植物组织培养实际应用技术.ppt

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1、第第5 5章章 植物组织培养实际植物组织培养实际应用技术应用技术5.1 5.1 花卉离体繁殖技术花卉离体繁殖技术 5.1.1 5.1.1 蝴蝶兰蝴蝶兰（1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 蝴蝴蝶蝶兰兰属属于于单单茎茎性性气气生生兰兰，植植株株上上极极少少发发育育侧侧芽芽，比比其其他他种种类类的的兰兰花花更更难难进进行行常常规规无无性性繁繁殖殖。关关于于蝴蝴蝶蝶兰兰大大量量的的研研究究始始于于2020世世纪纪6060年年代代以以后后，利利用用不不同同的的外外植植体体如如茎茎尖尖、茎茎节节、叶叶片片等等均均可可通通过过诱诱导导原原球球茎进行快繁。茎进行快繁。（2）蝴蝶兰离体繁殖技术

2、蝴蝶兰离体繁殖技术 1 1）外植体的选择、消毒处理与接种）外植体的选择、消毒处理与接种 蝴蝶兰的种子、花梗侧芽、花梗节间、茎尖、蝴蝶兰的种子、花梗侧芽、花梗节间、茎尖、茎段、叶片、根尖等部位均有培养成功的报道，茎段、叶片、根尖等部位均有培养成功的报道，方法各异，难度各有高低。方法各异，难度各有高低。2 2）初代培养）初代培养 初代培基基初代培基基:B5+GA2.0mg/L+NAA0.1mg/LB5+GA2.0mg/L+NAA0.1mg/L，培养条件：培养条件：252252，接种后遮光放置，接种后遮光放置4-5d4-5d，而后每天光照，而后每天光照12h12h。3 3）继代培养）继代培养 继代培

3、养基：继代培养基：B5+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/LB5+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L中，中，培养培养4d4d后愈伤组织表面出现绿色芽点，分化后愈伤组织表面出现绿色芽点，分化成丛生芽。成丛生芽。4 4）壮苗生根培养）壮苗生根培养 生根培养基生根培养基1/2MS+IBA1.2mg/L+NAA0.05mg/L1/2MS+IBA1.2mg/L+NAA0.05mg/L中培养，中培养，10d10d后切口基部开始长出白色的根状后切口基部开始长出白色的根状突起，突起，25d25d后，每株生根后，每株生根4 4条以上，生根率可条以上，生根率可达到达到9595。5 5）驯化炼苗与

4、移栽）驯化炼苗与移栽 移栽前移栽前5d5d，将试管苗转移到驯化室，将试管苗转移到驯化室，2d2d后将封口膜打开，使幼苗完全与空气后将封口膜打开，使幼苗完全与空气接触，避免高温和强光直接照射，接触，避免高温和强光直接照射，3d3d后后即可移栽。即可移栽。移栽时洗除基部培养基后，将苗放在移栽时洗除基部培养基后，将苗放在10001000倍的多菌灵水溶液中浸泡倍的多菌灵水溶液中浸泡1-2min1-2min，插入消毒的苔藓基质中，并用薄膜覆盖插入消毒的苔藓基质中，并用薄膜覆盖保湿。保持温度保湿。保持温度2525，相对湿度，相对湿度70-8070-80，移栽成活率可达移栽成活率可达9090以上。以上。5.

5、1.2 5.1.2 百合百合（1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 百合是百合科百合属植物的统称，为百合是百合科百合属植物的统称，为多年生的草本植物。鳞茎无皮，广卵形，多年生的草本植物。鳞茎无皮，广卵形，直径直径5-8cm5-8cm，白色或黄白色，茎高，白色或黄白色，茎高30-90cm30-90cm，直立，叶多而散生，披针形，叶色从浓，直立，叶多而散生，披针形，叶色从浓绿到淡绿色，光滑。绿到淡绿色，光滑。百合一般喜微酸性土壤，土壤百合一般喜微酸性土壤，土壤pHpH值在值在最为适宜。其生长的最适温度为最为适宜。其生长的最适温度为15-2515-25，（2）百合离体繁殖技术百合离体繁

6、殖技术 1 1）外植体的选取、灭菌和接种）外植体的选取、灭菌和接种 优优选选生生长长健健壮壮、开开花花性性状状良良好好的的植植株株。在在无无菌菌条条件件下下，放放入入70%70%酒酒精精处处理理5 530s30s，再再转转入入0.1%0.1%升升汞汞溶溶液液中中5 515min15min，无无菌菌水水洗洗3 34 4次次，即可进行无菌操作切块即可进行无菌操作切块(段段)接种。接种。2 2）初代培养）初代培养 初代培基基初代培基基:MSMSBA1.0mg/LBA1.0mg/LNAA0.1mg/LNAA0.1mg/L。培养条件：培养条件：22-2522-25，10-12h10-12h，1200-3

