清洗与消毒精选课件.ppt

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1、关于清洗与消毒关于清洗与消毒第一页，本课件共有41页 清洗和消毒是否彻底直接关系清洗和消毒是否彻底直接关系到细胞培养的成败。掌握清洗、消到细胞培养的成败。掌握清洗、消毒知识，学会清洗、消毒方法是细毒知识，学会清洗、消毒方法是细胞培养工作的基本功。胞培养工作的基本功。第二页，本课件共有41页一、一、清洗清洗、清洗清洗目的：去除杂物，降低带菌量目的：去除杂物，降低带菌量、根据洗涤根据洗涤对象的不同对象的不同，主要分为：，主要分为：器皿洗涤器皿洗涤（包括玻璃、塑料、搪瓷、（包括玻璃、塑料、搪瓷、不锈钢器皿不锈钢器皿等等）培养材料洗涤培养材料洗涤第三页，本课件共有41页1 1、玻璃用品的清洗、玻璃用品

2、的清洗 在细胞培养中，工作量最大的是玻璃器皿的清洗。在细胞培养中，工作量最大的是玻璃器皿的清洗。清洗后的玻璃器皿不仅清洗后的玻璃器皿不仅要求干净透明、无油迹，要求干净透明、无油迹，而且不能残留任何物质。而且不能残留任何物质。某些化学物质仅百万分某些化学物质仅百万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。因此，玻之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。因此，玻璃器皿的清洗必须严格按照程序进行。璃器皿的清洗必须严格按照程序进行。一般玻璃器皿的清洗包括：一般玻璃器皿的清洗包括：浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。（一）、

3、器皿洗剂（一）、器皿洗剂第四页，本课件共有41页 浸泡浸泡 初初次次使使用用和和培培养养用用后后的的玻玻璃璃器器皿皿都都需需先先用用清清水水浸浸泡泡，以以使使附附着着物物软软化化或或被被溶溶掉掉。培培养养后后的的玻玻璃璃器器皿皿多多附附有有大大量量蛋蛋白白质质，用用完完后后应应立立即即初初步步刷刷洗洗，浸浸泡泡在在蒸蒸馏馏水水中中，注注意意让让水水完完全全进进入入瓶瓶皿皿中中，不不要要留留有有气气泡泡。使使用用新新的的器器皿皿应应先先用用自自来来水水简简单单刷刷洗洗，然然后后用用稀稀盐盐酸酸(5(5)浸浸泡泡过过夜夜或或煮煮沸沸3030分分钟，中和其中的碱性物质后再清洗。钟，中和其中的碱性物质

4、后再清洗。第五页，本课件共有41页 刷洗刷洗浸泡后的玻璃器皿要用浸泡后的玻璃器皿要用软毛刷软毛刷和优质洗涤和优质洗涤剂（加热）刷洗。剂（加热）刷洗。浸酸浸酸 刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸刷洗不掉的极微量杂质经过清洗液浸泡的强氧化作用可被除掉。清洗液对玻璃泡的强氧化作用可被除掉。清洗液对玻璃器皿无腐蚀作用，去污十分有效，是清洗器皿无腐蚀作用，去污十分有效，是清洗过程中关键环节。过程中关键环节。第六页，本课件共有41页酸液的配制 清洗液可根据需要，配制成不同强度：常用的有下面三种：清洗液可根据需要，配制成不同强度：常用的有下面三种：重铬酸钾重铬酸钾63g63g，浓硫酸，浓硫酸1000ml100

5、0ml，蒸馏水，蒸馏水200ml200ml 强液强液 重铬酸钾重铬酸钾120g120g，浓硫酸，浓硫酸200ml200ml，蒸馏水，蒸馏水1000ml1000ml 次强液次强液 重铬酸钾重铬酸钾l00gl00g，浓硫酸，浓硫酸l00mll00ml，蒸馏水，蒸馏水1000ml 1000ml 弱液弱液 第七页，本课件共有41页 选用耐酸塑料桶或不锈钢桶配制为宜。先将重铬酸钾溶于水（用玻璃棒搅拌助溶，有时不能完全溶解）。缓缓加入浓硫酸，切忌过急，否则将产热而发生危险(绝不可将重铬酸钾倒入浓硫酸中)。清洁液配好呈棕红色，待变绿色时表明失效。由于清洁液的腐蚀性极强，配制与应用时必须小 心，并做好防护。清

6、洁液的使用注意事项第八页，本课件共有41页 冲洗冲洗 玻玻璃璃器器皿皿浸浸酸酸后后必必须须用用流流水水充充分分冲冲洗洗，每每个个器器皿皿用用流流水水灌灌满满、倒倒掉掉，必必须须重重复复1010次次以以上上，不不留留任任何何残残迹迹。最最后后用用蒸蒸馏馏水水漂漂洗洗3 3-5 5次次，烤干备用。，烤干备用。第九页，本课件共有41页另：另：根据洗涤对象的具体情况可分为以下三种根据洗涤对象的具体情况可分为以下三种：特殊洗涤特殊洗涤微生物大量污染的洗涤微生物大量污染的洗涤常规洗涤常规洗涤第十页，本课件共有41页 常规洗涤常规洗涤 自来水洗去油渍、霉菌等脏物；自来水洗去油渍、霉菌等脏物；温肥皂水中浸泡一

