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1、实验三蛋白质等电点测定一、原理蛋白质是一种两性电解质。在溶液中存在下列平衡。其解离状态和程度爱溶液的pH值影响。当溶液的pH达到一定数值时，会导致蛋白质颗粒上正负电荷的数目相等，此时，蛋白质不移动，此时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点。等电点时，其溶解度最小。二、操作1.取4支洁净的试管，按表顺序分别精确加入各试剂，然后混匀。2.向上述试管中各加入酪蛋白的醋酸钠溶液1ml，随加随摇。观察其混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度。混浊度以的多少来表示。沉淀最多的一管即为酪蛋白的等电点。判断其等电点。实验四蛋白质的沉淀反应一、原理在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体
2、颗粒，具有胶体的所有性质。在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因推动电荷和脱水而沉淀。1.可逆沉淀反应蛋白质分子的结构没有发生变化，仅因为表面的水化层和双电层遭到破坏而沉淀。如蛋白质的盐析作用和低温下乙醇的沉淀作用。除去影响因素，蛋白质又可恢复天然性质。2.不可逆沉淀反应影响因素除了破坏蛋白质的两外层之外，还使其内部结构发生了改变，这种沉淀在除去影响因素也不能再溶解于原来的溶剂中。蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在，并不析出。如蛋白质的结絮作用。二、操作1.蛋白质的盐析不同浓度的盐析出不同的蛋白质。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中析出。取一支试管：
3、鸡蛋清液3ml+饱和硫酸铵液3ml，混匀后静置数分钟，观察现象并记录。然后倒出少量混浊液，加少量水，沉淀是否溶解，为什么？向管内添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，又有何现象？加水，沉淀是否溶解？记录并解释。2.不可逆沉淀反应重金属离子沉淀蛋白质取1支试管，加鸡蛋清1ml+硝酸银液1滴，观察现象并记录。加水，沉淀溶解？解释。有机酸沉淀蛋白质取1支试管，加鸡蛋清2ml+三氯乙酸1ml，混匀，观察现象并记录。加水，沉淀溶解？为什么？乙醇引起的变性与沉淀取三支试管，编号。按表加入试剂。混匀后，观察各管有何变化，记录现象。放置片刻后，向各管中加水8ml，然后在2、3号管中各加1滴甲基红，再分别用0.1M的醋酸和0.05M的碳酸钠中和。观察各管颜色变化和沉淀的生成并记录。每管再加0.1M的盐酸数滴，有何现象发生？记录并解释全部现象。