7、000 x1200-3000 x。3 3）继代培养继代培养 将小鳞茎或不定芽转接到增殖培养基中进将小鳞茎或不定芽转接到增殖培养基中进行继代培养，继代培养基行继代培养，继代培养基MS+NAA0.3-MS+NAA0.3-0.5mg/L+BA1.0mg/L0.5mg/L+BA1.0mg/L，培养条件同上。，培养条件同上。2 2周后，周后，小鳞茎和不定芽分化出许多大小不等的鳞茎。小鳞茎和不定芽分化出许多大小不等的鳞茎。4 4）生根培养）生根培养 将生长健壮的百合鳞茎苗分成单株，去除将生长健壮的百合鳞茎苗分成单株，去除基部的愈伤组织后接种于生根培养基，生根培基部的愈伤组织后接种于生根培养基，生根培养基或

8、。待根长到养基或。待根长到1-2cm1-2cm时，即可驯化移栽。时，即可驯化移栽。5 5）驯化移栽与移栽）驯化移栽与移栽 在试管苗移栽前，放在在试管苗移栽前，放在4-104-10低温条低温条件下驯化锻炼件下驯化锻炼2-32-3周，这样移栽后的幼苗周，这样移栽后的幼苗生长更加健壮。移栽幼苗最好用消毒的腐生长更加健壮。移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的混合基质。保持移殖土或泥炭土加蛭石的混合基质。保持移栽温度栽温度20-2520-25。同时，移栽后注意湿度。同时，移栽后注意湿度管理，相对湿度控制在管理，相对湿度控制在8080-90-90。还要。还要防止烈日曝晒，后期幼苗不宜浇水过多，防止烈

9、日曝晒，后期幼苗不宜浇水过多，并及时喷洒药剂预防病虫危害。成活率可并及时喷洒药剂预防病虫危害。成活率可达到达到9090以上。以上。5.1.3 5.1.3 香石竹香石竹 （1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 香石竹即康乃馨，又名狮头石竹、麝香石竹、香石竹即康乃馨，又名狮头石竹、麝香石竹、大花石竹、大花石竹、荷兰荷兰石竹，为石竹，为石竹科石竹科、石竹属石竹属植物植物多年生多年生宿根宿根花卉。花卉。香石竹喜阴凉干燥，阳光充足与通风良好香石竹喜阴凉干燥，阳光充足与通风良好的的生态环境生态环境。耐寒性好，耐热性较差，最适生。耐寒性好，耐热性较差，最适生长温度长温度14-2114-21，温

10、度超过，温度超过2727或低于或低于1414时，时，植株生长缓慢。宜栽植于富含植株生长缓慢。宜栽植于富含腐殖质腐殖质，排水良，排水良好的好的石灰质土壤石灰质土壤。（2 2）香石竹离体快繁技术）香石竹离体快繁技术 1 1）外植体的选取、灭菌和接种）外植体的选取、灭菌和接种 选取品种优良、无病虫害、生长势强、商品选取品种优良、无病虫害、生长势强、商品性状好的优良单株作取芽植株。无菌条件下放入性状好的优良单株作取芽植株。无菌条件下放入0.1%0.1%升汞溶液中消毒升汞溶液中消毒151520min20min，取出后用无菌，取出后用无菌水中冲洗水中冲洗3 3次。无菌条件下，切取含有次。无菌条件下，切取含

11、有2 23 3对叶对叶原基、原基、0.30.30.5mm0.5mm的茎尖接种到诱导培养基上。的茎尖接种到诱导培养基上。2 2）初代培养）初代培养 初代培基初代培基:MS+BAl.0mg/L+KTl.0mg/L+NAA0.5mg/LMS+BAl.0mg/L+KTl.0mg/L+NAA0.5mg/L 培养条件：培养条件：23-2523-25，光照，光照16h/d16h/d，光强，光强2000Lx 2000Lx 3 3）继代培养）继代培养 继代培养采用丛生芽方式进行增殖，将继代培养采用丛生芽方式进行增殖，将要进行增殖扩繁的试管苗转接到要进行增殖扩繁的试管苗转接到MSMSBA BA 0.20.20.5

12、mg/L0.5mg/LNAA 0.1NAA 0.10.3mg/L0.3mg/L继代培继代培养基上进行培养。养基上进行培养。4 4）生根培养）生根培养 将将高高度度达达到到2cm2cm左左右右，生生长长正正常常的的小小芽芽切切下下，接接种种于于1/2 1/2 MSMSNAA NAA 0 01.0mg/L1.0mg/L生生根培养基中。根培养基中。5 5）驯化移栽与移栽）驯化移栽与移栽 将生根香石竹小苗经过常规清洗后，将生根香石竹小苗经过常规清洗后，放入放入800800倍倍50%50%的多菌灵或甲基托布津溶的多菌灵或甲基托布津溶液中浸泡液中浸泡2 23min3min，移栽到蛭石、河沙、，移栽到蛭石、

13、河沙、腐殖土混配的基质中。腐殖土混配的基质中。5.1.4 5.1.4 菊花菊花 （1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 多年生草本花卉，茎直立，粗壮，多分多年生草本花卉，茎直立，粗壮，多分枝，上被灰色柔毛，呈棱状，半木质化；枝，上被灰色柔毛，呈棱状，半木质化；菊花适应性强，喜凉，较耐寒，生长适菊花适应性强，喜凉，较耐寒，生长适温温18182121，喜充足阳光，稍耐阴，忌积，喜充足阳光，稍耐阴，忌积涝，喜地势高燥、土层深厚、富含腐殖质、涝，喜地势高燥、土层深厚、富含腐殖质、疏松肥沃、排水良好的砂壤土。疏松肥沃、排水良好的砂壤土。（2 2）菊花离体快繁技术）菊花离体快繁技术 1 1）

