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1、1第一页，本课件共有49页学习目的学习目的u通过学习光谱分析法概论、紫外通过学习光谱分析法概论、紫外-可见分光光度法的可见分光光度法的基本原理、分光光度计的基本构造、降低测量误差基本原理、分光光度计的基本构造、降低测量误差的方法、常用的定性、定量方法等知识，了解光学的方法、常用的定性、定量方法等知识，了解光学分析法的知识体系，熟悉紫外分析法的知识体系，熟悉紫外-可见分光光度法的实可见分光光度法的实际应用，会用紫外际应用，会用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸光可见分光光度计测定溶液的吸光度，并对有关物质进行定性定量分析，为学习红外度，并对有关物质进行定性定量分析，为学习红外分光光度法、荧光分光光
2、度法、核磁共振波谱法及分光光度法、荧光分光光度法、核磁共振波谱法及药物分析课中有关药品的定性鉴别、杂质检查和含药物分析课中有关药品的定性鉴别、杂质检查和含量测定方法奠定基础。量测定方法奠定基础。第二页，本课件共有49页知识要求知识要求1掌握朗伯掌握朗伯-比尔定律概念、表示及条件，吸光系数和比尔定律概念、表示及条件，吸光系数和吸收光谱的意义、表示，常用的定量分析方法原理和吸收光谱的意义、表示，常用的定量分析方法原理和应用。应用。2熟悉紫外熟悉紫外-可见吸收光谱的产生机制、分光光度计的可见吸收光谱的产生机制、分光光度计的基本结构、偏离朗伯基本结构、偏离朗伯-比尔定律的主要因素。比尔定律的主要因素。
3、3了解光谱分析法的分类、测量条件的选择、定性分析了解光谱分析法的分类、测量条件的选择、定性分析的依据和方法。的依据和方法。第三页，本课件共有49页能力要求能力要求1.能够用朗伯能够用朗伯-比尔定律解决定量计算问题比尔定律解决定量计算问题。2.能能 够够 绘绘 制制 吸吸 收收 光光 谱谱 曲曲 线线，找找 出出 被被 测测 物物 质质 的的 最最 大吸收波长。大吸收波长。3.能能够够制制备备标标准准曲曲线线，并并能能应应用用标标准准曲曲线线对对样样品品进进行行定定量分析。量分析。4.会使用常见的紫外会使用常见的紫外-可见分光光度计测定溶液的吸光度。可见分光光度计测定溶液的吸光度。第四页，本课件
4、共有49页第一节 光谱分析法概论 第一节第一节 光谱分析法概论光谱分析法概论 一、电磁辐射与电磁波谱电磁辐射与电磁波谱 电磁辐射电磁辐射：电磁辐射，也叫电磁波，具有波粒二象性。电磁辐射，也叫电磁波，具有波粒二象性。c Ehu电磁波谱：把电磁辐射按照波长大小顺序排列起来，就称为电磁波谱：把电磁辐射按照波长大小顺序排列起来，就称为电磁波谱电磁波谱。紫外光区和可见光区仅是电磁波谱中的一小部分。紫外光区和可见光区仅是电磁波谱中的一小部分。第五页，本课件共有49页 表表9-1 9-1 电磁波谱分区表电磁波谱分区表电磁辐射区段电磁辐射区段 波长范围波长范围 能级跃迁的类型能级跃迁的类型 射线 10-30.
