页，本课件共有56页 完全抗原完全抗原（antigenantigen，completecomplete）具有免疫原性、反应原性两种性能的抗原称为完具有免疫原性
2、、反应原性两种性能的抗原称为完具有免疫原性、反应原性两种性能的抗原称为完具有免疫原性、反应原性两种性能的抗原称为完全抗原。全抗原。全抗原。全抗原。半抗原半抗原 （haptenhapten）缺乏免疫原性而只有反应原性的抗原称为半抗原。缺乏免疫原性而只有反应原性的抗原称为半抗原。第四页，本课件共有56页抗原的基本特征抗原的基本特征1 1、外源性、外源性2 2、分子量大，结构复杂、分子量大，结构复杂3、特异性、特异性 免疫原性（免疫原性（免疫原性（免疫原性（immunogenicityimmunogenicity）4、抗原性、抗原性 反应原性（反应原性（反应原性（反应原性（specificitysp
3、ecificity）第五页，本课件共有56页抗原抗体反应的特异性抗原抗体反应的特异性第六页，本课件共有56页抗原的功能抗原的功能 抗原能够刺激缺乏此物质的机体发生抗原能够刺激缺乏此物质的机体发生体液体液免疫免疫（humoral response）或）或细胞免疫细胞免疫（cell-mediated response)反应。反应。前者通过前者通过浆细胞合成抗体浆细胞合成抗体输送到血液或体液输送到血液或体液中；后者由中；后者由淋巴细胞淋巴细胞介导，出现介导，出现延迟性超过敏反延迟性超过敏反应应或或排斥移植物的生物效应。排斥移植物的生物效应。第七页，本课件共有56页影响抗原免疫原性的因素影响抗原免疫原
4、性的因素种属间的抗原性种属间的抗原性 同种间的抗原差异同种间的抗原差异 个体间的差别个体间的差别进入途径进入途径抗原分子及量的大小、抗原性的强弱及刺激频抗原分子及量的大小、抗原性的强弱及刺激频率率 第八页，本课件共有56页红细胞血型抗原红细胞血型抗原 红细胞血型抗原分布在红细胞膜的表面红细胞血型抗原分布在红细胞膜的表面红细胞血型抗原分布在红细胞膜的表面红细胞血型抗原分布在红细胞膜的表面,有不同的外有不同的外有不同的外有不同的外部形态，有或没有某一个抗原成份，形成了不同的血型。部形态，有或没有某一个抗原成份，形成了不同的血型。部形态，有或没有某一个抗原成份，形成了不同的血型。部形态，有或没有某一
5、个抗原成份，形成了不同的血型。红细胞血型抗原必须是用相应抗体检测到的红红细胞血型抗原必须是用相应抗体检测到的红细胞表面抗原，属于遗传性状。细胞表面抗原，属于遗传性状。第九页，本课件共有56页红细胞血型抗原的生化结构红细胞血型抗原的生化结构l l由结合到蛋白或脂上的由结合到蛋白或脂上的由结合到蛋白或脂上的由结合到蛋白或脂上的碳水化合物碳水化合物 carbohydrat carbohydrat 决定决定 如：如：如：如：ABO ABO、Lewis Lewis、Hh Hh、P P、Ii Ii等等等等l l由蛋白的由蛋白的氨基酸序列氨基酸序列氨基酸序列氨基酸序列决定决定决定决定 如：如：如：如：MNS
6、s、Rh、Kell、Kidd等大多数血型抗原等大多数血型抗原等大多数血型抗原等大多数血型抗原第十页，本课件共有56页l l血型系统（血型系统（blood group systemblood group system）由单一基因座位控制，或是由二个或更多的紧密连由单一基因座位控制，或是由二个或更多的紧密连由单一基因座位控制，或是由二个或更多的紧密连由单一基因座位控制，或是由二个或更多的紧密连 锁、彼此之间没有重组发生的同源基因控制锁、彼此之间没有重组发生的同源基因控制锁、彼此之间没有重组发生的同源基因控制锁、彼此之间没有重组发生的同源基因控制l l血型集合（血型集合（血型集合（血型集合（bloo