14、外植体的选取、灭菌和接种）外植体的选取、灭菌和接种 选取无病虫害、叶色浓绿的菊花叶腋间生出选取无病虫害、叶色浓绿的菊花叶腋间生出的腋芽为外植体。自来水冲洗的腋芽为外植体。自来水冲洗0.5h0.5h，7575的酒精的酒精消毒消毒30s30s，用无菌水冲洗，用无菌水冲洗3 3遍，再用遍，再用0.10.1氯化汞氯化汞溶液浸泡溶液浸泡10min10min，取出后，用无菌水漂洗，取出后，用无菌水漂洗5 5次。用次。用刀片切下茎尖（刀片切下茎尖（0.3mm0.3mm）接种到诱导培养基上。）接种到诱导培养基上。2 2）初代培养）初代培养 培养基：培养基：MS6-BAl.0mg/L+NAA0.2mg/L 培养

15、条件：培养条件：23-25，16h/d，2000Lx。3 3）继代培养）继代培养 取接种取接种3-43-4周的茎尖，转接到继代培养周的茎尖，转接到继代培养基中，经过基中，经过25-30d25-30d的培养可以分化的培养可以分化5-65-6个个不定芽。不定芽。4 4）生根培养）生根培养 当当分分化化出出的的不不定定芽芽长长达达2-3cm2-3cm时时，单单芽芽取取下下转转接接到到生生根根培培养养基基中中培培养养，15d15d左左右右开开始始长长根根，培培养养10d10d左左右右根根长长达达1-3cm,1-3cm,生生根率达根率达9595。5 5）驯化移栽与移栽）驯化移栽与移栽 将根长将根长1-2

16、cm1-2cm的菊花试管苗移入驯化的菊花试管苗移入驯化室培养室培养4-5d4-5d，打开瓶盖继续炼苗，打开瓶盖继续炼苗2-3d2-3d。移栽基质采用消毒的珍珠岩：糠灰移栽基质采用消毒的珍珠岩：糠灰=2=2：1 1。移苗后即覆盖薄膜保湿，移苗后即覆盖薄膜保湿，1 1周后逐步揭膜周后逐步揭膜通风并每天定时喷水保湿。炼苗通风并每天定时喷水保湿。炼苗2 2周后，周后，每周喷一次营养液促进小苗生长，提高每周喷一次营养液促进小苗生长，提高大田成活率。大田成活率。5.2 树木离体繁殖技术树木离体繁殖技术5.2.1 5.2.1 毛白杨毛白杨（1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 毛白杨为强阳性树

17、种。喜凉爽湿润气毛白杨为强阳性树种。喜凉爽湿润气候，在暧热多雨的气候下易受病害。对土候，在暧热多雨的气候下易受病害。对土壤要求不严，喜深厚肥沃、沙壤土，不耐壤要求不严，喜深厚肥沃、沙壤土，不耐过度干旱、瘠薄，稍耐碱。大树耐湿，耐过度干旱、瘠薄，稍耐碱。大树耐湿，耐烟尘，抗污染。烟尘，抗污染。（2 2）毛白杨的离体繁殖技术）毛白杨的离体繁殖技术 1 1）外植体的选取、灭菌和接种）外植体的选取、灭菌和接种 取当年形成的直径为取当年形成的直径为取当年形成的直径为取当年形成的直径为5mm5mm5mm5mm左右的枝条，用解剖刀切成左右的枝条，用解剖刀切成左右的枝条，用解剖刀切成左右的枝条，用解剖刀切成长

18、度为的节段，每个节带一个休眠芽。将切段先用自长度为的节段，每个节带一个休眠芽。将切段先用自长度为的节段，每个节带一个休眠芽。将切段先用自长度为的节段，每个节带一个休眠芽。将切段先用自来水冲洗干净，再用来水冲洗干净，再用来水冲洗干净，再用来水冲洗干净，再用70%70%70%70%酒精消毒约酒精消毒约酒精消毒约酒精消毒约30s30s30s30s，用无菌水冲，用无菌水冲，用无菌水冲，用无菌水冲洗一遍，然后再用洗一遍，然后再用洗一遍，然后再用洗一遍，然后再用5%5%5%5%次氯酸钠溶液消毒次氯酸钠溶液消毒次氯酸钠溶液消毒次氯酸钠溶液消毒10-15min10-15min10-15min10-15min，

