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1、高效液相色谱法测定咖啡因第一页，本课件共有13页主主 要要 内内 容容一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验步骤三、实验步骤四、注意事项四、注意事项五、数据处理五、数据处理第二页，本课件共有13页一、实验目的一、实验目的1、学习高效液相色谱法分离咖啡因的原理。、学习高效液相色谱法分离咖啡因的原理。2、练习高效液相色谱仪的基本操作。、练习高效液相色谱仪的基本操作。3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。基本方法。第三页，本课件共有13页二、实验原理二、实验原理 咖啡中含咖啡因咖啡中含咖啡因约约1.21.8%，茶叶中含，茶叶中含
2、2.04.7%，可，可乐乐饮饮料和料和APC药药片中均含有咖啡因。片中均含有咖啡因。其分子式其分子式为为C8H10O2N4，结结构式：构式：定量定量测测定咖啡因的定咖啡因的传统传统分析方法是采用萃取分光光度法。分析方法是采用萃取分光光度法。第四页，本课件共有13页二、实验原理二、实验原理 利用混合物不同组分在利用混合物不同组分在固定相固定相固定相固定相和和流动相流动相中中分分配系数配系数(或或吸附系数吸附系数、渗透性渗透性等等)的差异，使不同的差异，使不同组分在作相对运动的两相中进行反复分配，实现组分在作相对运动的两相中进行反复分配，实现分离的分析方法。分离的分析方法。色谱法色谱法第五页，本课
3、件共有13页色谱法分类色谱法分类色谱法色谱法气体气体超临界流体超临界流体气固色谱气固色谱（GSC）气液色谱气液色谱（GLC）超临界流体色谱超临界流体色谱(SFC)胶束电动色谱胶束电动色谱（MEKC）液液色谱液液色谱（LLC）吸附色谱吸附色谱（LSC）尺寸排阻色谱尺寸排阻色谱(SEC)键合相色谱键合相色谱(BPC)离子交换色谱离子交换色谱(IEC)亲和色谱亲和色谱(AC)毛细管电色谱毛细管电色谱(CEC)液固色谱液固色谱（LSC）液体液体第六页，本课件共有13页高压泵高压泵流动相溶剂流动相溶剂废液废液色谱柱色谱柱进样口进样口检测器检测器高效液相色谱仪高效液相色谱仪第七页，本课件共有13页保留值定
4、性分析保留值定性分析第八页，本课件共有13页校准曲线法定量分析校准曲线法定量分析或或第九页，本课件共有13页三、实验步骤三、实验步骤1、溶液的配制：、溶液的配制：分别取分别取1、2、3、4、5 mL 100 g mL-1的咖啡因标准储备的咖啡因标准储备液，以超纯水稀释至液，以超纯水稀释至50 mL，即得到，即得到20、40、60、80、100 g mL-1的标准溶液。的标准溶液。2、绘制标准曲线：、绘制标准曲线：待基线平稳后，吸取系列标准溶液，分别进样分析，待基线平稳后，吸取系列标准溶液，分别进样分析，绘制标准曲线。绘制标准曲线。3、样品测定：、样品测定：吸取待测样品进样分析，根据其峰面积，依
5、据标准曲线计算吸取待测样品进样分析，根据其峰面积，依据标准曲线计算样品中咖啡因含量。样品中咖啡因含量。第十页，本课件共有13页1、流动相和样品溶液需过滤后使用。、流动相和样品溶液需过滤后使用。2、流动相还需脱气。、流动相还需脱气。3、基线平稳后才能进样分析。、基线平稳后才能进样分析。4、进样前要清洗微量进样器。、进样前要清洗微量进样器。5、实验结束后要冲洗系统和色谱柱。、实验结束后要冲洗系统和色谱柱。四、注意事项四、注意事项第十一页，本课件共有13页五、数据处理五、数据处理1、根据标准溶液色谱图进行咖啡因成分的定性；、根据标准溶液色谱图进行咖啡因成分的定性；2、绘制标准曲线并打印；、绘制标准曲线并打印；2、计算样品中咖啡因含量。、计算样品中咖啡因含量。第十二页，本课件共有13页End！第十三页，本课件共有13页