7、d group collectionblood group collection）抗原是以遗传、生化或血清学的相关性进行组合抗原是以遗传、生化或血清学的相关性进行组合抗原是以遗传、生化或血清学的相关性进行组合抗原是以遗传、生化或血清学的相关性进行组合l l高、低抗原频率组高、低抗原频率组高、低抗原频率组高、低抗原频率组 (high and low frequency antigens(high and low frequency antigens )第十一页，本课件共有56页高频抗原高频抗原高频抗原高频抗原 （high frequency antigens)为大多数人所具有的血型抗原，表示为大
8、多数人所具有的血型抗原，表示为大多数人所具有的血型抗原，表示为大多数人所具有的血型抗原，表示10001000个人个人中至少有中至少有999999人存在此抗原。人存在此抗原。人存在此抗原。人存在此抗原。低频抗原低频抗原低频抗原低频抗原 (low(low frequency antigens)为少数人所具有的血型抗原，表示为少数人所具有的血型抗原，表示为少数人所具有的血型抗原，表示为少数人所具有的血型抗原，表示 10001000个人中个人中个人中个人中最多只有最多只有最多只有最多只有1 1人有此抗原。又称为私有血型组抗原。人有此抗原。又称为私有血型组抗原。第十二页，本课件共有56页（二）红细胞血型
9、抗体（二）红细胞血型抗体(antibody)抗体是机体对外来抗原刺激所产生的一抗体是机体对外来抗原刺激所产生的一组具有免疫功能的球蛋白，即组具有免疫功能的球蛋白，即免疫球蛋白免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)。第十三页，本课件共有56页第十四页，本课件共有56页第十五页，本课件共有56页红细胞血型抗体的分类红细胞血型抗体的分类 按产生的按产生的原因原因和和条件条件大致可分为大致可分为三三类类l l天然抗体天然抗体 natural antibody l l免疫抗体免疫抗体 immune antibodyl l自身抗体自身抗体 autoantibodyl l同种抗体同种抗体 allo
10、-antibody 第十六页，本课件共有56页第十七页，本课件共有56页按照与相应红细胞是否在盐水中产生凝集l完全抗体（complete antibody）l不完全抗体（incomplete antibody）第十八页，本课件共有56页第十九页，本课件共有56页自然状态下的红细胞自然状态下的红细胞第二十页，本课件共有56页第二十一页，本课件共有56页按抗体与抗原反应的按抗体与抗原反应的最适温度最适温度，分为，分为两两种种l l冷型抗体冷型抗体 cold antibodycold antibodyl l温型抗体温型抗体 warm antibodywarm antibody第二十二页，本课件共有5
11、6页第二十三页，本课件共有56页按照抗体与相应抗原的依存关系l规则抗体l不规则抗体（意外抗体）第二十四页，本课件共有56页按免疫球蛋白的按免疫球蛋白的生物化学特性生物化学特性分为分为五五类类 IgG IgM IgA IgE IgD第二十五页，本课件共有56页IgG的四种亚类的四种亚类第二十六页，本课件共有56页 IgG和和IgM免疫球蛋白的特征免疫球蛋白的特征通过通过通过通过胎盘胎盘胎盘胎盘盐水盐水盐水盐水反应反应反应反应结合结合结合结合补体补体补体补体被被被被2-Me2-Me破坏破坏破坏破坏降低温度降低温度降低温度降低温度提高反应提高反应提高反应提高反应被血型物被血型物被血型物被血型物质中和
12、质中和质中和质中和IgGIgG能能能能不能不能不能不能能能能能难难难难否否否否难难难难IgMIgM不能不能不能不能能能能能能能能能易易易易是是是是易易易易第二十七页，本课件共有56页补体补体 complement 补体是存在于人和动物血清中的一种正补体是存在于人和动物血清中的一种正常成分，由常成分，由球蛋白球蛋白、糖糖和和磷脂磷脂结合而成，约占结合而成，约占血清球蛋白总量的血清球蛋白总量的10。它能补助各种特异性。它能补助各种特异性抗体溶解相应的细菌和细胞。抗体溶解相应的细菌和细胞。第二十八页，本课件共有56页 补体系统补体系统 complement system 补体是由补体是由20多种血清