5、1nm 原子核能级X射线 0.110nm 内层电子能级远紫外辐射 10200nm 内层电子能级紫外辐射 200400nm 价电子或成键电子能级可见光区 400760nm 价电子或成键电子能级近红外辐射 0.762.5m 涉及氢原子的振动能级中红外辐射 2.550m 原子或分子的振动能级远红外辐射 50500m 分子的转动能级微波区 0.3mm1m 分子的转动能级无线电波区 11000m 磁场诱导核自旋能级第一节 光谱分析法概论 第六页，本课件共有49页第一节 光谱分析法概论二、二、光谱分析法的分类光谱分析法的分类u发射光谱法：物质的原子、分子或离子在一定条件发射光谱法：物质的原子、分子或离子在
6、一定条件下，由低能态（基态）跃迁至高能态（激发态），下，由低能态（基态）跃迁至高能态（激发态），再由高能态跃迁至低能态，同时产生电磁辐射，根再由高能态跃迁至低能态，同时产生电磁辐射，根据这种光谱而建立的分析方法称为发射光谱法。据这种光谱而建立的分析方法称为发射光谱法。u吸收光谱法：吸收光谱法：利用物质对电磁辐射的选择性吸收而建利用物质对电磁辐射的选择性吸收而建立的分析方法称为吸收光谱法。立的分析方法称为吸收光谱法。紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法是其中重要的一种方法。是其中重要的一种方法。第七页，本课件共有49页第一节 光谱分析法概论三、紫外三、紫外-可见分光光度的特点可见分光光度的特点
7、1.灵敏度高灵敏度高2.准确度高准确度高3.精密度好精密度好4.选择性好选择性好5.仪器设备简单，价格低廉，易于普及；操作简便，测仪器设备简单，价格低廉，易于普及；操作简便，测定快速定快速6.应用范围广泛应用范围广泛第八页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法第二节第二节 紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法一、紫外一、紫外-可见吸收光谱的产生可见吸收光谱的产生u当分子（或离子）受到当分子（或离子）受到光照射时，能够吸收具有一定能光照射时，能够吸收具有一定能量的光量子，由能量较低的基态能级量的光量子，由能量较低的基态能级E1跃迁到能量较跃迁到能量较高的激发态能级高的激发态能级E2 ，
8、即物质对光具有选择性吸收。，即物质对光具有选择性吸收。u紫外紫外-可见可见光的能量光的能量(h)与分子与分子（或离子）发生电子能（或离子）发生电子能级级跃迁前后的能量差（跃迁前后的能量差（E2-E1）恰好相等，电磁辐射与）恰好相等，电磁辐射与被测物发生能量交换被测物发生能量交换，产生紫外，产生紫外-可见吸收光谱。可见吸收光谱。第九页，本课件共有49页课堂互动课堂互动1 1紫外紫外-可见光的波长范围是可见光的波长范围是A A200400nm B200400nm B400760nm 400760nm C C200760nm D200760nm D360800nm360800nm2 2下列叙述错误的
9、是下列叙述错误的是A A光的能量与其波长成反比光的能量与其波长成反比 B B有色溶液越浓，对光的吸收也越强烈有色溶液越浓，对光的吸收也越强烈C C物质对光的吸收有选择性物质对光的吸收有选择性 D D光的能量与其频率成反比光的能量与其频率成反比第二节 紫外-可见分光光度法第十页，本课件共有49页课堂互动课堂互动3 3紫外紫外-可见分光光度法属于可见分光光度法属于 A A原子发射光谱法原子发射光谱法 B B原子吸收光谱法原子吸收光谱法 C C分子发射光谱法分子发射光谱法 D D分子吸收光谱法分子吸收光谱法4 4分分子子吸吸收收可可见见-紫紫外外光光后后，可可发发生生哪哪种种类类型型的的分子能级跃迁
