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1、山东嘉源检测：微生物制片染色显微镜观察 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 显微镜是微生物检验中常用的精密光学仪器。显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。食品微生物检验中最常用的是普通光学显微镜。1、显微微镜显微镜的使用方法 用光学用光学显微微镜观察微生物形察微生物形态时，一般遵循先一般遵循先低倍低倍镜观察察,后高倍后高倍观察察。低倍镜操作方法1.两眼从侧面注视低倍物镜对准通光孔，使用
2、粗调焦螺旋将镜筒自上而下的调节，避免物镜镜头接触到玻片而损坏镜头和压破玻片。当物镜镜头与载物台的玻片相距23mm时停止；2.左眼观察，并转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐升降，直到看清物象为止；3.再用微调细准焦螺旋调至清晰。高倍镜操作方法1.将低倍镜观察到的目标移动至视野中央；2.将低倍镜镜头转换成高倍镜镜头。换用高倍镜后，视野内亮度变暗，因此一般选用较大的光圈并使用反光镜的凹面；3.用微调焦螺旋调至清晰。观看的物体数目变少，但是体积变大。注意：注意：高倍镜观察时，光线需增强。2、染色和制片染色和制片 由于微生物细胞含有大量水分，机体是无色透明的，与周围背景没有明显的反差,必须进行染色，使经染色后的
3、菌体与菌体与背景形成明背景形成明显的色差的色差，从而能更清楚地观察到其形态和结构。微生物中细菌、致病菌是很小的生物体，必须通过染色的方法，在显微镜下才能看得清楚，并且还可以通过染色的方法鉴别革兰氏染色特性，以及是否长有鞭毛、周毛、荚膜和芽孢等。染色方法染色方法(一一)简单染色法简单染色法 简单染色法又叫作普通染色法，只用一种染料使细菌染上颜色，观察细菌的形态。(二二)复染色法复染色法 用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性质的细菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。革兰氏染色法：不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：u染色反应呈蓝紫色的称为
4、革兰氏阳性细菌，用G+表示；u染色反应呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G表示。细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。(一)细菌的简单染色步骤 涂片干燥固定染色水洗干燥镜检1涂片 取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴一滴无菌蒸馏水，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从斜面挑取少量培养物与玻片上的水滴混匀后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。2干燥 涂片最好在室温下使其自然干燥，有时为了使之干得更快些，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。实验内容与步内容与步骤3
5、固定 手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的来回通过23次，共约23秒钟，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60）,放置待冷后，进行染色。4染色 在涂片薄膜上滴加染色液(石炭酸复红、草酸铵结晶紫或美蓝任选一种)一滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。5水洗 斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。6干燥 用吸水纸吸去涂片边缘的水珠，置于室温下自然干燥。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。7镜检(二二)细菌的革菌的革兰氏染色步氏染色步骤 涂涂片片干干燥燥固固定定初初染染水水洗洗媒媒染染水水洗洗脱脱色色水水洗洗复复染染水水洗洗干燥干燥观察察a取培养物分
6、别做涂片、干燥、固定，方法均与简单染色的相同。b用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。c加碘液媒染1min后水洗。d斜置载玻片，滴加95乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色 为止，大约需时2030s，随即水洗。e用蕃红染液复染1min，水洗。f用吸水纸吸掉水滴，在显微镜下观察。步骤1：用蒸馏水滴瓶滴一小滴蒸馏水于洁净的载玻片上 步骤2：用无菌操作法取少许培养物于蒸馏水滴上 步骤3：用接种环将培养物涂布成一薄层 步骤4：风干 步骤5：在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3-4次固定步骤6：结晶紫染色1分钟 步骤7：用蒸馏轻轻冲洗玻片 步骤8：革兰氏碘液染色1分钟，再用蒸馏水轻轻冲洗 步骤9：酒精脱色至下滴液为无
7、色，立即用蒸馏水冲洗 步骤10：番红复染1分钟，用蒸馏水轻轻冲洗 大肠杆菌（Escherichia coli）革兰氏染色图 革兰氏染色阴性杆菌（红色）金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（Staphylococcus Staphylococcus aureusaureus）革兰氏染色）革兰氏染色 革兰氏染色阳性球菌（紫色）注意事注意事项1革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须 严格把握脱色时间。2选用培养18-24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。3.干净的玻片、热固定、每一步水洗要彻底并且吸干等也是实验成功的关键。微生物制片微生物制片 染色染色 显微镜观察显微镜观察