13、蛋白成分组成的具有类多种血清蛋白成分组成的具有类似酶性质的一组复杂的血清蛋白系统。各成分均似酶性质的一组复杂的血清蛋白系统。各成分均以不活动的以不活动的酶原酶原形式存在于血清中，只有被激活形式存在于血清中，只有被激活后，把酶原变成后，把酶原变成酶酶，才能发挥其生物活性作用，才能发挥其生物活性作用，所以也叫做补体系统。所以也叫做补体系统。第二十九页，本课件共有56页补体的性质补体的性质 补体的性质是非特异性，不稳定，易被补体的性质是非特异性，不稳定，易被紫外线、机械振荡、化学药物以及加热破坏紫外线、机械振荡、化学药物以及加热破坏其活性其活性。第三十页，本课件共有56页（三）红细胞抗原抗体反应l
14、抗原抗体反应是机体防御系统功能的一部分，借以排除外来物质对机体的损害，维持机体内环境的平衡稳定，健康生存。l 不相宜的抗原抗体反应也会给机体带来严 重损害，甚至危及生命。第三十一页，本课件共有56页抗原抗体反应主要类型抗原抗体反应主要类型l l凝集反应凝集反应凝集反应凝集反应 agglutinationagglutinationl l溶血反应溶血反应 hemolysishemolysis l l沉淀反应沉淀反应 precipitationprecipitation第三十二页，本课件共有56页凝集反应的原理凝集反应的原理 是抗体分子在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭是抗体分子在相邻的红细胞表面抗
15、原决定簇之间搭是抗体分子在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭是抗体分子在相邻的红细胞表面抗原决定簇之间搭桥，使之形成肉眼可见的颗粒状凝集团块。桥，使之形成肉眼可见的颗粒状凝集团块。桥，使之形成肉眼可见的颗粒状凝集团块。桥，使之形成肉眼可见的颗粒状凝集团块。直接凝集直接凝集 direct agglutination 间接凝集间接凝集 indirect agglutination第三十三页，本课件共有56页IgM抗体造成的直接凝集抗体造成的直接凝集第三十四页，本课件共有56页第三十五页，本课件共有56页间接凝集反应的两个阶段间接凝集反应的两个阶段第一阶段第一阶段致敏阶段致敏阶段致敏阶段致敏阶段l 第
16、二阶段第二阶段第二阶段第二阶段 真凝集阶段真凝集阶段真凝集阶段真凝集阶段第三十六页，本课件共有56页IgG抗体借助抗球蛋白试剂产生的间接凝集反应抗体借助抗球蛋白试剂产生的间接凝集反应第三十七页，本课件共有56页试管中红细胞凝集强度的判断试管中红细胞凝集强度的判断第三十八页，本课件共有56页红细胞凝集反应结果的判读评分标准红细胞凝集反应结果的判读评分标准 4+14+1个凝块，背景清晰，无游离红细 3+233+23个凝块，背景清晰，无游离红细 2+2+多个小凝块，背景清晰，无游离红细多个小凝块，背景清晰，无游离红细 1+无数的小颗粒，背景混浊，有游离红细胞无数的小颗粒，背景混浊，有游离红细胞 W+
17、W+镜下较少凝集，有较多的游离红细胞镜下较少凝集，有较多的游离红细胞阴性阴性 肉眼观察不到凝集，镜下全为游离红细胞肉眼观察不到凝集，镜下全为游离红细胞第三十九页，本课件共有56页抗原抗体反应的特点l高度特异性l可逆性l比例性l两个反应阶段：致敏和凝集阶段第四十页，本课件共有56页影响红细胞凝集反应的因素影响红细胞凝集反应的因素l l抗原抗体的比例抗原抗体的比例 l l反应温度反应温度 l l溶液的溶液的pHpH值值 l l孵育时间孵育时间 l l离子强度离子强度l l红细胞间距离红细胞间距离第四十一页，本课件共有56页常用红细胞抗原和抗体鉴定试验常用红细胞抗原和抗体鉴定试验l l生理盐水法 s
18、aline agglutination testsaline agglutination testl l抗球蛋白试验抗球蛋白试验 antiglobulin test,Coombs antiglobulin test,Coombs l l蛋白水解酶试验蛋白水解酶试验 enzyme-treated cell agglutinationenzyme-treated cell agglutinationl l低离子强度试验低离子强度试验 low ionic-strength solution,LISSlow ionic-strength solution,LISSl l聚凝胺试验聚凝胺试验 polyb
