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1、原核表达系统原核表达系统原原 核核 表表 达达 系系 统统 分分 类类分分 类类 方方 式式分分 类类表达调控方式组成型，诱导型表达产物定位分泌型，不分泌型（细胞内、细胞膜、周质空间）产物纯化方式是否融合蛋白、是否一步亲和纯化产物溶解状况可溶、包含体、分泌型 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司*基因功能研究基因功能研究*重组蛋白特性研究重组蛋白特性研究*重组蛋白制备重组蛋白制备/制药制药主主 要要 用用 途途 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司NEB NEB 公公 司司 的的 IMPACT IMPACTTM T
2、M 系系 统统Intein Mediated Purification with an Affinity Chitin-binding Tag采用了最新的采用了最新的“可诱导的内含肽自身剪切可诱导的内含肽自身剪切”技术，技术，使内含肽在适当的使内含肽在适当的pH或还原条件进行自身剪切，无需或还原条件进行自身剪切，无需另外加入蛋白酶就可将目的蛋白经过一步亲和层析从另外加入蛋白酶就可将目的蛋白经过一步亲和层析从融合表达的蛋白中分离出来，大大提高了纯化效率。融合表达的蛋白中分离出来，大大提高了纯化效率。InteinCBDMCSTarget GeneChitin Binding DomainChiti
3、n-bound intein tagMultiple cloning site世界首创世界首创独家提供独家提供内内内内 含含含含 肽肽肽肽 （Intein)Intein)Intein)Intein)内含肽是一种蛋白剪切元件（内含肽是一种蛋白剪切元件（Protein splicing element),是一些读框区中打断宿主基因是一些读框区中打断宿主基因 编码区的序列。与内含子编码区的序列。与内含子(Intron)不同的是，它们是在不同的是，它们是在翻译后翻译后通过通过自身催化的蛋白剪切自身催化的蛋白剪切机制机制从蛋白前体中被剪切的。从蛋白前体中被剪切的。InBase(The Intein Da
4、tabase)NEBs web site:Technical Resource sectionIMPACT-CN IMPACT-CN 系系 统统特特 点点*操作灵活操作灵活目的蛋白可在目的蛋白可在C端或端或N端与标记融合端与标记融合*目的蛋白产物序列不变目的蛋白产物序列不变*一步亲和纯化一步亲和纯化无需另加蛋白酶除亲和标记无需另加蛋白酶除亲和标记*严谨的转录控制严谨的转录控制*目的蛋白能够进行目的蛋白能够进行C端标记端标记独家的Intein 介导的肽连接技术（IPL）IMPACT-CN IMPACT-CN 系系 统统 流流 程程IMPACT-TWIN IMPACT-TWIN 系系 统统特特 点
5、点*操作灵活操作灵活目的蛋白可在目的蛋白可在C端或端或N端与标记融合端与标记融合*目的蛋白产物序列不变目的蛋白产物序列不变*一步亲和纯化一步亲和纯化无需另加蛋白酶去除亲和标记无需另加蛋白酶去除亲和标记*可选择硫醇试剂或可选择硫醇试剂或pH和温度条件诱导和温度条件诱导Intein 自身剪切自身剪切*IPTG诱导的诱导的T7启动子，可实现高水平表达及严谨的表达调控启动子，可实现高水平表达及严谨的表达调控*唯一可直接产生带唯一可直接产生带N端端Cys 和和C端硫酯端硫酯 的蛋白的表达纯化系统的蛋白的表达纯化系统 纯化产物可方便地进行标记、连接及环化等操作纯化产物可方便地进行标记、连接及环化等操作独家
6、的Intein 介导的肽连接技术（IPL）Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司IMPACT-TWIN IMPACT-TWIN 系系 统统 流流 程程 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司Protein cyclization Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司NEB NEB 公公 司司 的的 IMPACT IMPACTTM TM 系系 统统载载 体体 选选 择择pMALpMAL蛋白融合及纯化系统蛋
7、白融合及纯化系统特特 点点*表达量高，稳定可靠表达量高，稳定可靠 经验证，75%以上的样本产量高达100mg/L*产物可分布细胞质或周质空间产物可分布细胞质或周质空间 分布周质空间可增强有二硫键的蛋白的折叠*与与MBP融合可增加表达蛋白的溶解性融合可增加表达蛋白的溶解性*温和洗脱条件温和洗脱条件 不用去垢剂及强烈变性A1:未诱导细胞未诱导细胞A2:诱导细胞诱导细胞B1:直链淀粉柱第一次纯化直链淀粉柱第一次纯化B2:Factor Xa 处理后处理后B3:直链淀粉柱第二次纯化直链淀粉柱第二次纯化pMAL-C2:无信号顺序，融无信号顺序，融合蛋白产物定位于细胞质中合蛋白产物定位于细胞质中pMAL-P
8、2:含信号顺序，融含信号顺序，融合蛋白分泌表达于细胞周质合蛋白分泌表达于细胞周质载载 体体 选选 择择PRO Bacterial Expression System Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司-CLONTECH-特特 点点*严谨调控，高水平诱导表达严谨调控，高水平诱导表达 新型的杂合启动子和操纵子，低背景，高表达，调控精确，可用于有毒或抑制生长的蛋白表达。*产物便于纯化产物便于纯化 N-端带有c-Myc 亲和标记和肠激酶位点*改造方便改造方便 载体的三个主要的功能区各配有单一酶切位点，用户可根据需要对载体进行改造。PRO Bacterial E
9、xpression System-CLONTECH-Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司PRO Bacterial Expression SystemSimultaneous,independent expression of two proteins The pPROTet.E332-lacZ and pPROLar.A222-Luc Control Vectors were simultaneously propagated in DH5PRO-CLONTECH-Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司HAT Pr
10、otein Expression&Purification System-CLONTECH-Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司特特 点点*可在中性可在中性pH条件下纯化蛋白条件下纯化蛋白 有效去除杂质*纯化可采用变性或非变性条件纯化可采用变性或非变性条件 降低蛋白酶活性，提高蛋白稳定性*提供纯化的专用树脂：提供纯化的专用树脂：TALONIMAC 钴离子高度专一地亲和HAT和其它6His蛋白，且洗脱条件温和，保证蛋白完整性*pHAT-GFPuv 载体还带有荧光标记载体还带有荧光标记 极大的方便了表达产物的检测、定位及纯化HAT Protein Expre
11、ssion&Purification System-CLONTECH-Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司QIAexpressQIAexpress以以6His6His标记和标记和 Ni-NTA Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统特特 点点*表达量高表达量高 表达产物可占总蛋白的50%*严谨调控严谨调控 IPTG诱导的T5启动子，可表达有毒蛋白*基因克隆灵活：基因克隆灵活：可选择N-端或C-端融合标记 可选择一端或两端6His标记*纯化方便：一步纯化纯化方便：一步纯化 可选择变性或不变性条件 可选择多种灵敏的检
12、测方法 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司QIAexpressQIAexpress以以6His6His标记和标记和 Ni-NTA Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司QIAexpressQIAexpress以以6His6His标记和标记和 Ni-NTA Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司QIAexpressQI
13、Aexpress以以6His6His标记和标记和 Ni-NTA Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司纯化流程QIAexpressQIAexpress以以6His6His标记和标记和 Ni-NTA Ni-NTA亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统亲和纯化为基础的完整的表达纯化系统 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司S U M M A R Y基因公司技术支持*陈芳 Gene Company Limited 基基 因因 有有 限限 公公 司司