10、分子能级跃迁 A A转动能级跃迁转动能级跃迁 B B振动能级跃迁振动能级跃迁 C C电子能级跃迁电子能级跃迁 D D以上都能发生以上都能发生 第二节 紫外-可见分光光度法第十一页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法二、透光率与吸光度二、透光率与吸光度I0Ia+It+Ir I0Ia+It 透射光透射光强度强度It与入射光强度与入射光强度I0的比值称为透光率或透光的比值称为透光率或透光度度T。第十二页，本课件共有49页对透光率的倒数取对数，称为吸光度对透光率的倒数取对数，称为吸光度即：即：第二节 紫外-可见分光光度法第十三页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法三、朗伯三、朗伯-
11、比尔定律比尔定律 u当一束平行的单色光通过均匀、无散射的含有吸光性当一束平行的单色光通过均匀、无散射的含有吸光性物质的溶液时，在入射光的波长、强度及溶液的温度物质的溶液时，在入射光的波长、强度及溶液的温度等条件不变的情况下，该溶液的吸光度等条件不变的情况下，该溶液的吸光度A与溶液的浓度与溶液的浓度c及液层厚度及液层厚度L的乘积成正比，即的乘积成正比，即 AKL c。u朗伯朗伯-比尔定律是定量分析的理论依据。比尔定律是定量分析的理论依据。第十四页，本课件共有49页u朗朗伯伯-比比尔尔定定律律不不仅仅适适用用于于可可见见光光，而而且且也也适适用用于于紫紫外外光光和和红红外外光光；不不仅仅适适用用于
12、于均均匀匀、无无散散射射的的溶溶液液，而而且且也也适适用用于于均均匀、无散射的固体和气体匀、无散射的固体和气体。u实实验验证证明明：溶溶液液对对光光的的吸吸光光度度具具有有加加和和性性。如如果果溶溶液液中中同同时时存存在在两两种种或或两两种种以以上上的的吸吸光光性性物物质质，则则测测得得的的该该溶溶液液的的吸光度等于溶液中各吸光性物质吸光度的总和，即：吸光度等于溶液中各吸光性物质吸光度的总和，即：A（a+b+c）AaAbAc 第二节 紫外-可见分光光度法第十五页，本课件共有49页课堂互动课堂互动您您能能说说出出朗朗伯伯-比比尔尔定定律律的的意意义义及及应用条件吗？应用条件吗？第二节 紫外-可见
13、分光光度法第十六页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法四、吸光系数四、吸光系数 摩尔吸光系数：在入射光波长一定时，溶液浓度为摩尔吸光系数：在入射光波长一定时，溶液浓度为1 mol/L，液层厚度为，液层厚度为1cm时所测得的吸光度称为摩尔吸光时所测得的吸光度称为摩尔吸光系数，常用系数，常用表示表示。百分吸光系数：在入射光波长一定时，溶液浓度为百分吸光系数：在入射光波长一定时，溶液浓度为1 （W/V）、层厚度为）、层厚度为1cm时所测得的吸光度称为百分时所测得的吸光度称为百分吸光系数，常用吸光系数，常用 表示表示。二者的关系：二者的关系：第十七页，本课件共有49页 课堂互动课堂互动用用双
14、双硫硫腙腙测测定定CdCd2+2+溶溶液液的的吸吸光光度度A A时时，CdCd2+2+（CdCd的的原原子子量量为为112112）的的浓浓度度为为140g/L140g/L，在在525nm525nm波波长长处处，用用L L1cm1cm的的吸吸收收池池，测测得得吸吸光光度度A A0.2200.220，试试计计算算摩摩尔尔吸吸光光系系数数和和百百分分吸吸收收系系数数，实实验验中中应应选选用用哪哪种种材材质质的的吸吸收收池池盛装溶液？盛装溶液？第二节 紫外-可见分光光度法第十八页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法五、吸收光谱曲线五、吸收光谱曲线 概念：以波长概念：以波长为横坐标，吸光度为横
15、坐标，吸光度A为纵坐标所描绘的为纵坐标所描绘的曲线，称为吸收光谱曲线，简称吸收光谱。曲线，称为吸收光谱曲线，简称吸收光谱。特点特点:（1）在相同条件下，同一物质的不同浓度的溶液，）在相同条件下，同一物质的不同浓度的溶液，其吸收光谱曲线相似，且其吸收光谱曲线相似，且max相同。这是定性分析的相同。这是定性分析的基础。基础。（2）测定条件一定时，吸光性物质的浓度越大，）测定条件一定时，吸光性物质的浓度越大，其吸光度也越大。这是定量分析的基础。其吸光度也越大。这是定量分析的基础。第十九页，本课件共有49页吸收光谱曲线的特征参数吸收光谱曲线的特征参数第二节 紫外-可见分光光度法sh第二十页，本课件共有