19、rene technique polybrene technique l l凝胶试验凝胶试验 gel technique gel technique l l吸收放散试验 absorption elution testabsorption elution test第四十二页，本课件共有56页红细胞抗体检测什么情况下对输血患者做抗体检测？l妊娠史l输血史l近期需要多次输血患者第四十三页，本课件共有56页二、红细胞血型检测l输血前免疫学检查内容l常用的检测技术第四十四页，本课件共有56页（一）、输血前免疫血液学检验l输血前检查分为两个方面，一方面是对供血者进行的检查，另一方面是对实际 接受输血的患者
20、（受血者）进行的检查。l输血前检查的目的在于为每一名受血者选择适合的血液成分，使其有正常的存活时间，并且不引起受血者本身红细胞临床上的明显破坏第四十五页，本课件共有56页输血前检查的要求输血前检查的要求 输入的红细胞 在受血者体内必须 不凝集或不溶血输入的血浆成份 不导致受血者红细 胞的明显破坏，第四十六页，本课件共有56页输血前检查的主要程序输血前检查的主要程序受血者的病史和血样本等的检查、受血者的病史和血样本等的检查、核对核对及处理。及处理。ABOABO和和RhRh定型抗体筛选和鉴定抗体筛选和鉴定交叉配血试验标签和发血标签和发血第四十七页，本课件共有56页受血者病史和血样的检查、核对及处理
21、受血者病史和血样的检查、核对及处理 输血申请单输血申请单输血申请单输血申请单 血标本要求血标本要求血标本要求血标本要求第四十八页，本课件共有56页受血者血样本受血者血样本血液标本的要求血液标本的要求l血液标本必须经鉴定和标记，并和血液申血液标本必须经鉴定和标记，并和血液申血液标本必须经鉴定和标记，并和血液申血液标本必须经鉴定和标记，并和血液申请单上内容核对、确定请单上内容核对、确定请单上内容核对、确定请单上内容核对、确定l标本必须能代表患者的当前免疫状况标本必须能代表患者的当前免疫状况标本必须能代表患者的当前免疫状况标本必须能代表患者的当前免疫状况l防止血液标本的稀释和溶血防止血液标本的稀释和
22、溶血防止血液标本的稀释和溶血防止血液标本的稀释和溶血l输血前检查最好使用血清，也可以使用血输血前检查最好使用血清，也可以使用血输血前检查最好使用血清，也可以使用血输血前检查最好使用血清，也可以使用血浆。浆。浆。浆。l每次输血后标本至少保存每次输血后标本至少保存7天。天。天。天。第四十九页，本课件共有56页为什么输血前检查用血清比血浆更好？为什么输血前检查用血清比血浆更好？首先，有时血浆中可形成小的纤维蛋白凝块使首先，有时血浆中可形成小的纤维蛋白凝块使认读困难。其次，一些通过补体激活才能反应的抗认读困难。其次，一些通过补体激活才能反应的抗认读困难。其次，一些通过补体激活才能反应的抗认读困难。其次
23、，一些通过补体激活才能反应的抗体，用血浆不能检出。因为血浆中抗凝剂乙二胺四体，用血浆不能检出。因为血浆中抗凝剂乙二胺四体，用血浆不能检出。因为血浆中抗凝剂乙二胺四体，用血浆不能检出。因为血浆中抗凝剂乙二胺四乙酸（乙酸（EDTA）或枸橼酸盐能螯和钙并阻止补体激）或枸橼酸盐能螯和钙并阻止补体激活。活。第五十页，本课件共有56页ABO和和Rh血型定型血型定型ABOABO血型定型血型定型 供血者和受血者常规供血者和受血者常规供血者和受血者常规供血者和受血者常规ABOABO血型检测应包括正血型检测应包括正血型检测应包括正血型检测应包括正反定型两种试验，并相互验证。对于已知反定型两种试验，并相互验证。对于
