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1、第六章第六章 化学毒物的一般毒性作用化学毒物的一般毒性作用 第一节第一节 急性毒性作用及其评价急性毒性作用及其评价 第二节第二节 蓄积毒性作用及其评价蓄积毒性作用及其评价 第三节第三节 亚慢性和慢性毒性作用及其评亚慢性和慢性毒性作用及其评 第四节第四节 联合毒性作用的评价联合毒性作用的评价 第五节第五节 局部毒性作用局部毒性作用第一节第一节 急性毒性作用及其评价急性毒性作用及其评价一、基本概念一、基本概念二、急性毒性和急性毒性试验的目的二、急性毒性和急性毒性试验的目的三、急性毒性试验设计三、急性毒性试验设计四、急性毒性评价四、急性毒性评价 一、急性毒性试验一、急性毒性试验 是指机体一次或在是指
2、机体一次或在24小时内多次接触外源化学物后在短期内小时内多次接触外源化学物后在短期内 (一般最长一般最长14天天)所产生的毒效应，包括一般行为和外观改变，所产生的毒效应，包括一般行为和外观改变，大体形态变化以及死亡效应。大体形态变化以及死亡效应。二、急性毒性试验的目的二、急性毒性试验的目的1.获得受试物对实验动物的致死剂量获得受试物对实验动物的致死剂量（LD50）及其它毒性参）及其它毒性参数数(急性毒作用带急性毒作用带Zac:acute effect zone)Zac=LD50/Limac。2.初步评价毒物对机体的毒效应特征、靶器官、剂量反应关初步评价毒物对机体的毒效应特征、靶器官、剂量反应关
3、系和对人体产生损害的危险性系和对人体产生损害的危险性。3.为亚慢性、慢性毒性试验及其他毒理学试验的剂量设计和为亚慢性、慢性毒性试验及其他毒理学试验的剂量设计和观察指标选择提供参考依据。观察指标选择提供参考依据。4.为急性中毒的治疗和中毒机制的研究提供线索。为急性中毒的治疗和中毒机制的研究提供线索。三、急性毒性试验设计三、急性毒性试验设计 (一一)试验动物试验动物选择原则：选择原则：急急性性毒毒性性试试验验要要求求选选择择对对化化学学毒毒物物的的代代谢谢和和毒毒效应表现与人的反应尽可能一致的试验动物。效应表现与人的反应尽可能一致的试验动物。动物易于获得动物易于获得品系纯化品系纯化价格较低和易于饲
4、养等条件。价格较低和易于饲养等条件。三、急性毒性试验设计三、急性毒性试验设计1 1、试验动物的种属和品系、试验动物的种属和品系最好用两种种属的动物最好用两种种属的动物啮齿类啮齿类:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔；小鼠、大鼠、豚鼠或家兔；非啮齿类：非啮齿类：狗或猴。狗或猴。急急性性皮皮肤肤毒毒性性试试验验可可选选用用成成年年大大鼠鼠、豚豚鼠鼠或或家家兔兔，优优先先考考虑虑白白色色家家兔兔。而急性吸入毒性试验和经口急性毒性试验则优先考虑大鼠。而急性吸入毒性试验和经口急性毒性试验则优先考虑大鼠。2 2、试验动物的年龄和体重、试验动物的年龄和体重：急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年动物进行试验，而
5、急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例如：大鼠且须是未曾交配和受孕的动物。例如：大鼠180180240g240g、小鼠、小鼠181825g25g、家兔家兔2 22.5kg2.5kg、豚鼠、豚鼠200200250g250g、狗、狗101015kg15kg。同一批试验动物体重变同一批试验动物体重变异范围不应超过该批动物平均体重的异范围不应超过该批动物平均体重的2020。三、急性毒性试验设计三、急性毒性试验设计3.3.试验动物的性别：试验动物的性别：急性毒性试验的主要内容是求急性毒性试验的主要内容是求LDLD5050，除特殊要求外，一般急性毒性试
6、验对动物性别要，除特殊要求外，一般急性毒性试验对动物性别要求为求为雌雄各半雌雄各半。如果在预试验时发现化学毒物。如果在预试验时发现化学毒物(如农药如农药)对雌、雄动物毒效应的敏感性对雌、雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的有明显差异，则应单独分别求出雌性与雄性动物各自的LDLD5050。如果试验是为致畸试验。如果试验是为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的作准备，也可仅作雌性动物的LDLD5050测试。对精子毒性试验仅选雄性动物。测试。对精子毒性试验仅选雄性动物。4.动物数量与随机分组：动物数量与随机分组：一般分为一般分为57组组大、小鼠等小动物大、小鼠等小动物