16、49页课堂互动课堂互动某某有有色色溶溶液液的的摩摩尔尔浓浓度度为为c c，在在一一定定条条件件下下用用1cm1cm比比色色杯测得吸光度为杯测得吸光度为A A，则摩尔吸光系数为，则摩尔吸光系数为 A AcAcA B BcMcM C CA/C DA/C DC/A C/A 第二节 紫外-可见分光光度法第二十一页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法六、偏离朗伯六、偏离朗伯-比尔定律的因素比尔定律的因素化学因素化学因素:(1)溶液的浓度溶液的浓度 (2)物质的化学变化物质的化学变化 (3)溶剂的影响溶剂的影响 光学因素光学因素:(1)非单色光非单色光 (2)杂散光杂散光 (3)非平行光非平行光
17、 (4)反射现象反射现象 (5)散射现象散射现象第二十二页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法第二十三页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法七、紫外七、紫外-可见分光光度计可见分光光度计基本结构：基本结构：光源光源单色器单色器吸收池吸收池检测器检测器显示器显示器基本类型基本类型:(:(1)可见分光光度计可见分光光度计 (2)紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计 1 1）单波长分光光度计）单波长分光光度计 单光束分光光度计单光束分光光度计 双光束分光光度计双光束分光光度计 2 2）双波长分光光度计）双波长分光光度计 第二十四页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法第
18、二十五页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法第二十六页，本课件共有49页课堂互动课堂互动 试述紫外试述紫外-可见分光光度计的主可见分光光度计的主要部件及其作用？要部件及其作用？第二节 紫外-可见分光光度法第二十七页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法八、测量误差与分析条件的选择八、测量误差与分析条件的选择()测量误差测量误差:(1)仪器误差仪器误差 (2)操作误差操作误差 仪器测量条件的选择：仪器测量条件的选择：(1)选择最大吸收波长作为入射光。选择最大吸收波长作为入射光。(2)吸光度读数范围应控制在吸光度为吸光度读数范围应控制在吸光度为0.20.7、透透光率为光率为20%
19、65%之间。之间。第二十八页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法八、测量误差与分析条件的选择八、测量误差与分析条件的选择（）显色反应条件的选择显色反应条件的选择：(1)对显色剂及显色反应的要求对显色剂及显色反应的要求 (2)控制合适的显色反应条件控制合适的显色反应条件 参比溶液的选择：参比溶液的选择：(1)溶剂参比溶液溶剂参比溶液 (2)试样参比溶液试样参比溶液 (3)试剂参比溶液试剂参比溶液 (4)平行操作参比溶液平行操作参比溶液 第二十九页，本课件共有49页课堂课堂互动互动测定试样时，吸光度的读数应控制在测定试样时，吸光度的读数应控制在0.20.20.70.7范围内。若吸光度读数
20、不在范围内。若吸光度读数不在此范围，可采用哪些方法进行调整此范围，可采用哪些方法进行调整?第二节 紫外-可见分光光度法第三十页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法九、定性与定量分析方法九、定性与定量分析方法 （一）定性分析（一）定性分析 定性分析依据定性分析依据:最大吸收波长最大吸收波长、吸光系数和吸收光谱曲线的形状。吸光系数和吸收光谱曲线的形状。定性分析方法定性分析方法:(1)比较光谱的一致性比较光谱的一致性 (2)比较吸收光谱的特征数据及比值的一致性比较吸收光谱的特征数据及比值的一致性 纯度检查：将药品光谱与药品标准光谱相对照，利纯度检查：将药品光谱与药品标准光谱相对照，利用杂质
