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1、关于病毒感染的检关于病毒感染的检查方法与防治原则查方法与防治原则1第一页，本课件共有35页第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法检测内容检测内容查病毒查病毒查特异性抗体查特异性抗体查特异性抗体查特异性抗体 病毒颗粒病毒颗粒 病毒抗原病毒抗原 病毒核酸病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察电镜直接观察 光镜检查包涵体光镜检查包涵体 分离培养分离培养分离培养分离培养第二页，本课件共有35页一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，还特别注意以下原则：原则基本与细菌相似，还特别注意以下原则：n n采集急性期标本采集急性期标本n n使用抗生素：使
2、用抗生素：标本用标本用标本用标本用“双抗双抗双抗双抗”或两性霉素或两性霉素或两性霉素或两性霉素B处理处理 n n冷藏保存、快速送检冷藏保存、快速送检n n采集双份血清采集双份血清第三页，本课件共有35页二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养n n细胞培养（细胞培养（cell culture）n n鸡胚接种（鸡胚接种（egg inoculation）n n动物接种（动物接种（animal inoculation）第四页，本课件共有35页1.细胞培养细胞培养n n根据生长方式分类：根据生长方式分类：单层细胞培养（单层细胞培养（monolayer cell
3、culture）悬浮细胞培养（悬浮细胞培养（suspended cell culture）n n从细胞来源、染色体特征及传代次数分类：从细胞来源、染色体特征及传代次数分类：原代细胞（原代细胞（primary cell）二倍体细胞（二倍体细胞（diploid cell）传代细胞系（传代细胞系（continuous cell line）（一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养第六页，本课件共有35页病毒的细胞培养细胞培养瓶细胞培养瓶单层细胞单层细胞第七页，本课件共有35页1.1.细胞培养细胞培养（1）原代和次代细胞培养）原代和次代细胞培养组织组织组织组织 组织块组织块组织块组织块 分散的单个细胞分
4、散的单个细胞分散的单个细胞分散的单个细胞 单层细胞单层细胞单层细胞单层细胞 剪碎剪碎剪碎剪碎 培养基培养基培养基培养基(原代细胞原代细胞原代细胞原代细胞)单层细胞单层细胞单层细胞单层细胞(次代细胞次代细胞次代细胞次代细胞)传代培养传代培养传代培养传代培养蛋白酶蛋白酶蛋白酶蛋白酶 特点：特点：特点：特点：对多种病毒敏感对多种病毒敏感对多种病毒敏感对多种病毒敏感 生长能力有限生长能力有限生长能力有限生长能力有限,获取成本高获取成本高获取成本高获取成本高 可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒第八页，本课件共有35页（2）二倍体细胞培养）二倍体细胞培养 体外分裂体外分裂50100代
5、仍保持二倍体染色体数目，代仍保持二倍体染色体数目，可用于病毒分离和疫苗生产。可用于病毒分离和疫苗生产。特点：特点：对多种病毒敏感对多种病毒敏感 不带异种蛋白不带异种蛋白(人源性人源性)不带病毒，无致瘤潜能不带病毒，无致瘤潜能 可传可传50代左右代左右1.1.细胞培养细胞培养第九页，本课件共有35页（3）传代细胞培养传代细胞培养特点特点：对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高 繁殖能力高，传代时间长繁殖能力高，传代时间长 有致癌危险，不能用于疫苗生产有致癌危险，不能用于疫苗生产有致癌危险，不能用于疫苗生产有致癌危险，不能用于疫苗生产1.细胞培养细胞培养第十页，本课件共有35页病毒在培养细胞中增殖的
6、指征：病毒在培养细胞中增殖的指征：n n致细胞病变效应（致细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）n n红细胞吸附（红细胞吸附（hemadsorption）n n病毒干扰作用（病毒干扰作用（viral interference）n n细胞代谢改变细胞代谢改变（一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养第十一页，本课件共有35页第十二页，本课件共有35页细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落（1）致细胞病变效应（）致细胞病变效应（CPE）第十三页，本课件共有35页麻疹病毒感麻疹病毒感麻疹病毒感
