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1、血常规血细胞分析仪直方图第1页，本讲稿共24页 血常规检查血常规检查 即全血细胞分析，可以对感染、炎症、手术后、血液即全血细胞分析，可以对感染、炎症、手术后、血液系统疾病、肝脾病等进行辅助诊断、监测治疗效果等系统疾病、肝脾病等进行辅助诊断、监测治疗效果等。第2页，本讲稿共24页标本采集与要求标本采集与要求抗凝剂抗凝剂：EDTA-K2静脉采血方法静脉采血方法：4小时内测定小时内测定毛细血管采血方法毛细血管采血方法：半小时内测定：半小时内测定手指血与静脉血有差异，条件允许尽可能静脉手指血与静脉血有差异，条件允许尽可能静脉采血采血尽可能同一体位（血红蛋白、血细胞比容、红尽可能同一体位（血红蛋白、血细
2、胞比容、红细胞计数于站位时增加）、一定时间和近似生细胞计数于站位时增加）、一定时间和近似生理条件下采血理条件下采血第3页，本讲稿共24页血细胞分析仪检测指标与临床应用血细胞分析仪检测指标与临床应用第4页，本讲稿共24页血细胞分析仪 血细胞分析仪实质上是指血细胞分析仪实质上是指对一定体积内血细胞数量及异对一定体积内血细胞数量及异质性进行分析的仪器，包括血质性进行分析的仪器，包括血细胞计数与分类、血红蛋白测细胞计数与分类、血红蛋白测定及网织红细胞计数等众多分定及网织红细胞计数等众多分析项目，是临床检验工作中最析项目，是临床检验工作中最常用的仪器。常用的仪器。第5页，本讲稿共24页 40年代末年代末
3、，美国的库尔特，美国的库尔特(W.H.Coulter)发明了电阻抗法粒子计发明了电阻抗法粒子计数技术的设计专利。数技术的设计专利。50年代初年代初，第一台血细胞分析仪，第一台血细胞分析仪(Coulter A型型)应用于临床检验。应用于临床检验。当时这种仪器为一个通道，仅能进行红细胞、白细胞计数，当时这种仪器为一个通道，仅能进行红细胞、白细胞计数，故称为血细胞计数仪或血球计数仪。故称为血细胞计数仪或血球计数仪。60年代年代，在原基础上增加一个比色系统，可同时测定白细胞数、，在原基础上增加一个比色系统，可同时测定白细胞数、红细胞数、血红蛋白浓度、平均红细胞体积和血细胞比容。红细胞数、血红蛋白浓度、
4、平均红细胞体积和血细胞比容。70年代年代，开发了血小板计数，此时可做全血细胞计数。，开发了血小板计数，此时可做全血细胞计数。第6页，本讲稿共24页70年代末年代末80年代中年代中，根据白细胞大小不同而产生的阻抗值或散射量的，根据白细胞大小不同而产生的阻抗值或散射量的不同，不同，已能对细胞进行分类已能对细胞进行分类(两分群、三分群或五分类两分群、三分群或五分类)，且一次，且一次可报告可报告1314个分析参数及红细胞计数、白细胞计数、血小板个分析参数及红细胞计数、白细胞计数、血小板计数三个直方图。计数三个直方图。80年代末年代末，应用流式细胞术，开发了网织红细胞计数仪。，应用流式细胞术，开发了网织
5、红细胞计数仪。90年代初年代初，网织红细胞检测技术应用到血细胞计数仪上。，网织红细胞检测技术应用到血细胞计数仪上。90年代中期年代中期研制出的多功能、多参数、多分类全自动血细胞分析仪及研制出的多功能、多参数、多分类全自动血细胞分析仪及检测的全自动化，把临床血液学检验提高到了一个全新的水平。检测的全自动化，把临床血液学检验提高到了一个全新的水平。第7页，本讲稿共24页按自动化程度可分为按自动化程度可分为半自动血细胞分析仪和全自动血细胞分半自动血细胞分析仪和全自动血细胞分析仪。析仪。半自动血细胞分析仪需在主机外匹配稀释器，采集的血标本经稀释器预稀半自动血细胞分析仪需在主机外匹配稀释器，采集的血标本
6、经稀释器预稀释后再上机检测。这类仪器工作效率低，吸样准确性差，多为手工加溶血素、释后再上机检测。这类仪器工作效率低，吸样准确性差，多为手工加溶血素、混匀等，其加入量及放置时间、因人为因素，随机误差较大，不利于质控，并混匀等，其加入量及放置时间、因人为因素，随机误差较大，不利于质控，并且易发生且易发生“半堵孔半堵孔”或或“堵孔堵孔”现象。现象。9090年代以来，在发达国家已被逐步淘年代以来，在发达国家已被逐步淘汰，国内用户也为数不多，趋于淘汰。汰，国内用户也为数不多，趋于淘汰。1.血细胞分析仪分型第8页，本讲稿共24页 全自动血细胞分析仪全自动血细胞分析仪运用了较先进的计算机技术和机械系统，运用