7、每组每组10只只狗等大动物狗等大动物 每组每组6只只分组原则分组原则随机化原则随机化原则5.5.禁食：禁食：经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食大鼠、小鼠大鼠、小鼠隔夜进食；染毒后禁食隔夜进食；染毒后禁食4h大动物大动物每日上午喂食前染毒每日上午喂食前染毒染毒后继续禁食染毒后继续禁食24h，但在禁食时要保障饮水。，但在禁食时要保障饮水。6.6.实验动物的预检：实验动物的预检：选择健康动物选择健康动物12周的检疫期周的检疫期 三、急性毒性试验设计三、急性毒性试验设计 （二）试验动物的饲养环境（二）试验动物的饲养环境恒定的温度：恒定的温度：223湿度：湿度：30
8、70%照度：昼夜各半照度：昼夜各半饲料合格、饮水合格、垫料合格饲料合格、饮水合格、垫料合格 （三）染毒途径的选择（三）染毒途径的选择:染毒途径（染毒途径（exposure routes）的选择需考虑：）的选择需考虑：模拟人在生活和生产环境中实模拟人在生活和生产环境中实 际接触受试物的途径和方式；有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较；受试际接触受试物的途径和方式；有利于不同化学物之间急性毒性大小的比较；受试物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。物的性质和用途；各种受试物毒性评价程序的要求等。最常用的染毒途径为最常用的染毒途径为:经口、经呼吸道、经皮及注射途径经口、经呼吸道、经皮及注射
9、途径。经口经口(胃肠道胃肠道)接触接触:灌胃灌胃:小鼠小鼠0.20.2 1.0ml/1.0ml/只或只或0.10.1 0.5ml/10g0.5ml/10g；大鼠一次灌胃体积不超过大鼠一次灌胃体积不超过5ml/5ml/只只 家兔不超过家兔不超过10ml/2kg10ml/2kg；狗不超过；狗不超过50ml/10kg50ml/10kg。吞咽胶囊吞咽胶囊:经呼吸道接触经呼吸道接触:静式吸入；动式吸入静式吸入；动式吸入 经皮肤接触经皮肤接触:注射途径接触注射途径接触:三、急性毒性试验设计三、急性毒性试验设计（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:1 1预试验预试验 （1)1)预试验的目的预试验的目的
10、得到受试物对实验动物以某种接触途径的1090致死剂量范围。（2)2)查阅文献查阅文献了了解解化化学学毒毒物物的的结结构构式式、分分子子量量、常常温温常常压压下下的的状状态态、熔熔点点、沸沸点点、密密度度、闪闪点点、挥挥发发度度、蒸蒸气气压压、水水溶溶性性和和脂脂溶溶性性等等理理化化特特性，生产批号及纯度，杂质成分与含量等。性，生产批号及纯度，杂质成分与含量等。确确定定使使用用哪哪一一种种计计算算方方法法求求LDLD5050，然然后后再再设设计计剂剂量量分分组组。LDLD5050的的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍思法等。计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍思法等。找出与受试化学毒物结构与理化性
11、质近似的化学物的毒性资料，找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的LDLD5050(LC(LC5050)值作为受试化学物的预期毒性中值。值作为受试化学物的预期毒性中值。三、急性毒性试验设计三、急性毒性试验设计（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:(2)(2)预试验的剂量设计预试验的剂量设计 等等比比剂剂量量设设计计（已已知知LDLD5050剂剂量量，并并在在该该剂剂量量的的上上下下各各设计设计l l一一2 2个剂量组作为预试验剂量。）个剂量组作为预试验剂量。）3x33x3法法