19、最，最，最，最后用无菌水冲洗后用无菌水冲洗后用无菌水冲洗后用无菌水冲洗3-43-43-43-4次。次。次。次。2 2）初代培养）初代培养 预培养所用培养基的成分为预培养所用培养基的成分为预培养所用培养基的成分为预培养所用培养基的成分为MS+BA0.5mg/L+MS+BA0.5mg/L+MS+BA0.5mg/L+MS+BA0.5mg/L+水解乳蛋水解乳蛋水解乳蛋水解乳蛋白白白白100mg/L100mg/L100mg/L100mg/L，培养室温度，培养室温度，培养室温度，培养室温度25-27,25-27,25-27,25-27,日光灯连续照光，光日光灯连续照光，光日光灯连续照光，光日光灯连续照光，

20、光照度为照度为照度为照度为1000lx1000lx1000lx1000lx左右。左右。左右。左右。诱导分化的培养基诱导分化的培养基诱导分化的培养基诱导分化的培养基MS+BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L+MS+BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L+MS+BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L+MS+BA0.5mg/L+NAA0.02mg/L+赖赖赖赖氨酸氨酸氨酸氨酸100mg/L100mg/L100mg/L100mg/L上，用上，用上，用上，用2%2%2%2%果糖替代蔗糖果糖替代蔗糖果糖替代蔗糖果糖替代蔗糖 。3 3）继代生根培养）继代生根培养 继代增殖培养有两种方法。继代增

21、殖培养有两种方法。茎切段生芽扩大繁殖法茎切段生芽扩大繁殖法 将由初代培养诱导出的幼芽从基部切下，转将由初代培养诱导出的幼芽从基部切下，转接到新配制的生根培养基上。生根培养基为接到新配制的生根培养基上。生根培养基为MSMS，补加，补加IBA0.25mg/LIBA0.25mg/L，盐酸硫胺素浓度提高到，盐酸硫胺素浓度提高到10mg/L10mg/L，蔗糖浓度为，蔗糖浓度为1.5%1.5%。叶切块生芽扩大繁殖法叶切块生芽扩大繁殖法 先用茎切段法繁殖一定数量的带有先用茎切段法繁殖一定数量的带有6-76-7个叶个叶片的小植株，截取带有片的小植株，截取带有2-32-3个展开叶的顶段仍接个展开叶的顶段仍接种到

22、上述切段生根培养基上，作为以后获得叶种到上述切段生根培养基上，作为以后获得叶外植体的来源。外植体的来源。4 4）驯化移栽与移栽）驯化移栽与移栽 将生根苗移至驯化室，打开瓶口炼苗，将生根苗移至驯化室，打开瓶口炼苗，逐渐降低湿度，并逐渐增强光度，进行逐渐降低湿度，并逐渐增强光度，进行驯化，使新叶逐渐形成蜡质，产生表皮驯化，使新叶逐渐形成蜡质，产生表皮毛，逐渐恢复气孔功能，减少水分散失。毛，逐渐恢复气孔功能，减少水分散失。初始光照应为日光的初始光照应为日光的1/10,1/10,每每3d3d增加增加10%10%，经过，经过10-30d10-30d炼苗即可移入大田。湿度，炼苗即可移入大田。湿度，开始开始

23、3d3d饱和湿度，其后每饱和湿度，其后每2-3d2-3d降低降低5%-8%5%-8%，直到与大气相同。，直到与大气相同。5.2.2 5.2.2 红叶石楠红叶石楠（1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 红叶石楠是红叶石楠是蔷薇科蔷薇科石楠属石楠属杂交种的统称，为杂交种的统称，为常绿常绿小乔木小乔木，夏季转绿，秋、冬、春三季呈现，夏季转绿，秋、冬、春三季呈现红色，霜重色逾浓，低温色更佳。伞房花序顶红色，霜重色逾浓，低温色更佳。伞房花序顶生，花白色，生，花白色，梨果梨果球形，红色或褐紫色。球形，红色或褐紫色。红叶石楠生长速度快，且萌芽性强，有很强红叶石楠生长速度快，且萌芽性强，有很强的

24、的适应性适应性，耐低温，耐土壤瘠薄，有一定的耐，耐低温，耐土壤瘠薄，有一定的耐盐碱性和耐干旱能力。性喜强盐碱性和耐干旱能力。性喜强光照光照，也有很强，也有很强的耐荫能力，但在直射光照下，色彩更为鲜艳。的耐荫能力，但在直射光照下，色彩更为鲜艳。（2 2）红叶石楠离体繁殖技术）红叶石楠离体繁殖技术 1 1）外植体的选取、灭菌和接种）外植体的选取、灭菌和接种 选取红叶石楠嫩枝先端未木质化和半木质化部选取红叶石楠嫩枝先端未木质化和半木质化部分，剪成长分，剪成长10cm10cm左右的单芽，茎段部分去叶留左右的单芽，茎段部分去叶留2mm2mm左右叶柄，清洗后的外植体在超净工作台上左右叶柄，清洗后的外植体在

25、超净工作台上用用7575酒精浸泡酒精浸泡10s10s，再转入，再转入0.150.15升汞溶液中升汞溶液中灭菌灭菌8min8min，倒去灭菌液，无菌水冲洗，倒去灭菌液，无菌水冲洗4-54-5次，即次，即可将带腋芽的茎段或茎尖接种到初代培养基上。可将带腋芽的茎段或茎尖接种到初代培养基上。2 2）初代培养）初代培养 培养基：培养基：培养基：培养基：1/2MS1/2MS1/2MS1/2MSBA2.0mg/LBA2.0mg/LBA2.0mg/LBA2.0mg/LIBA0.2mg/LIBA0.2mg/LIBA0.2mg/LIBA0.2mg/L；培养条件：培养条件：培养条件：培养条件：25-3025-302