7、麻疹病毒感染细胞染细胞染细胞染细胞呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒感染细胞感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞（1）致细胞病变效应（）致细胞病变效应（CPE）第十四页，本课件共有35页形成包涵体形成包涵体(inclusion body)（1）致细胞病变效应（）致细胞病变效应（CPE）第十五页，本课件共有35页腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞（2）红细胞吸附（）红细胞吸附（hemadsorption）病毒囊膜表面血凝素病毒囊膜表面血凝素(HA)红细胞表面红细胞表面HA受体受体第十六页，本课件共有35页（3）干扰现象（）干
8、扰现象（interference）风疹病毒猴肾细胞风疹病毒猴肾细胞风疹病毒猴肾细胞风疹病毒猴肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，CPECPE()埃可病毒猴肾细胞埃可病毒猴肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，CPE()猴肾细胞猴肾细胞猴肾细胞猴肾细胞风疹病毒风疹病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒被抑制，埃可病毒被抑制，埃可病毒被抑制，埃可病毒被抑制，CPE(CPE()（4）细胞代谢改变）细胞代谢改变第十七页，本课件共有35页2.鸡胚培养鸡胚培养 采用孵化采用孵化914天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜（绒毛尿囊膜（绒毛尿囊膜（绒毛尿囊膜（allantocherionallantocher
9、ion）痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（尿囊腔（allantoic cavity）接种部位接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（羊膜腔（amniotic cavity）流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离 卵黄囊（卵黄囊（卵黄囊（卵黄囊（yolk sacyolk sac）嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒 第十八页，本课件共有35页第十九页，本课件共有35页2.鸡胚培养鸡胚培养优点：优点：易管理，不带微生物，成本较低易管理，不
10、带微生物，成本较低缺点：缺点：操作程序复杂操作程序复杂第二十页，本课件共有35页第二十一页，本课件共有35页3.动物接种动物接种n n应用：应用：尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养n n动物：动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等n n优点：优点：结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型n n缺点：缺点：有饲养条件要求，费用高，动物有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒第二十二页，本课件共有35页（二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定1.形态学鉴定：形态学鉴定：电子显微镜电子显微镜2.血清学鉴定：血清学鉴定：鉴定病毒种、型、亚型，鉴定病毒种、
11、型、亚型，免疫免疫标记法、血凝抑制试验等。标记法、血凝抑制试验等。n n血凝抑制试验血凝抑制试验 正粘病毒型与亚型鉴定正粘病毒型与亚型鉴定 病毒鸡红细胞凝集病毒鸡红细胞凝集病毒鸡红细胞凝集病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）（血凝试验）病毒病毒病毒病毒特异性抗体特异性抗体特异性抗体特异性抗体鸡红细胞鸡红细胞不凝集不凝集 （血凝抑制试验）（血凝抑制试验）第二十三页，本课件共有35页（二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定3.分子生物学鉴定：分子生物学鉴定：抗原变异病毒基因的鉴定抗原变异病毒基因的鉴定n n核酸扩增核酸扩增核酸扩增核酸扩增n n核酸杂交核酸杂交n n基因芯片基因芯片n n基因测序基因测序第二十四页
12、，本课件共有35页1.血凝试验：血凝试验：病毒总量病毒总量病毒总量病毒总量（活病毒死病毒）（活病毒死病毒）2.50%组织细胞感染量（组织细胞感染量（50 tissue culture infectious dose,TCIDTCID50）测定）测定3.空斑形成试验（空斑形成试验（plaque formation test）：）：空斑形成单位（空斑形成单位（空斑形成单位（空斑形成单位（plaque formation unitplaque formation unit，PFUPFU）（三）病毒数量与感染性测定（三）病毒数量与感染性测定感染性感染性病毒量病毒量第二十五页，本课件共有35页三、病毒感