21、的特征吸收，可以检测出微量杂质。用杂质的特征吸收，可以检测出微量杂质。第三十一页，本课件共有49页实例分析实例分析中中国国药药典典(2005(2005年年版版)规规定定：贝贝诺诺酯酯加加无无水水乙乙醇醇制制成成每每1ml1ml约约含含7.5 7.5 的的溶溶液液，在在240nm240nm处处有有最最大大吸吸收收，相相应应的的百百分分吸光系数吸光系数()()应为应为730730760760。维维生生素素B B1212也也有有三三个个吸吸收收峰峰，分分别别在在278nm278nm、361nm361nm、550nm550nm波波长长处处，它它们们的的吸吸光光度度比比值值应应为为：A A361nm36
22、1nm/A A278nm278nm在在1.701.701.881.88之间，之间，A A361nm361nm/A A550nm550nm在在3.153.153.453.45之间。之间。第二节 紫外-可见分光光度法第三十二页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法（二）（二）定量分析定量分析定量分析依据定量分析依据:AK c 定量分析方法：定量分析方法：1.单组分溶液的定量方法单组分溶液的定量方法 (1)标准曲线法标准曲线法(2)标准溶液对比法标准溶液对比法(3)吸光系数法吸光系数法 2.二元组分溶液的定量方法二元组分溶液的定量方法 (1)解联立方程组法解联立方程组法 (2)等吸收波长消去
23、法等吸收波长消去法 (3)差示分光光度法差示分光光度法 第三十三页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法u标准曲线法标准曲线法:标标准准曲曲线线法法是是紫紫外外-可可见见分分光光光光度度法法中中最最经经典典的的定定量量方方法法。具具体测定的方法和步骤如下：体测定的方法和步骤如下：配配制制一一系系列列不不同同浓浓度度的的标标准准溶溶液液，选选择择合合适适的的参参比比溶溶液液，在在相相同同条条件件下下，以以待待测测组组分分的的最最大大吸吸收收波波长长 作作为为入入射射光光，分分别别测测定定各标准溶液对应的吸光度。各标准溶液对应的吸光度。以以浓浓度度c c为为横横坐坐标标、吸吸光光度度A A
24、为为纵纵坐坐标标描描绘绘曲曲线线，称称为为标标准准曲曲线线，也叫工作曲线。也叫工作曲线。按按照照相相同同的的实实验验条条件件和和操操作作程程序序，用用待待测测溶溶液液配配制制未未知知试试样样溶溶液液并并测测定定其其吸吸光光度度A A样，在在标标准准曲曲线线上上找找到到与与之之对对应应的的未未知知试试样样溶溶液的浓度液的浓度c c样。第三十四页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法第三十五页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法u标准对比法标准对比法:在在相相同同的的条条件件下下，配配制制浓浓度度为为cs的的标标准准溶溶液液和和浓浓度度为为cx的的试试样样溶溶液液，在在最最大大吸
25、吸收收波波长长处处，分分别别测测定定二二者者的的吸吸光光度度值值为为As、Ax ，依据朗伯，依据朗伯-比尔定律得：比尔定律得：As=csLAx=cxL 则则:第三十六页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法u吸光系数法吸光系数法:吸吸光光系系数数法法又又称称绝绝对对法法，是是直直接接利利用用朗朗伯伯-比比尔尔定定律律的的数数学学表表达达式式AKcL进进行行计计算算的的定定量量分分析析方方法法。在在手手册册中中查查出出待待测测物物质质在在最最大大吸吸收收波波长长 处处的的吸吸光光系系数数 或或 ,并并在在相相同同条条件件下下测测量量样样品品溶溶液液的的吸吸光光度度A，则其浓度为：则其浓度