26、5-3025-30之间，之间，之间，之间，12h/d12h/d12h/d12h/d，1500-2000Lx1500-2000Lx1500-2000Lx1500-2000Lx。3 3）继代培养）继代培养 无根的试管苗经无根的试管苗经30-40d30-40d培养达到培养达到3cm3cm左左右时，即可切割以扩大繁殖。当继代苗达右时，即可切割以扩大繁殖。当继代苗达到一定数量后，可以进行生根培养。到一定数量后，可以进行生根培养。4 4）生根培养）生根培养 当当红红叶叶石石楠楠无无根根苗苗长长到到高高2cm2cm左左右右时时，可可单单株株转转接接到到生生根根培培养养基基上上培培养养。生生根根培培养养基基可

27、可用用1/2MS1/2MS，一一般般经经一一周周左左右右可可见见红色根生成，红色根生成，30-40d30-40d后根长后根长1-3cm1-3cm。5 5）驯化移栽与移栽）驯化移栽与移栽 红叶石楠组培苗炼苗可先在温度红叶石楠组培苗炼苗可先在温度20-20-3030之间的温室内拧松瓶盖放置之间的温室内拧松瓶盖放置3-5d3-5d，然后进行温床过渡移栽。移栽时，将幼然后进行温床过渡移栽。移栽时，将幼苗从瓶内取出，用清水将根部琼脂清洗苗从瓶内取出，用清水将根部琼脂清洗干净，同时应尽量减少伤根。种入苗床干净，同时应尽量减少伤根。种入苗床后，选择清洁水浇灌，移栽当天喷施后，选择清洁水浇灌，移栽当天喷施0.

28、3%0.3%的磷酸二氢钾溶液，并喷施的磷酸二氢钾溶液，并喷施800-800-10001000倍的甲基托布津或倍的甲基托布津或10001000倍多菌灵药倍多菌灵药液，以后每隔一周喷施一次，连续液，以后每隔一周喷施一次，连续3-43-4次。次。5.2.3 5.2.3 茶条槭茶条槭（1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 茶条槭为落叶灌木或小乔木，枝叶繁茶条槭为落叶灌木或小乔木，枝叶繁茂，形态优美，深秋叶变红、黄色，树茂，形态优美，深秋叶变红、黄色，树干直而洁净，花有清香，观赏价值高。干直而洁净，花有清香，观赏价值高。其适合各种土壤，在潮湿、排水良好的其适合各种土壤，在潮湿、排水良好的土

29、壤长势较好，耐干旱及碱性土壤，耐土壤长势较好，耐干旱及碱性土壤，耐寒，喜全光，耐半荫，抗烟尘，在烈日寒，喜全光，耐半荫，抗烟尘，在烈日下树皮易受灼害，病虫害较少。下树皮易受灼害，病虫害较少。（2 2）茶条槭离体繁殖技术）茶条槭离体繁殖技术 1 1）外植体的选取、灭菌和接种）外植体的选取、灭菌和接种 取当年形成的直径在取当年形成的直径在3 3以上健康无病虫害的枝以上健康无病虫害的枝条，用解剖刀切成长度为条，用解剖刀切成长度为2.02.0的节段，每个节段的节段，每个节段带有带有1-21-2个活芽。用个活芽。用5%5%的次氯酸钠溶液或用的次氯酸钠溶液或用0.1%0.1%氯氯化汞溶液进行浸泡化汞溶液进

30、行浸泡7-8min7-8min，倒掉这些消毒液，再，倒掉这些消毒液，再用无菌水冲洗用无菌水冲洗3-53-5遍。遍。2 2）初代培养）初代培养 培养基：培养基：B6+0.5mg/LKT+0.5mg/LBA+0.02mg/L B6+0.5mg/LKT+0.5mg/LBA+0.02mg/L NAA+50mg/L NAA+50mg/L 水解乳蛋白水解乳蛋白+3%+3%蔗糖蔗糖 培养条件：培养条件：25-27，16h/dh/d，1500LX1500LX左右左右。3 3）扩大繁殖）扩大繁殖 有两种繁殖方法：有两种繁殖方法：第一种是茎切段生芽扩大繁殖法第一种是茎切段生芽扩大繁殖法 ；另一种方法是叶切块生芽扩

31、大繁殖法。另一种方法是叶切块生芽扩大繁殖法。4 4）移栽与管理）移栽与管理 生根有两种方法：生根有两种方法：第一种嫩茎试管生根第一种嫩茎试管生根 ；第二种无根嫩茎的扦插第二种无根嫩茎的扦插 。5.35.3果蔬离体繁殖技术果蔬离体繁殖技术5.3.1 5.3.1 草莓草莓（1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物。草莓喜温暖湿润和较好阳光，生长的最适草莓喜温暖湿润和较好阳光，生长的最适温度为温度为15-2015-20，不耐严寒、干旱和高温。根，不耐严寒、干旱和高温。根系由新茎和根状茎上的不定根组成。根状茎系由新茎和根状茎上