13、染的诊断三、病毒感染的诊断（一）形态学检查（一）形态学检查n n电镜和免疫电镜检查电镜和免疫电镜检查 n n普通光学显微镜检查：普通光学显微镜检查：包涵体包涵体第二十六页，本课件共有35页三、病毒感染的诊断三、病毒感染的诊断（二）病毒成分检测（二）病毒成分检测1.病毒蛋白抗原检测：病毒蛋白抗原检测：免疫标记技术免疫标记技术2.病毒核酸检测病毒核酸检测：n n核酸扩增技术、核酸扩增技术、核酸杂交技术核酸杂交技术、n n基因芯片技术、基因测序基因芯片技术、基因测序基因芯片技术、基因测序基因芯片技术、基因测序第二十七页，本课件共有35页三、病毒感染的诊断三、病毒感染的诊断（三）病毒感染的血清学诊断（
14、三）病毒感染的血清学诊断n n中和试验中和试验n n血凝抑制试验血凝抑制试验n n特异性特异性IgM抗体检测抗体检测n n其他：早期抗原的抗体检测其他：早期抗原的抗体检测第二十八页，本课件共有35页第二节第二节 病毒感染的特异性预防病毒感染的特异性预防n n生物制品：生物制品：微生物及其代谢产物、微生物及其代谢产物、动物动物免疫血清、免疫血清、免疫细胞、免疫细胞、细胞因子。细胞因子。n n防治和诊断感染性疾病。防治和诊断感染性疾病。第二十九页，本课件共有35页第二节第二节 病毒感染的特异性预防病毒感染的特异性预防一、人工主动免疫常用生物制品一、人工主动免疫常用生物制品n n灭活疫苗（灭活疫苗（
15、inactivated vaccine）n n减毒活疫苗（减毒活疫苗（attenuated vaccine）n n重组载体疫苗（重组载体疫苗（recombinant carrier vaccine）n n亚单位疫苗（亚单位疫苗（subunit vaccine）n n基因工程疫苗（基因工程疫苗（genetically engineering vaccine）n n核酸疫苗（核酸疫苗（nucleic acid vaccine）第三十页，本课件共有35页第二节第二节 病毒感染的特异性预防病毒感染的特异性预防二、人工被动免疫常用生物制品二、人工被动免疫常用生物制品n n免疫球蛋白免疫球蛋白：血清丙种球
16、蛋白：血清丙种球蛋白n n细胞免疫制剂：细胞免疫制剂：IFN-、细胞因子细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12 TNF TNF、CSF CSF 第三十一页，本课件共有35页第三节第三节 病毒感染的治疗病毒感染的治疗（一）抗病毒化学制剂（一）抗病毒化学制剂（一）抗病毒化学制剂（一）抗病毒化学制剂n n核苷类药物：阿昔洛韦、阿糖腺苷、齐多夫定（核苷类药物：阿昔洛韦、阿糖腺苷、齐多夫定（核苷类药物：阿昔洛韦、阿糖腺苷、齐多夫定（核苷类药物：阿昔洛韦、阿糖腺苷、齐多夫定（AZTAZT）n n非核苷类反转录酶抑制剂：奈韦拉平、吡啶酮非核苷类反转录酶抑制剂：奈韦拉平、吡啶酮非核苷类反转录酶抑制剂：奈韦拉
17、平、吡啶酮非核苷类反转录酶抑制剂：奈韦拉平、吡啶酮n n蛋白酶抑制剂：沙奎那韦蛋白酶抑制剂：沙奎那韦蛋白酶抑制剂：沙奎那韦蛋白酶抑制剂：沙奎那韦n n其他抗病毒药物：金刚烷胺其他抗病毒药物：金刚烷胺其他抗病毒药物：金刚烷胺其他抗病毒药物：金刚烷胺（二）干扰素和干扰素诱生剂（二）干扰素和干扰素诱生剂（三）中草药防治病毒感染（三）中草药防治病毒感染（四）新抗生素类（四）新抗生素类（五）治疗性疫苗（五）治疗性疫苗（六）治疗性抗体：帕利珠（六）治疗性抗体：帕利珠（七）基因治疗剂：（七）基因治疗剂：反义寡核苷酸、干扰反义寡核苷酸、干扰反义寡核苷酸、干扰反义寡核苷酸、干扰RNARNA、核酶、核酶、核酶、核
18、酶第三十二页，本课件共有35页思考题思考题n n分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要分离病毒的标本和作血清学诊断的标本各有何要求？求？n n常用组织培养法有几种？各有何应用？常用组织培养法有几种？各有何应用？n n病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？病毒在组织细胞中增殖的指标是什么？n n病毒性感染的快速诊断方法有哪些？病毒性感染的快速诊断方法有哪些？病毒性感染的快速诊断方法有哪些？病毒性感染的快速诊断方法有哪些？n n预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？n n诊断病毒的核酸技术有哪些？诊断病毒的核酸技术有哪些？第三十三页，本课件共有35页教学重点教学重点n n病毒的培养方法病毒的培养方法n n病毒的诊断方法病毒的诊断方法n n病毒感染的防治原则病毒感染的防治原则教学难点教学难点n n病毒感染的防治原则病毒感染的防治原则第三十四页，本课件共有35页感谢大家观看第三十五页，本课件共有35页