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1、关于分光光度法课件第一页，本课件共有27页一、定性分析一、定性分析（一）定性鉴别 定性鉴别的依据吸收光谱的特征吸收光谱的形状吸收峰的数目吸收峰的位置（波长）吸收峰的强度相应的吸光系数第二页，本课件共有27页续前1对比吸收光谱的一致性对比吸收光谱的一致性同一测定条件下，与标准对照物谱图或标准谱图进行对照比较第三页，本课件共有27页续前2对比吸收光谱的特征值对比吸收光谱的特征值第四页，本课件共有27页续前3对比吸光度或吸光系数的比值：例：例：例：例：第五页，本课件共有27页续前（二）纯度检查和杂质限量测定1纯度检查（杂质检查）1）峰位不重叠：找找使主成分无吸收，杂质有吸收使主成分无吸收，杂质有吸收
2、直接考察杂质含量直接考察杂质含量2）峰位重叠：主成分强吸收，杂质无吸收主成分强吸收，杂质无吸收/弱吸收弱吸收与纯品比较，与纯品比较，EE 杂质强吸收杂质强吸收 主成分吸收主成分吸收与纯品比较，与纯品比较，EE，光谱变形，光谱变形第六页，本课件共有27页续前2杂质限量的测定：例：肾上腺素中微量杂质例：肾上腺素中微量杂质肾上腺酮含量计算肾上腺酮含量计算 2mg/mL-0.05mol/L 2mg/mL-0.05mol/L的的HCLHCL溶液，溶液，310nm 310nm下测定下测定 规定规定 A A3103100.05 0.05 即符合要求的杂质限量即符合要求的杂质限量0.06%0.06%第七页，本
3、课件共有27页二、定量分析二、定量分析（一）单组分的定量方法1吸光系数法 2标准曲线法 3对照法：外标一点法第八页，本课件共有27页续前1吸光系数法（绝对法）吸光系数法（绝对法）第九页，本课件共有27页练习例：维生素B12 的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207，用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.414，求该溶液的浓度（见书P201例1）解：第十页，本课件共有27页练习例：精密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？
4、（见书P61例2）解：第十一页，本课件共有27页练习例：解：第十二页，本课件共有27页续前续前2标准曲线法标准曲线法第十三页，本课件共有27页示例 芦丁含量测定0.710mg/25mL0.710mg/25mL第十四页，本课件共有27页续前3对照法：外标一点法对照法：外标一点法注：当样品溶液与标准品溶液的注：当样品溶液与标准品溶液的注：当样品溶液与标准品溶液的注：当样品溶液与标准品溶液的 稀释倍数相同时稀释倍数相同时稀释倍数相同时稀释倍数相同时第十五页，本课件共有27页练习例：维生素B12的含量测定 精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.0
5、0mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度以及标示量的百分含量（该B12注射液的标示量为100g/mL）见书P203例题解：1 1）对照法）对照法 第十六页，本课件共有27页练习2）吸光系数法 第十七页，本课件共有27页续前（二）多组分的定量方法（二）多组分的定量方法三种情况：1两组分吸收光谱不重叠两组分吸收光谱不重叠（互不干扰）两组分在各自两组分在各自max下不重叠下不重叠分别按单组分定量分别按单组分定量第十八页，本课件共有27页续前2两组分吸收光谱部分重叠两组分吸收光谱部分重叠 1测测A1b组分不干扰组
6、分不干扰可按单组分定量测可按单组分定量测Ca 2测测A2a组分干扰组分干扰不能按单组分定量测不能按单组分定量测Ca 第十九页，本课件共有27页续前3 3两组分吸收光谱完全重叠两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定混合样品测定（1）解线性方程组法）解线性方程组法（2）等吸收双波长消去法）等吸收双波长消去法（3）系数倍率法）系数倍率法第二十页，本课件共有27页1解线性方程组法解线性方程组法n n步骤：步骤：第二十一页，本课件共有27页2等吸收双波长法等吸收双波长法n n步骤：步骤：消除消除a的影响测的影响测b第二十二页，本课件共有27页续前消去消去b的影响测的影响测a 注：须满足两个基本条件注：须满足
7、两个基本条件 选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点 选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大第二十三页，本课件共有27页3系数倍率法系数倍率法前提：干扰组分前提：干扰组分b不成峰形不成峰形 无等吸收点无等吸收点第二十四页，本课件共有27页续前步骤：b曲线上任找一点1 另一点2优点：同时将待测组分和干扰组分放大信号优点：同时将待测组分和干扰组分放大信号K K倍，倍，提高了待测组分测定灵敏度提高了待测组分测定灵敏度ab 1 1 2 2第二十五页，本课件共有27页练习解：1 1取咖啡酸，在取咖啡酸，在165165干燥至恒
8、重，精密称取干燥至恒重，精密称取10.00mg10.00mg，加少量，加少量 乙醇溶解，转移至乙醇溶解，转移至200mL200mL容量瓶中，加水至刻度线，取此溶容量瓶中，加水至刻度线，取此溶 液液5.00mL5.00mL，置于，置于50mL50mL容量瓶中，加容量瓶中，加6mol/L6mol/L的的HCL 4mLHCL 4mL，加，加 水至刻度线。取此溶液于水至刻度线。取此溶液于1cm1cm比色池中，在比色池中，在323nm323nm处测定吸处测定吸 光度为光度为0.4630.463，已知该波长处的，已知该波长处的 ，求咖啡酸百分，求咖啡酸百分 含量含量（见书后（见书后P215 P215 题题1616）第二十六页，本课件共有27页感谢大家观看10.12.2022第二十七页，本课件共有27页