7、了较先进的计算机技术和机械系统，菜单式操作程序，条码阅读，自动吸取样品，血液在机器内部自动菜单式操作程序，条码阅读，自动吸取样品，血液在机器内部自动稀释，效率高，检测量准确，有利于质控，减少了操作者实验室感稀释，效率高，检测量准确，有利于质控，减少了操作者实验室感染的几率。且大部分采用表面活性剂法测血红蛋白，避免了氰化物染的几率。且大部分采用表面活性剂法测血红蛋白，避免了氰化物对环境的污染，是全面取代半自动血细胞分析仪的必然趋势。目前对环境的污染，是全面取代半自动血细胞分析仪的必然趋势。目前还有将全自动血细胞分析仪与自动涂片染色机、电脑及应用软件组还有将全自动血细胞分析仪与自动涂片染色机、电脑
8、及应用软件组合而成的血液分析工作站，将多台全自动血细胞分析仪、全自动网合而成的血液分析工作站，将多台全自动血细胞分析仪、全自动网织红细胞分析仪、自动涂片染色机、机械连接系统、电脑、高性能织红细胞分析仪、自动涂片染色机、机械连接系统、电脑、高性能应用软件组合为一体的血液分析流水线（如应用软件组合为一体的血液分析流水线（如HST-330HST-330模块式全自动模块式全自动血液分析流水线）等。血液分析流水线）等。第9页，本讲稿共24页按检测原理按检测原理电容型电容型：通过改变两电极之间电容量，获得脉冲信号进行计数。：通过改变两电极之间电容量，获得脉冲信号进行计数。光电型光电型：利用细胞和稀释液对光
9、的吸收度不同，使光敏元件在细胞通过时产生：利用细胞和稀释液对光的吸收度不同，使光敏元件在细胞通过时产生脉冲信号而计数。脉冲信号而计数。激光型激光型：细胞受到激光的照射产生光吸收、光散射、发射荧光，得到光学的、：细胞受到激光的照射产生光吸收、光散射、发射荧光，得到光学的、电子的信号进行计数。电子的信号进行计数。电阻抗型电阻抗型：利用血细胞的电阻大于电解质溶液：利用血细胞的电阻大于电解质溶液(稀释液稀释液)的电阻，细胞通过微的电阻，细胞通过微孔时两电极之间的阻抗值增大，产生电压脉冲信号而进行血细胞计数孔时两电极之间的阻抗值增大，产生电压脉冲信号而进行血细胞计数和体积测定。国内产品均为电阻抗型。和体
10、积测定。国内产品均为电阻抗型。联合检测型联合检测型：采用多种现代高科技技术，如利用电阻抗、激光、高频电磁波、：采用多种现代高科技技术，如利用电阻抗、激光、高频电磁波、流式细胞术和化学染色、特殊溶血剂等多方位联合检测同一个血细胞。此类仪流式细胞术和化学染色、特殊溶血剂等多方位联合检测同一个血细胞。此类仪器功能多，特异性强、速度快、获得参数多、对环境污染小。器功能多，特异性强、速度快、获得参数多、对环境污染小。第10页，本讲稿共24页2.2.电阻抗法血细胞分析仪电阻抗法血细胞分析仪 血细胞与等渗电解质溶液相比为相对的不良导体，其电血细胞与等渗电解质溶液相比为相对的不良导体，其电阻值大于稀释液的电阻
11、值。当血细胞通过检测器小孔管微孔阻值大于稀释液的电阻值。当血细胞通过检测器小孔管微孔的孔径感受区时，检测器内外电极之间的恒流源电路上电阻的孔径感受区时，检测器内外电极之间的恒流源电路上电阻值瞬间增大，造成两极之间电压的变化，产生一个电压脉冲值瞬间增大，造成两极之间电压的变化，产生一个电压脉冲信号。每次检测中产生的脉冲信号数，即相当于检测出的细信号。每次检测中产生的脉冲信号数，即相当于检测出的细胞数。胞数。第11页，本讲稿共24页 操作时，位于小孔两侧的电极操作时，位于小孔两侧的电极产生恒定电流。根据欧姆定律电产生恒定电流。根据欧姆定律电压变化与电阻变化成正比，电阻压变化与电阻变化成正比，电阻值
12、又同细胞体积成正比，值又同细胞体积成正比，血细胞血细胞体积越大，电压越高，体积越大，电压越高，在甄别器上在甄别器上的的脉冲幅度就越大脉冲幅度就越大，各种大小不，各种大小不同细胞产生的脉冲信号分别送入同细胞产生的脉冲信号分别送入仪器内电脑的各个通道，经运算仪器内电脑的各个通道，经运算得出各种细胞参数。目前，多数得出各种细胞参数。目前，多数仪器在给出细胞数据结果的同时仪器在给出细胞数据结果的同时还提供细胞群体大小分布情况图还提供细胞群体大小分布情况图形，称之为形，称之为细胞体积直方图细胞体积直方图。第12页，本讲稿共24页 血血细细胞胞分分析析仪仪在在进进行行细细胞胞分分析析时时，将将每每个个细细