7、定时间后用刷子刷净；温肥皂水中浸泡一定时间后用刷子刷净；自来水冲洗干净，至瓶壁不挂水珠为止；自来水冲洗干净，至瓶壁不挂水珠为止；蒸馏水淋洗内外壁蒸馏水淋洗内外壁 将玻璃器皿倒置：晾干或烘干（将玻璃器皿倒置：晾干或烘干（5075）放入除尘柜中备用放入除尘柜中备用第十一页，本课件共有41页 微生物大量污染的洗涤微生物大量污染的洗涤 微生物污染器皿加压灭菌后再洗涤灭菌后再洗涤特殊洗涤特殊洗涤（如（如沾有蛋白质类物质或其它有机物时)经过常规洗涤未过蒸馏水的器具，浸泡入洗液（铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成）中数分至数小时；回收洗液，器具先用自来水洗净，蒸馏水淋洗，烘

8、干（75）第十二页，本课件共有41页2 2、橡胶用品的清洗、橡胶用品的清洗 浸泡浸泡 2 2NaOHNaOH煮沸煮沸15-20 min15-20 min 自来水冲洗自来水冲洗 1 1稀盐酸稀盐酸浸泡浸泡30min30min 蒸馏水蒸馏水/2-32-3次次自来水冲洗自来水冲洗双蒸双蒸/1 1次次晾干后备用晾干后备用第十三页，本课件共有41页3 3、塑料器皿的清洗、塑料器皿的清洗 浸泡浸泡 脱脂棉脱脂棉清拭清拭/冲洗冲洗 2 2NaOHNaOH浸泡过夜浸泡过夜过夜过夜 /3 /3次次 流水冲净流水冲净 自来水冲洗自来水冲洗5 5H HCl/Cl/30min30min蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗晾干后备用晾

9、干后备用第十四页，本课件共有41页 4 4、金属器械的清洗、金属器械的清洗 新的解剖器械应先用纱布擦去油后，用洗涤新的解剖器械应先用纱布擦去油后，用洗涤剂煮沸刷洗，自来水冲洗，蒸馏水、双馏水冲剂煮沸刷洗，自来水冲洗，蒸馏水、双馏水冲洗后，烤干备用洗后，烤干备用。第十五页，本课件共有41页包包 装装 包装的目的是防止消毒灭菌后再次遭受包装的目的是防止消毒灭菌后再次遭受污染，所以经清洗烤干或晾干的器材，污染，所以经清洗烤干或晾干的器材，应严格包装后再行消毒灭菌处理。应严格包装后再行消毒灭菌处理。第十六页，本课件共有41页（二）、试验材料的清洗（二）、试验材料的清洗 清洗目的清洗目的：来自自然界的试

10、验材料，包括来自土壤中的幼茎、磷茎，滋生着各种微生物，尤其是细菌的芽孢和真菌的孢子，一旦与培养基接触，就会很快的繁殖起来，造成培养基和培养材料的污染。清洗方法清洗方法：先用自来水自来水冲洗5分钟，然后用中性洗涤剂中性洗涤剂清洗，注意勿损伤试验材料。再再用自来水用自来水流水冲洗半小时，用于下一步的药剂灭菌。第十七页，本课件共有41页二二、消毒灭菌、消毒灭菌第十八页，本课件共有41页（一）（一）关于有菌和无菌的概念关于有菌和无菌的概念 有菌的范畴：有菌的范畴：凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的，如是有菌的，如动动植物的表面、超净工作台的植物的表面、超净

11、工作台的台面，未处理的工具和手等。台面，未处理的工具和手等。第十九页，本课件共有41页 高压高温处理（工具、器皿、培养基等）高压高温处理（工具、器皿、培养基等）物理或化学处理；物理或化学处理；火烤后的物体；火烤后的物体；健康的动植物不与内外部表面接触的组织健康的动植物不与内外部表面接触的组织 内部可能是无菌的内部可能是无菌的无菌的范畴：无菌的范畴：第二十页，本课件共有41页 消毒、消毒、灭菌的对象：灭菌的对象：接种室 材料（外植体）：完全杀死材料表面的微生物过程：洗洁精酒精氯化汞等 器皿用具消毒（灭菌）培养基培养基第二十一页，本课件共有41页（二）（二）灭菌、消毒技术作用和意义灭菌、消毒技术作