32、的不定根组成。根状茎3 3年后开始死亡，以第年后开始死亡，以第2 2年产量最高，年产量最高，3 3年后降低。年后降低。草莓秋季用匍匐茎繁殖，露地和温室保护地栽草莓秋季用匍匐茎繁殖，露地和温室保护地栽培均可。培均可。（2 2）浸染草莓的常见病毒及危害）浸染草莓的常见病毒及危害 世界上的草莓病毒有世界上的草莓病毒有2020多种，我国常多种，我国常见有见有4 4种，即草莓斑驳病毒（种，即草莓斑驳病毒（SMoVSMoV），草），草莓皱缩病毒（莓皱缩病毒（SCrVSCrV），轻型黄斑病毒），轻型黄斑病毒（SMYEVSMYEV）和草莓镶脉病毒（）和草莓镶脉病毒（SVBVSVBV）(3)(3)草莓脱毒常见方

33、法草莓脱毒常见方法 1)1)热处理脱毒。热处理脱毒。2)2)微茎尖脱毒。微茎尖脱毒。3)3)花药培养脱毒。花药培养脱毒。(4)(4)草莓病毒鉴定方法草莓病毒鉴定方法 目前草莓病毒检测的主要方法是指示目前草莓病毒检测的主要方法是指示植物小叶嫁接鉴定法。植物小叶嫁接鉴定法。（5 5）草莓的离体繁殖技术）草莓的离体繁殖技术 1 1）外植体的选取、灭菌和接种）外植体的选取、灭菌和接种 下午取草莓匍匐茎上的顶芽，用自来水下午取草莓匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗流水冲洗2-4h2-4h，然后剥去外层叶片，在无，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用菌条件下，用0.5%0.5%次氯酸钠溶液表面消毒次氯酸钠溶液

34、表面消毒5min5min，并不停地搅动促进药液的渗透。在，并不停地搅动促进药液的渗透。在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有一个叶原基的茎尖为度。织，以带有一个叶原基的茎尖为度。2 2）初代培养）初代培养 培养基：培养基：MS+BA0.25+NAA0.25MS+BA0.25+NAA0.25 培养条件：培养条件：22-2522-25，光照，光照16-18h16-18h，3000lx3000lx 3 3）继代培养）继代培养 继代培养基以继代培养基以MSMS为基本培养基，附加。为基本培养基，附加。培养温度培养温度22-2522-25，日照，日照10-16

35、h10-16h，光强，光强1000-3000Lx1000-3000Lx。4 4）生根培养）生根培养 生生根根培培养养基基一一般般采采用用MSMS或或1/2MS1/2MS，培培养养基基中中加加入入或或IBA1.0 IBA1.0 mg/Lmg/L，使使发发根根整整齐齐。培培养养条条件件：温温度度20-2520-25，光光照照时时间间12h/d12h/d，光照强度，光照强度1500-2000Lx1500-2000Lx。5 5）驯化移栽与移栽）驯化移栽与移栽 用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带琼脂培养基。事先备好掉根系附带琼脂培养基。事先备好88cm88cm或或

36、66cm66cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂。栽前压实，浇透水，用竹签在土和河砂。栽前压实，浇透水，用竹签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合。幼苗基部和基质密合。5.3.2 5.3.2 葡萄葡萄（1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 葡萄为葡萄科（葡萄为葡萄科（VitaceaeVitaceae）葡萄）葡萄属（属（VitisVitis）属落叶木质藤本植物。有）属落叶木质藤本植物。有卷须茎与叶对生，单叶互生，近圆形卷须茎

37、与叶对生，单叶互生，近圆形叶或卵型，叶或卵型，3-53-5裂，基部心形。圆锥花裂，基部心形。圆锥花序。序。浆果浆果多为圆形或多为圆形或椭圆椭圆，色泽随品，色泽随品种而异，被白粉。种而异，被白粉。（2 2）葡萄离体快繁技术）葡萄离体快繁技术 1 1）外植体的选取、灭菌和接种）外植体的选取、灭菌和接种 从田间生长旺盛的葡萄新梢顶端取从田间生长旺盛的葡萄新梢顶端取从田间生长旺盛的葡萄新梢顶端取从田间生长旺盛的葡萄新梢顶端取1-21-21-21-2的茎尖。除的茎尖。除的茎尖。除的茎尖。除去幼叶后在去幼叶后在去幼叶后在去幼叶后在5%5%5%5%次氯酸钠溶液中浸泡次氯酸钠溶液中浸泡次氯酸钠溶液中浸泡次氯酸