12、：取取9 9只只动动物物，分分为为3 3组组，每每组组3 3只只，以以三三种种不不同同剂剂量量处处理理，组组距距拉拉大大一一些些。（对对于于无无资资料料可可参参考考的的受受试试物，为节省动物。）物，为节省动物。）序序贯贯法法:将将动动物物一一只只一一只只序序贯贯进进行行。（对对于于无无资资料料可可参考的受试物，为节省动物。）参考的受试物，为节省动物。）三、急性毒性试验设计三、急性毒性试验设计（四）染毒剂量与分组（四）染毒剂量与分组:2 2正式试验正式试验;（1 1）根据预试验的死亡资料确定正式实验组距和公比：可根）根据预试验的死亡资料确定正式实验组距和公比：可根据以下公式计算出剂量分组：据以下
13、公式计算出剂量分组：i=(lgLDi=(lgLD9090-lgLD-lgLD1010)(n-1)(n-1)或或i=(lgLDi=(lgLD100100-lgLD-lgLD0 0)(n-1)(n-1)；式中；式中i i为组距为组距(相邻的两个剂量组相邻的两个剂量组对数剂量之差对数剂量之差)；n n为设计的剂量组数。正式实验组的公比：为设计的剂量组数。正式实验组的公比：r=lgr=lg1 1（lgb-lga)/n-1lgb-lga)/n-1或或 公式中，公式中，b b为最高剂量，为最高剂量，a a为最低剂为最低剂量，量，n n为试验动物组。为试验动物组。（2 2）正式试验剂量分组公比）正式试验剂量
14、分组公比r r和组距和组距i i确定后，进行正式试验确定后，进行正式试验分组。第一组剂量为分组。第一组剂量为a a，第二组为，第二组为arar，第三组为，第三组为arar2 2nn组为组为ararn-1 n-1。3.3.试验设计和试验设计和LDLD5050计算：计算：试验设计和试验设计和LDLD5050计算的方法有多种，计算的方法有多种，重点介绍最常用的四种方法。即改良寇氏法、霍恩氏法、威重点介绍最常用的四种方法。即改良寇氏法、霍恩氏法、威尔氏法和概率单位法。尔氏法和概率单位法。三、急性毒性试验设计三、急性毒性试验设计（五）试验周期（五）试验周期 一般为一般为2为宜为宜（六）毒效应观察（六）毒
15、效应观察1.中毒症状中毒症状2.体重体重在观察试验动物中毒症状的过程中，应同时观察体重的变化。在观察试验动物中毒症状的过程中，应同时观察体重的变化。体体重可以反映动物中毒后的整体变化。重可以反映动物中毒后的整体变化。体重改变的原因很多，若化体重改变的原因很多，若化学毒物刺激或损伤消化道可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表学毒物刺激或损伤消化道可出现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，现为体重减轻。若化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，体重也会减轻。如果化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损伤，体重也会减轻。如果化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损伤，
16、也可能在体重上反映出来。所以，对存活动物尤其是对低于也可能在体重上反映出来。所以，对存活动物尤其是对低于LDLD5050剂量组的存活动物，应在观察期剂量组的存活动物，应在观察期1414天内称量其体重的变化，以便天内称量其体重的变化，以便了解受试物引起毒效应的持续时间。了解受试物引起毒效应的持续时间。3.病理检查及其他指标病理检查及其他指标:急性毒性试验中，对死亡的动物均应及时进行大体解剖和病理组急性毒性试验中，对死亡的动物均应及时进行大体解剖和病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏器大小、外织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无充血、出血、水