12、用和意义 细胞培养中，细胞培养中，凡用于培养和无菌操作的房间、凡用于培养和无菌操作的房间、器具、培养瓶、培养基，培养材料和操作者的衣器具、培养瓶、培养基，培养材料和操作者的衣物和手都应随时进行灭菌，物和手都应随时进行灭菌，以确保不受杂菌污染以确保不受杂菌污染，否则，由于杂菌的生长繁殖速度一般都比培养的组织快否则，由于杂菌的生长繁殖速度一般都比培养的组织快得多，最终将把组织全部杀死得多，最终将把组织全部杀死，这些污染微生物还可，这些污染微生物还可能排泄对能排泄对动动植物组织有毒的代谢废物，因此在培养植物组织有毒的代谢废物，因此在培养容器内部保持一个容器内部保持一个完全无菌的环境是绝对必须完全无菌

13、的环境是绝对必须的的。第二十二页，本课件共有41页（三）灭菌、消毒（三）灭菌、消毒种类种类 化学消毒方法指使用化学药物杀灭、清除化学消毒方法指使用化学药物杀灭、清除环境中的致病性微生物及其他有害微生物，环境中的致病性微生物及其他有害微生物，或者抑制其生长、繁殖或者抑制其生长、繁殖。物理消毒法物理消毒法是指利用物理因素杀灭或消是指利用物理因素杀灭或消除病原微生物及其他有害微生物的方法。除病原微生物及其他有害微生物的方法。第二十三页，本课件共有41页1.1.物理灭菌法物理灭菌法第二十四页，本课件共有41页第二十五页，本课件共有41页第二十六页，本课件共有41页第二十七页，本课件共有41页第二十八页

14、，本课件共有41页第二十九页，本课件共有41页第三十页，本课件共有41页第三十一页，本课件共有41页 滤过除菌滤过除菌 此法适用于消毒大多数细胞培养用液，如此法适用于消毒大多数细胞培养用液，如培养液、消化液、培养液、消化液、HanksHanks液、血清以及其他不液、血清以及其他不能用高压蒸汽消毒的液体。用孔径能用高压蒸汽消毒的液体。用孔径0.220.22微米微微米微孔滤膜可除去细菌和霉菌等。孔滤膜可除去细菌和霉菌等。第三十二页，本课件共有41页 紫外线紫外线 适用于无菌室、超净工作台的消毒。适用于无菌室、超净工作台的消毒。紫外线的波长为紫外线的波长为200200-300nm300nm，最强是在

15、，最强是在254 nm254 nm，6 6-1515平方米最少一只紫外灯，高度要在平方米最少一只紫外灯，高度要在2.5m2.5m以以下，湿度下，湿度45%60%45%60%，杆菌效果好，球菌次之，霉菌、，杆菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌最差，实验前应不低于酵母菌最差，实验前应不低于3030分钟的照射时间。分钟的照射时间。优点：优点：消毒效果好，面种大，使用方便。消毒效果好，面种大，使用方便。缺点：缺点：产生臭氧、气味难闻。产生臭氧、气味难闻。第三十三页，本课件共有41页 煮沸消毒煮沸消毒 金属器械和胶塞在水中煮金属器械和胶塞在水中煮20302030分钟，趁分钟，趁热倾去水分即可使用。紧急情况

16、时使用。热倾去水分即可使用。紧急情况时使用。第三十四页，本课件共有41页2 2 化学消毒化学消毒 化学药品消毒灭菌法是应用能杀死微生物的化学药物进行消毒灭菌的方法。实验室地面、桌面、用具及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒杀菌。2%煤酚皂溶液（来苏尔）0.25%新洁尔灭 1%升汞 35%甲醛溶液 75%酒精。第三十五页，本课件共有41页第三十六页，本课件共有41页第三十七页，本课件共有41页第三十八页，本课件共有41页外植体在接种之前，须经严格的灭菌，同外植体在接种之前，须经严格的灭菌，同时又要注意时又要注意不损伤外植体不损伤外植体。不同灭菌药剂。不同灭菌药剂杀菌力不同，故在使用不同的药剂时，

17、杀菌力不同，故在使用不同的药剂时，需要考虑需要考虑使用浓度使用浓度和和处理时间处理时间，对不同植，对不同植物种类的不同外植体，处理也有不同。物种类的不同外植体，处理也有不同。另外，外植体在进入消毒剂之前，应认真取另外，外植体在进入消毒剂之前，应认真取材及清洗，尽可能地材及清洗，尽可能地减少其带菌量减少其带菌量。附加：附加：外外植体除菌注意事项：植体除菌注意事项：第三十九页，本课件共有41页消毒剂 使用浓度()消毒时间(分)效果 残液去除难易次氯酸钙 10 530 好 易次氯酸钠次氯酸钠 2 25 55 530 30 好好 易易新洁尔灭 1020 530 好 易氯化汞氯化汞 0.10.11 21 210 10 最好最好 最难最难过氧化氢 1012 515 较好 最易抗菌素 450mg/L 3060 较好 较难几种常用消毒剂的效果比较几种常用消毒剂的效果比较第四十页，本课件共有41页感谢大家观看第四十一页，本课件共有41页