24、已知反定型两种试验，并相互验证。对于已知反定型两种试验，并相互验证。对于已知ABO血血型的供血者的型的供血者的型的供血者的型的供血者的ABO ABO 血型确认或血型确认或血型确认或血型确认或6个月内的婴儿的个月内的婴儿的ABOABO定型，可以只检查红细胞定型，可以只检查红细胞定型，可以只检查红细胞定型，可以只检查红细胞第五十一页，本课件共有56页解决解决ABO正反定型结果不一致的基本方法正反定型结果不一致的基本方法欲解决被检者自身欲解决被检者自身ABO血型问题血型问题血型问题血型问题 了解被检者的年龄、诊断病症、输血史、了解被检者的年龄、诊断病症、输血史、了解被检者的年龄、诊断病症、输血史、了
25、解被检者的年龄、诊断病症、输血史、用药史、免疫球蛋白水平以及妊娠史等。这种情用药史、免疫球蛋白水平以及妊娠史等。这种情用药史、免疫球蛋白水平以及妊娠史等。这种情用药史、免疫球蛋白水平以及妊娠史等。这种情况比较复杂况比较复杂况比较复杂况比较复杂 欲解决技术问题欲解决技术问题欲解决技术问题欲解决技术问题 应洗涤红细胞应洗涤红细胞应洗涤红细胞应洗涤红细胞3 3次并配盐水悬液进行重新正反次并配盐水悬液进行重新正反次并配盐水悬液进行重新正反次并配盐水悬液进行重新正反定型试验并检查红细胞直抗定型试验并检查红细胞直抗定型试验并检查红细胞直抗定型试验并检查红细胞直抗第五十二页，本课件共有56页被检者自身被检者
26、自身被检者自身被检者自身ABOABO血型问题血型问题血型问题血型问题1 1、血清异常血清异常血清异常血清异常 2、红细胞致敏、红细胞致敏、红细胞致敏、红细胞致敏3 3、异常基因、异常基因、异常基因、异常基因 4 4、近期输血、近期输血、近期输血、近期输血5、嵌合体血型（开米粒，、嵌合体血型（开米粒，chimerismchimerism)6 6、疾病因素导致抗原减弱、疾病因素导致抗原减弱 7、红细胞多凝集现象、红细胞多凝集现象、红细胞多凝集现象、红细胞多凝集现象 8 8、获得性、获得性、获得性、获得性B B 9、血型特异性物质过高、血型特异性物质过高、血型特异性物质过高、血型特异性物质过高101
27、0、近期内进行大量血浆置换、近期内进行大量血浆置换、近期内进行大量血浆置换、近期内进行大量血浆置换11、异常的血浆蛋白、异常的血浆蛋白、异常的血浆蛋白、异常的血浆蛋白 1212、意外抗体的存在、意外抗体的存在13、低丙种球蛋白血症、低丙种球蛋白血症、低丙种球蛋白血症、低丙种球蛋白血症 1414、药物等因素、药物等因素1515、年龄因素、年龄因素、年龄因素、年龄因素 1616、防腐剂因素、防腐剂因素、防腐剂因素、防腐剂因素1717、单克隆定型试剂与人源多克隆定型血清在判读和、单克隆定型试剂与人源多克隆定型血清在判读和、单克隆定型试剂与人源多克隆定型血清在判读和、单克隆定型试剂与人源多克隆定型血清
28、在判读和 分析弱抗原时的差异分析弱抗原时的差异分析弱抗原时的差异分析弱抗原时的差异第五十三页，本课件共有56页 技术问题技术问题技术问题技术问题1 1、不干净的试管、不干净的试管2 2、血清与细胞的比例、血清与细胞的比例、血清与细胞的比例、血清与细胞的比例3 3、离心速度。、离心速度。、离心速度。、离心速度。4 4、污染的试剂和标本污染的试剂和标本污染的试剂和标本污染的试剂和标本5 5、记录结果错误、记录结果错误、记录结果错误、记录结果错误 6 6、漏加试剂。漏加试剂。漏加试剂。漏加试剂。7 7、弄错标本、弄错标本、弄错标本、弄错标本8 8、阳性溶血反应误认为阴性。、阳性溶血反应误认为阴性。、
29、阳性溶血反应误认为阴性。、阳性溶血反应误认为阴性。第五十四页，本课件共有56页Rh血型定型血型定型 主要鉴定主要鉴定主要鉴定主要鉴定D D抗原，定型时应按抗抗原，定型时应按抗抗原，定型时应按抗抗原，定型时应按抗D D血清试血清试血清试血清试剂使用说明进行，并注意有严格的对照试验，剂使用说明进行，并注意有严格的对照试验，剂使用说明进行，并注意有严格的对照试验，剂使用说明进行，并注意有严格的对照试验，包括抗原的阴性、阳性对照以及试剂对照试包括抗原的阴性、阳性对照以及试剂对照试包括抗原的阴性、阳性对照以及试剂对照试包括抗原的阴性、阳性对照以及试剂对照试验。验。验。验。第五十五页，本课件共有56页感谢大家观看第五十六页，本课件共有56页