17、肿或其它改变，对有改变观、色泽的变化，有无充血、出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做组织病理学检查。对存活动物在观察期结束时的脏器进行取材做组织病理学检查。对存活动物在观察期结束时进行大体病理检查。必要时做组织病理学检查。根据试验需要可进行大体病理检查。必要时做组织病理学检查。根据试验需要可进一步扩大观察项目如体温、心电图、脑电图或进行某些生化进一步扩大观察项目如体温、心电图、脑电图或进行某些生化指标测定等。指标测定等。4.死亡和死亡时间死亡和死亡时间重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是最早出现死亡的时重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是最早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的
18、死亡数。分析中毒死亡时间的规律具有间以及各个剂量组动物的死亡数。分析中毒死亡时间的规律具有一定意义，可为深入研究化学物的毒作用机制提供参考。一定意义，可为深入研究化学物的毒作用机制提供参考。三、急性毒性试验设计三、急性毒性试验设计(七七)经典急性毒性试验的局限性经典急性毒性试验的局限性1.消耗的动物量大消耗的动物量大2.获得的信息有限获得的信息有限3.测得的测得的LD50仅仅是一个近似值仅仅是一个近似值4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的症状观察是不够的，更需要的是生单的症状观察是不够的，更需要的是生理学、血液学及其它化验检查所提供的理学、血液学及其它化验检
19、查所提供的深入细致的毒性信息。深入细致的毒性信息。四、急性毒性评价四、急性毒性评价外源化学物急性毒性分级（外源化学物急性毒性分级（WHO）毒性分级毒性分级大鼠一次经口大鼠一次经口LD50 (mg/kg)6只大鼠吸入只大鼠吸入4小时，死小时，死亡亡24只的浓度只的浓度(ppm)兔经皮兔经皮LD50(/mg/kg)对人可能致死的估计量对人可能致死的估计量g/kg总量总量(g/60kg)剧毒剧毒1105151000四、急性毒性评价四、急性毒性评价我国食品毒理急性毒性分级法我国食品毒理急性毒性分级法(1994)急性毒性分级急性毒性分级大鼠经口大鼠经口LD50(mg/kg)大致相当于大致相当于70kg人
20、的致死量人的致死量6级级(极毒极毒)1稍尝稍尝,150001050克克一、一、基本概念基本概念二二、蓄积毒性试验方法及其评价蓄积毒性试验方法及其评价 第二节第二节 蓄积毒性作用及其评价蓄积毒性作用及其评价 化学毒物进入机体后，经过生物转化以代谢产物或化学物化学毒物进入机体后，经过生物转化以代谢产物或化学物原型排出体外。但是，当化学毒物反复多次给动物染毒，原型排出体外。但是，当化学毒物反复多次给动物染毒，化学毒物进入机体的速度化学毒物进入机体的速度(或总量或总量)超过代谢转化的速度和超过代谢转化的速度和排泄的速度排泄的速度(或总量或总量)时，化学毒物或其代谢产物就有可能时，化学毒物或其代谢产物就
21、有可能在机体内逐渐增加并贮留，这种现象称为化学毒物的在机体内逐渐增加并贮留，这种现象称为化学毒物的蓄积蓄积作用作用(accumulation)(accumulation)。蓄积作用实际上有二个含义：蓄积作用实际上有二个含义：物质蓄积物质蓄积(material accumulation):(material accumulation):化化学学分分析析的的方方法法能能够够测测出出机机体体内内存存在在该该物物质质或或其其代代谢谢产产物时。物时。功能蓄积功能蓄积(functional accumulation):多次接触一定时间后，虽不能测出该物质或其代谢产物，多次接触一定时间后，虽不能测出该物质或
22、其代谢产物，但机体有慢性中毒的症状出但机体有慢性中毒的症状出 一、基本概念一、基本概念二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价化化学学毒毒物物的的蓄蓄积积作作用用是是发发生生慢慢性性中中毒毒的的物物质质基基础础，因因此此研研究究化化学学毒毒物物在在机机体体内内的的蓄蓄积积性性是是评评价价化化学学毒毒物物能能否否引引起起潜潜在在慢慢性性毒毒性性的的依依据据之之一一，也也是是食食品品标标准准制制订订过过程程选选择择安安全全系系数数的的主主要要依依据。据。蓄蓄积积毒毒性性试试验验是是研研究究化化学学毒毒物物基基础础毒毒性性的的重重要要内内容容之之一一，目目的的是是通通过过试试验验求求