26、为：或或第三十七页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法有有时时也也可可以以将将待待测测样样品品溶溶液液的的吸吸光光度度换换算算成成样样品品组组分分的的吸吸光光系系数数，计计算算与与标标准准品品的的吸吸光光系系数数的的比比值值，求出样品中待测组分的质量分数。求出样品中待测组分的质量分数。或或第三十八页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法例例如如：维维生生素素B12水水溶溶液液在在 =361nm处处的的百百分分吸吸光光系系数数 =207。取取维维生生素素B12样样品品30.0mg，加加纯纯化化水水溶溶解解，用用1L的的容容量量瓶瓶定定容容。将将溶溶液液盛盛于于1cm的的吸吸收收
27、池池，测测得得361nm波波长长处处的的吸吸光度光度A=0.600，试求样品中维生素，试求样品中维生素B12的质量分数。的质量分数。解：解：第三十九页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法 二元组分溶液的定量方法二元组分溶液的定量方法 （1 1）解联立方程组法解联立方程组法 当当试试样样溶溶液液中中各各待待测测组组分分相相互互干干扰扰不不太太严严重重时时，可可根根据据吸吸光光度度具具有有加加和和性性的的特特点点，在在同同一一试试样样溶溶液液中中同同时时测测定定两两个个或或两两个个以以上上的的待待测测组组分分。假假设设要要测测定定试试样样中中有有两两个个待待测测组组分分a a和和b b，
28、如如果果分分别别绘绘制制a a、b b两两个个纯纯物物质质的的吸吸收收光光谱，则有三种情况。谱，则有三种情况。第四十页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法第四十一页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法（）表表明明，两两个个待待测测组组分分在在各各自自的的最最大大吸吸收收波波长长处处，另另一一组组分分没没有有吸吸收收，可可以以用用测测定定单单组组分分的的方方法法，分分别别在在1 1波波长长处处测测定定组组分分a a的的吸吸收收度度,在在2 2波波长长处处测测定定组组分分b b的的吸吸收收度度，再再由由偏偏离离朗伯朗伯-比尔定律求得比尔定律求得c ca a、c cb b。测定时
29、互不干扰。测定时互不干扰。（）表表明明，在在待待测测组组分分a a的的最最大大吸吸收收波波长长1 1处处，待待测测组组分分b b无无吸吸收收，即即组组分分b b对对组组分分a a的的测测定定无无干干扰扰，而而在在待待测测组组分分b b的的最最大大吸吸收收波波长长2 2处处，组组分分a a有有吸吸收收，即即组组分分a a对对组组分分b b的的测测定定有有干干扰扰。这这时时，可可以以在在波波长长1 1处处用用测测定定单单组组分分的的方方法法，单单独独测测量量组组分分a a；然然后后在在波波长长2 2处处测测量量溶溶液液的的总总吸吸光光度度 及及a a、b b纯纯物物质质的的吸吸收收系系数数 和和
30、，根根据据吸吸光光度度的的加加和和性性，从从而而可可以以求求出出c cb b。第四十二页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法（）表表明明，两两个个待待测测组组分分彼彼此此相相互互干干扰扰，此此时时，在在波波长长1 1和和2 2处处分分别别测测定定试试样样溶溶液液的的总总吸吸光光度度 及及 ，同同时时测测定定a a、b b纯纯物物质质的的吸吸光光系系数数 、和和 、，根根据据吸吸光光度度的的加加和和性性，则则由由联联立立方方程程组组求求得得c ca a、c cb b。第四十三页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法（2 2）等吸收波长消去法（双波长分光光度法）等吸收波长消去法（