38、钠溶液中浸泡2-3min2-3min2-3min2-3min，用无菌水冲，用无菌水冲，用无菌水冲，用无菌水冲洗洗洗洗3 3 3 3次，再在次，再在次，再在次，再在0.1%0.1%0.1%0.1%升汞溶液中浸泡约升汞溶液中浸泡约升汞溶液中浸泡约升汞溶液中浸泡约2min2min2min2min，用无菌水冲，用无菌水冲，用无菌水冲，用无菌水冲洗洗洗洗4 4 4 4次。在无菌条件下分离出约次。在无菌条件下分离出约次。在无菌条件下分离出约次。在无菌条件下分离出约2 2 2 2长的茎尖，接种到培长的茎尖，接种到培长的茎尖，接种到培长的茎尖，接种到培养基上。养基上。养基上。养基上。2 2）初代培养）初代培养

39、 培养基：培养基：培养基：培养基：以以以以MSMSMSMS培养基（无机盐减半为好），再添加，培养基（无机盐减半为好），再添加，培养基（无机盐减半为好），再添加，培养基（无机盐减半为好），再添加，NAA0.01mg/LNAA0.01mg/LNAA0.01mg/LNAA0.01mg/L，LH100mg/LLH100mg/LLH100mg/LLH100mg/L，蔗糖，蔗糖，蔗糖，蔗糖2%2%2%2%，琼脂，琼脂，琼脂，琼脂0.6%0.6%0.6%0.6%。培养条件：培养条件：培养条件：培养条件：252252252252，接种，接种，接种，接种1-21-21-21-2周暗培养，周暗培养，周暗培养，周暗

40、培养，2 2 2 2周后光照周后光照周后光照周后光照12-16h/d12-16h/d12-16h/d12-16h/d，光照强度，光照强度，光照强度，光照强度1000-3000Lx 1000-3000Lx 1000-3000Lx 1000-3000Lx 3 3）继代培养）继代培养 将初始培养产生的密集生长的芽丛，转入继将初始培养产生的密集生长的芽丛，转入继代培养基代培养基MS+BA0.5mg/L+GA30.2mg/LMS+BA0.5mg/L+GA30.2mg/L，则经，则经1 1个月个月的培养，就可长成的培养，就可长成2-32-3高的幼茎。高的幼茎。4 4）壮苗与生根培养）壮苗与生根培养 壮苗生

41、根培养基：壮苗生根培养基：中进行生根培养。中进行生根培养。培培养养条条件件:232232，16h/d16h/d，2000-3000Lx2000-3000Lx。培培养养10-15d10-15d后后幼幼苗苗开开始始生生根根，1 1个个月月形形成成完完整整的的根根系，同时具备系，同时具备5-65-6片新叶，生根率一般在片新叶，生根率一般在90%90%以上。以上。5 5）驯化移栽与移栽）驯化移栽与移栽 春夏季对试管苗进行强光照春夏季对试管苗进行强光照2500-3000 2500-3000 LxLx培养培养1 1周，打开瓶盖，自然光下炼苗周，打开瓶盖，自然光下炼苗3-7d3-7d，待叶片油量、幼茎呈淡红

42、色时，将生长，待叶片油量、幼茎呈淡红色时，将生长势强、根系粗壮的试管苗从培养瓶中取出，势强、根系粗壮的试管苗从培养瓶中取出，洗去根上的培养基，移栽到消毒蛭石基质洗去根上的培养基，移栽到消毒蛭石基质内，盖上塑料薄膜，保存相对湿度内，盖上塑料薄膜，保存相对湿度80%-90%80%-90%，最初，最初3d3d保存（保存（252252），后期保存，后期保存（25-2825-28）。经。经7-10d7-10d锻炼适应后可去掉锻炼适应后可去掉塑料薄膜，相对湿度维持塑料薄膜，相对湿度维持70%-80%70%-80%，则移栽，则移栽成活率在成活率在90%90%左右。左右。5.3.3 5.3.3 马铃薯马铃薯

43、（1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 茄科茄属多年生草本。茄科茄属多年生草本。马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻，解除休马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻，解除休眠的块茎眠的块茎44下发芽，发芽适温为下发芽，发芽适温为12-1812-18。地上。地上茎叶生长温度为茎叶生长温度为17-2117-21，2525以上时生长不良，以上时生长不良，叶变小，超过叶变小，超过3030和和77以下茎叶停止生长，以下茎叶停止生长，-11时受冻。块茎形成要求昼温时受冻。块茎形成要求昼温14-2414-24，夜温，夜温12-1412-14，土温，土温16-1816-18。结薯期要求。结薯期要求12h12

44、h左右的左右的短日照和疏松、湿润、肥活以及通气良好的土壤短日照和疏松、湿润、肥活以及通气良好的土壤条件。条件。（2 2）马铃薯病毒检测鉴定方法）马铃薯病毒检测鉴定方法 1 1）汁液鉴定法）汁液鉴定法 在马铃薯的病毒鉴定中，指示植物汁在马铃薯的病毒鉴定中，指示植物汁液鉴定法是最常用的方法，马铃薯液鉴定法是最常用的方法，马铃薯X X病毒、病毒、马铃薯马铃薯S S病毒和纺锤块茎类病毒很容易通病毒和纺锤块茎类病毒很容易通过汁液来接种。马铃薯过汁液来接种。马铃薯Y Y病毒、马铃薯病毒、马铃薯M M病病毒和马铃薯毒和马铃薯A A病毒等也可用此法来接种。病毒等也可用此法来接种。2 2）分子生物技术）分子生物