23、出出蓄蓄积积系系数数K K，了了解解化化学学毒毒物物蓄蓄积积毒毒性性的的强强弱弱，并并为为慢慢性性毒毒性性试验及其他有关毒性试验的剂量选择提供参考。试验及其他有关毒性试验的剂量选择提供参考。(一一)蓄积系数法蓄积系数法 蓄蓄积积系系数数(accumulation(accumulation coefficient)coefficient)是是多多次次染染毒毒使使半半数数动动物物出出现现效效应应(或或死死亡亡)的的累累积积剂剂量量EDED5050(n)(n)与与一一次次染染毒毒使使半半数数动动物物出出现现相相同同效效应应(或或死亡死亡)的剂量的剂量EDED5050(1)(1)的比值，即：的比值，即
24、：K KEDED5050(n)/ED(n)/ED5050(1)(1)K KLDLD5050(n)/LD(n)/LD5050(1)(1)表表6-5 6-5 蓄积系数的分级标准蓄积系数的分级标准K K1 1 高度蓄积高度蓄积1 1K K3 3 明显蓄积明显蓄积3 3K K5 5 中等蓄积中等蓄积5 5K K 轻度蓄积轻度蓄积二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价 1 1固定剂量法：固定剂量法：一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染一般常选用大、小鼠灌胃或腹腔注射方法进行染毒。先求出毒。先求出LDLD5050，然后选取相同条件的，然后选取相同条件的4040只只(或更多或更多)实
25、验动物，分为两组，一为染毒组，一为对照组，每实验动物，分为两组，一为染毒组，一为对照组，每组至少组至少2020只，雌雄各半。试验组在只，雌雄各半。试验组在1/201/20l/50 LDl/50 LD5050的的范围内选定一个剂量，每日以固定剂量、定时和相同范围内选定一个剂量，每日以固定剂量、定时和相同途径进行染毒途径进行染毒,试验期间观察记录每组动物死亡数。试验期间观察记录每组动物死亡数。当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，当试验组累积发生一半动物死亡即可终止试验。此时，计算累积总接触剂量计算累积总接触剂量LDLD5050(n)(n)，根据公式计算，根据公式计算K K值，值，然后依
26、表然后依表6-56-5进行评价。但若接触剂量已累积达到进行评价。但若接触剂量已累积达到5 5个个LDLD5050剂量，也可终止试验。剂量，也可终止试验。二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价 2 2剂量递增法：剂量递增法：在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试在试验期间，当化学毒物引起动物累积死亡一半时即可终止试验，计算验，计算验，计算验，计算K K K K值进行评价。一般来说，在试验第值进行评价。一般来说，在试验第值进行评价。一般来说，在试验第值进行评
27、价。一般来说，在试验第2l2l2l2l天也可结束试验，天也可结束试验，天也可结束试验，天也可结束试验，因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂因为这之前如果动物没有死亡或死亡数不足一半，说明其累积剂量已达量已达量已达量已达5.26LD5.26LD5.26LD5.26LD50505050，即，即，即，即K K K K5 5 5 5。使用本方法时要注意染毒期间定期。使用本方法时要注意染毒期间定期。使用本方法时要注意染毒期间定期。使用本方法时要注意染毒期间定期(每每每每4