31、双波长分光光度法）当当试试样样中中两两个个待待测测组组分分的的相相互互干干扰扰比比较较严严重重时时，用用解解联联立立方方程程组组的的方方法法进进行行定定量量分分析析会会产产生生较较大大的的误误差差，这这时时可可以以用用等等吸吸收收波波长长消消去去法法进进行测定。行测定。在在试试样样中中含含有有两两个个待待测测组组分分a a和和b b时时，若若要要测测定定组组分分b b，组组分分a a有有干干扰扰，应应设设法法消消除除组组分分a a的的吸吸收收干干扰扰。首首先先选选择择待待测测组组分分b b的的最最大大吸吸收收波波长长2 2作作为为测测量量波波长长，然然后后用用作作图图的的方方法法选选择择参参比
32、比波波长长1 1，使使组组分分a a在这两个波长处的吸光度相等。在这两个波长处的吸光度相等。第四十四页，本课件共有49页第二节 紫外-可见分光光度法试样溶液在2和1两个波长处的吸光度之差，只与待测组分b（a）的浓度成正比，而与干扰组分的浓度无关。第四十五页，本课件共有49页(3)(3)差示分光光度法差示分光光度法当当待待测测组组分分含含量量过过高高时时，吸吸光光度度超超出出了了准准确确测测量量的的读读数数范范围围，会会造造成成较较大大的的误误差差，可可以以采采用用差差示示分分光光光光度度法法，弥弥补补这这一一缺缺点点。差差示示光光度度法法是是用用一一个个比比试试样样溶溶液液浓浓度度稍稍低低的的
33、标标准准溶溶液液作作为为参参比比溶溶液液，将将分分光光光光度度计计调调零零（透透光光率率100%100%），测测得得的的吸吸光光度度就就是是被被测测试试样样溶溶液液试试液液与与参参比比溶溶液液的的吸吸光光度度差差值值（相相对对吸光度）。根据朗伯吸光度）。根据朗伯-比尔定律得：比尔定律得：A AA Ax xA As sLL(c cx xc cs s)待待测测溶溶液液与与参参比比溶溶液液的的吸吸光光度度差差值值与与两两溶溶液液的的浓浓度度之之差差成成正比，这就是差示分光光度法的基本原理。正比，这就是差示分光光度法的基本原理。第二节 紫外-可见分光光度法第四十六页，本课件共有49页课堂互动课堂互动1
34、.1.1.1.在紫外在紫外在紫外在紫外-可见分光光度法中，影响吸光系数的因素是可见分光光度法中，影响吸光系数的因素是可见分光光度法中，影响吸光系数的因素是可见分光光度法中，影响吸光系数的因素是 A A A A溶剂的种类和性质溶剂的种类和性质溶剂的种类和性质溶剂的种类和性质 B B B B溶液的物质量浓度溶液的物质量浓度溶液的物质量浓度溶液的物质量浓度 C C C C物质的本性和光的波长物质的本性和光的波长物质的本性和光的波长物质的本性和光的波长D D D D吸收池大小吸收池大小吸收池大小吸收池大小 E E E E待测物的分子结构待测物的分子结构待测物的分子结构待测物的分子结构2.2.2.2.紫
35、外紫外紫外紫外-可见分光光度法常用的定量分析方法有可见分光光度法常用的定量分析方法有可见分光光度法常用的定量分析方法有可见分光光度法常用的定量分析方法有A A A A间接滴定法间接滴定法间接滴定法间接滴定法 B B B B标准对比法标准对比法标准对比法标准对比法 C C C C标准曲线法标准曲线法标准曲线法标准曲线法D D D D直接电位法直接电位法直接电位法直接电位法 E E E E吸光系数法吸光系数法吸光系数法吸光系数法 3 3 3 3在符合朗伯在符合朗伯在符合朗伯在符合朗伯-比尔定律的条件下，有色物质的浓度、最大吸收波长、吸光度三者的关系是比尔定律的条件下，有色物质的浓度、最大吸收波长、
36、吸光度三者的关系是比尔定律的条件下，有色物质的浓度、最大吸收波长、吸光度三者的关系是比尔定律的条件下，有色物质的浓度、最大吸收波长、吸光度三者的关系是 A A A A增加、增加、增加增加、增加、增加增加、增加、增加增加、增加、增加 B B B B增加、减小、不变增加、减小、不变增加、减小、不变增加、减小、不变 C C C C减小、增加、减小减小、增加、减小减小、增加、减小减小、增加、减小 D D D D减小、不变、减小减小、不变、减小减小、不变、减小减小、不变、减小 第四十七页，本课件共有49页课堂互动课堂互动4维生素D2的摩尔吸收系数264nm=18200。用2.0cm吸收池测定，如果要控制吸光度A在0.6990.187范围内，应使维生素D2溶液的浓度在什么范围内？第四十八页，本课件共有49页本章结束！谢谢！第四十九页，本课件共有49页