45、技术 （3 3）马铃薯的离体快繁技术）马铃薯的离体快繁技术 1 1）外植体的选取、灭菌和接种）外植体的选取、灭菌和接种 挑选新鲜的马铃薯块茎。将消毒后的材料放在挑选新鲜的马铃薯块茎。将消毒后的材料放在挑选新鲜的马铃薯块茎。将消毒后的材料放在挑选新鲜的马铃薯块茎。将消毒后的材料放在1010101040404040倍的双筒解剖镜下，用解剖针剥去外部幼叶和大的叶倍的双筒解剖镜下，用解剖针剥去外部幼叶和大的叶倍的双筒解剖镜下，用解剖针剥去外部幼叶和大的叶倍的双筒解剖镜下，用解剖针剥去外部幼叶和大的叶原基，直至露出圆亮的生长点，再用解剖刀切取原基，直至露出圆亮的生长点，再用解剖刀切取原基，直至露出圆亮的

46、生长点，再用解剖刀切取原基，直至露出圆亮的生长点，再用解剖刀切取0.10.10.10.10.3mm0.3mm0.3mm0.3mm，带有，带有，带有，带有1 1 1 12 2 2 2个叶原基的茎尖，并迅速接种到诱导个叶原基的茎尖，并迅速接种到诱导个叶原基的茎尖，并迅速接种到诱导个叶原基的茎尖，并迅速接种到诱导培养基上。培养基上。培养基上。培养基上。2 2）初代培养）初代培养 培养基培养基培养基培养基:MSMSMSMS和和和和MillerMillerMillerMiller两种基本培养基效果都很好，两种基本培养基效果都很好，两种基本培养基效果都很好，两种基本培养基效果都很好，0.1mgIAA0.1

47、mgIAA0.1mgIAA0.1mgIAA、0.1mgGA30.1mgGA30.1mgGA30.1mgGA3、pHpHpHpH值值值值5.8 5.8 5.8 5.8 培养条件：培养条件：培养条件：培养条件：温度温度温度温度21-2521-2521-2521-25、光强、光强、光强、光强3000Lx3000Lx3000Lx3000Lx、光照、光照、光照、光照16h/d16h/d16h/d16h/d。3 3）继代培养）继代培养 将脱毒苗的茎切段，每个茎段带将脱毒苗的茎切段，每个茎段带1-21-2个个叶片和腋芽，转入增殖培养基（叶片和腋芽，转入增殖培养基（MS+0.8%MS+0.8%琼脂或琼脂或MS

48、+3%MS+3%蔗糖蔗糖+4%+4%甘露甘露+0.8%+0.8%琼脂）中琼脂）中培养，每瓶接种培养，每瓶接种4-54-5个茎段。培养温度个茎段。培养温度2222，光照，光照16h/d16h/d，光照强度，光照强度1000Lx1000Lx。4 4）生根培养）生根培养 MS+IAA0.1-0.5mg/L+MS+IAA0.1-0.5mg/L+活性炭活性炭1-2000mg/L1-2000mg/L，培养，培养7-10d7-10d生根。生根。5 5）驯化移栽与移栽）驯化移栽与移栽 移植前移植前7d7d左右，将长有左右，将长有3-53-5片叶、高片叶、高2-2-3cm3cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从的

49、试管苗，在不开瓶口的状态下，从培养室移至温室排好。移植时，将装好基培养室移至温室排好。移植时，将装好基质的营养钵紧密的排放于温室内，排好后质的营养钵紧密的排放于温室内，排好后用喷壶浇透水，将经光、温锻炼好的试管用喷壶浇透水，将经光、温锻炼好的试管苗从瓶内用镊子轻轻取出，放到苗从瓶内用镊子轻轻取出，放到1515的水的水中洗去培养基，放入盛水的容器中，随时中洗去培养基，放入盛水的容器中，随时取随时扦插，防止幼苗失水。取随时扦插，防止幼苗失水。5.3.4 5.3.4 甘薯甘薯（1 1）形态特征与生物学习性）形态特征与生物学习性 甘薯为旋花科一年生植物。蔓生草本，甘薯为旋花科一年生植物。蔓生草本，长长

50、2 2米以上，平卧地面斜上。具地下块根，米以上，平卧地面斜上。具地下块根，块根纺锤形，外皮土黄色或紫红色。叶块根纺锤形，外皮土黄色或紫红色。叶互生，宽卵形，互生，宽卵形，3-53-5掌裂。聚伞花序腋生，掌裂。聚伞花序腋生，花白色至紫红色。蒴果卵形或扁圆形，花白色至紫红色。蒴果卵形或扁圆形，种子种子1-41-4。块根为淀粉原料，可食用、酿。块根为淀粉原料，可食用、酿酒或作饲料。全国广为栽培。酒或作饲料。全国广为栽培。（2 2）甘薯离体快繁技术）甘薯离体快繁技术 1 1）外植体的选取、灭菌和接种）外植体的选取、灭菌和接种 取枝条，剪去叶片后切成数段。每段带一个取枝条，剪去叶片后切成数段。每段带一个