28、4 4 4天一次天一次天一次天一次)给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的染毒绝对量。给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的染毒绝对量。给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的染毒绝对量。给动物称重，按实测体重，调整化学毒物的染毒绝对量。二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价3 3剂量固定的剂量固定的2020天蓄积法：天蓄积法：它它通通常常采采用用经经口口灌灌胃胃染染毒毒方方式式，将将动动物物随随机机分分为为5 5个个组组，包包括括阴阴性性对对照照组组和和1/20 1/20 LDLD5050、l/10 l/10 LDLD5050、1/5 1/5 LDLD5050和和1/2 1/
29、2 LDLD5050四四个个剂剂量量组组，每每组组动动物物数数1010只只，雌雌雄雄各各半半。每每日日染染毒毒一一次次，连连续续染染毒毒2020天天。观观察察每每组组雌雌雄雄合合计计的的死死亡亡动动物物数数量量。试试验验结结束束时时根根据据下下列列标标准准进进行行评评定定：各各剂剂量量组组均均无无死死亡亡，即即为为蓄蓄积积性性不不明明显显；如如仅仅1/2 1/2 LDLD5050剂剂量量组组有有死死亡亡，其其他他组组均均无无死死亡亡，则则为为弱弱蓄蓄积积性性；如如1/20 1/20 LDLD5050剂剂量量组组无无死死亡亡，其其他他各各组组间间死死亡亡数数有有剂剂量量反反应应关关系系时时，则则
30、为为中中等等蓄蓄积积性性；如如1/20 1/20 LDLD5050剂剂量量组组有有死亡，且有剂量反应关系，则为强蓄积性。死亡，且有剂量反应关系，则为强蓄积性。二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价（二（二)生物半减期法：生物半减期法：生生物物半半减减期期(biological(biological half-lifehalf-life，t t1/21/2)法法是是用用毒毒物物动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用。动力学原理描述化学毒物在机体内的蓄积作用。一一般般来来说说，t t1/21/2d d较较短短的的化化学学毒毒物物达达到到蓄蓄积积极极限限所所需需的的时时间也短，间
31、也短，t t1/21/2长者达到蓄积极限的时间也长。长者达到蓄积极限的时间也长。二、蓄积毒性试验方法及其评价二、蓄积毒性试验方法及其评价一一 亚慢性毒性作用：亚慢性毒性作用：亚慢性毒性的概念亚慢性毒性的概念 亚慢性毒性试验的目的亚慢性毒性试验的目的 亚慢性毒性试验的设计亚慢性毒性试验的设计 二二 慢性毒性作用：慢性毒性作用：慢性毒性的概念慢性毒性的概念 慢性毒性试验的目的慢性毒性试验的目的 慢性毒性试验设计慢性毒性试验设计 第三节第三节 亚慢性和慢性毒性作用及其亚慢性和慢性毒性作用及其评价评价(一一)概念：概念：亚慢性毒性亚慢性毒性(subchronic toxicity)是指人是指人 或实验
32、动物连续接触较长时间、较大剂量或实验动物连续接触较长时间、较大剂量的外源化合物所引起的毒性效应。的外源化合物所引起的毒性效应。慢性毒性慢性毒性(chronic toxicity)是指人或实验是指人或实验动物长期动物长期(甚至终生甚至终生)反复接触低剂量的化反复接触低剂量的化学毒物所产生的毒性效应。学毒物所产生的毒性效应。一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的（二）试验目的：（二）试验目的：1.1.确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱，对在急性及亚急性毒确定受试物亚慢性和慢性毒性的效应谱，对在急性及亚急性毒 性试验中发现的毒作用提供新的信息，并发现在急性及亚急性毒
33、性试验中发现的毒作用提供新的信息，并发现在急性及亚急性毒性试验中未发现的毒作用；性试验中未发现的毒作用；2.2.研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；研究受试物亚慢性和慢性毒作用的靶器官；3.3.研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量研究受试物亚慢性和慢性毒性剂量反应反应(效应效应)关系，确定关系，确定其观察到有害作用的最低剂量其观察到有害作用的最低剂量(LOAEL)(LOAEL)和未观察到有害作用的剂和未观察到有害作用的剂量（量（NOAELNOAEL），提出此受试物的安全限量参考值），提出此受试物的安全限量参考值;4.4.研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性研究受试物亚慢性和慢性毒性损害的可逆性;
34、5.5.亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择亚慢性毒性试验为慢性毒性试验的剂量设计及观察指标选择提提 供依据供依据;6.6.确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为确定不同动物物种对受试物亚慢性和慢性毒效应的差异，为将毒性研究结果外推到人提供依据。将毒性研究结果外推到人提供依据。一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的一、亚慢性和慢性毒性试验的概念、目的二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计 （一）实验动物选择（一）实验动物选择 亚慢性毒性试验亚慢性毒性试验 年龄：年龄：大鼠大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g数量：数量：小动物小动物
35、20 大动物大动物6性别：性别：雌雄各半雌雄各半 慢性毒性试验慢性毒性试验年龄：年龄：大鼠大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初断乳初断乳数量：数量：小动物小动物40 大动物大动物8性别：性别：雌雄各半雌雄各半（二）实验动物染毒期限：二）实验动物染毒期限：工业毒理学工业毒理学 3-6个月个月食品毒理学食品毒理学 6个月个月1年年环境毒理学环境毒理学 6个月个月1年年致癌试验致癌试验 接近或等于动物的预期寿命接近或等于动物的预期寿命二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计亚慢性毒性的剂量选择亚慢性毒性的剂量选择阴性对照组阴性对照组低剂量组低剂量组中剂量组中剂量组高剂量组高剂
36、量组急性毒性的阈剂量急性毒性的阈剂量 1/201/5 LD50组距：组距：310倍，最低倍，最低不小于不小于2倍倍慢性毒性的剂量选择慢性毒性的剂量选择阴性对照组阴性对照组低剂量组低剂量组中剂量组中剂量组高剂量组高剂量组 亚慢性阈剂量或其亚慢性阈剂量或其1/51/2 1/10 LD50组距：组距：25倍，最低不小于倍，最低不小于2倍倍二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计（四）试验分组和剂量设计（四）试验分组和剂量设计（三）实验动物染毒方式（三）实验动物染毒方式经消化道经消化道经呼吸道经呼吸道经皮肤经皮肤（五）观察指标五）观察指标二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性
37、试验设计 1.一般综合性观察指标：一般综合性观察指标：外观体征、行为活动、体重、食物利用率外观体征、行为活动、体重、食物利用率2.一般化验指标：一般化验指标：3.系统尸解和病理学检查：系统尸解和病理学检查：（1）脏器湿重、脏器系数（脏器湿重、脏器系数（脏脏/体比值体比值）（如肝如肝/体比，即体比，即(全肝湿重全肝湿重/体重体重)100100）（2）病理学检查病理学检查4.特异性指标：特异性指标：二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计（五）观察指标（五）观察指标二、亚慢性和慢性毒性试验设计二、亚慢性和慢性毒性试验设计第四节第四节 联合毒性作用的评价联合毒性作用的评价一、联合作用系数法一、联合作用系数法二、等效应线图解法二、等效应线图解法三、三、Bliss法法四、方差分析法四、方差分析法第五节第五节 局部毒作用局部毒作用1.皮肤原发性刺激试验皮肤原发性刺激试验2.皮肤致敏反应试验皮肤致敏反应试验3.光致敏反应光致敏反应4.光刺激试验光刺激试验5.眼刺激试验眼刺激试验6.其他粘膜刺激试验其他粘膜刺激试验7.替代（体外）试验替代（体外）试验