13、胞胞的的脉脉冲冲根根据据其其体体积积大大小小分分配配并并存存储储在在相相应应的的体体积积通通道道中中，每每个个通通道道收收集集的的数数据据被被统统计计出出相相对对数数，表表示示在在Y Y轴轴上上，体体积积数数据据以以飞飞升升(fl)(fl)为为单单位位，表表示示在在X X轴轴上上。可可将将白白细细胞胞体体积积从从3030450fl450fl分分为为256256个个通通道道，每每个个通通道道1.64fl1.64fl，依依据据体体积积大大小小分分别别将将其其放放在在不不同同的的通通道道中中，得得到到白白细细胞胞体体积积分分布布直直方方图图。初初步步确确认认：第第一一群群是是小小细细胞胞区区，主主要
14、要是是淋淋巴巴细细胞胞，体体积积在在353590fl90fl之之间间；第第二二群群是是中中间间细细胞胞群群，主主要要是是单单核核细细胞胞，体体积积在在9090160fl160fl，；第第三三群群为为大大细细胞胞区区，主主要要是是中中性性粒粒细细胞胞，它分叶多，颗粒多，体积可大至它分叶多，颗粒多，体积可大至160fl160fl以上。以上。中间细胞中间细胞第13页，本讲稿共24页 血小板和红细胞共用一个小孔管。正常人红细胞体积和血小板体积有明血小板和红细胞共用一个小孔管。正常人红细胞体积和血小板体积有明显的界限。因此血小板计数准确容易。当血细胞悬液中含有异常血细胞（如显的界限。因此血小板计数准确容
15、易。当血细胞悬液中含有异常血细胞（如小红细胞）时，划分界限不清。为使血小板计数有较高的准确性，计算机对小红细胞）时，划分界限不清。为使血小板计数有较高的准确性，计算机对血小板和红细胞分布图进行判断，将血小板计数的上限阈值判定线放在红细血小板和红细胞分布图进行判断，将血小板计数的上限阈值判定线放在红细胞和血小板分布图交叉部分的最低处计数胞和血小板分布图交叉部分的最低处计数 。第14页，本讲稿共24页各项红细胞指数的检测原理各项红细胞指数的检测原理:根据仪器检测的根据仪器检测的RBCRBC、HCTHCT和和HbHb的数据，经仪器内存程序换算出红细胞平均体积的数据，经仪器内存程序换算出红细胞平均体积
16、(MCV)(MCV)、红细、红细胞平均血红蛋白的含量胞平均血红蛋白的含量(MCH)(MCH)和红细胞平均血红蛋白浓度和红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)(MCHC)。红细胞体积分布宽度红细胞体积分布宽度(RDW)(RDW)由血细胞分析仪在检测红细胞数量由血细胞分析仪在检测红细胞数量的过程中的过程中 ,同时测量红细胞体积大小的差异获得，是反映外周血红细同时测量红细胞体积大小的差异获得，是反映外周血红细胞体积异质性的参数。胞体积异质性的参数。RDWRDW能直接、客观、及时地反映红细胞大能直接、客观、及时地反映红细胞大小不等的程度，对贫血的诊断有重要意义。小不等的程度，对贫血的诊断有重要意义。第15
17、页，本讲稿共24页血红蛋白测定原理血红蛋白测定原理:在稀释的血液中加入溶血剂后在稀释的血液中加入溶血剂后红细胞被溶解，释放出血红蛋白红细胞被溶解，释放出血红蛋白(Hb)(Hb)，后者与溶血剂中有，后者与溶血剂中有关成分结合形成关成分结合形成HbHb衍生物，进入衍生物，进入HbHb测试系统，在特定波测试系统，在特定波长长(一般在一般在530530550nm)550nm)下比色，吸光度的变化与液体下比色，吸光度的变化与液体中中H H含量成正比，仪器便可显示其浓度。含量成正比，仪器便可显示其浓度。第16页，本讲稿共24页3.3.血细胞直方图的临床应用血细胞直方图的临床应用直方图是血细胞分析仪用电阻抗
18、原理对血直方图是血细胞分析仪用电阻抗原理对血细胞进行检测，以细胞体积为横坐标，细细胞进行检测，以细胞体积为横坐标，细胞的相对数量为纵坐标，表示某一种细胞胞的相对数量为纵坐标，表示某一种细胞数量分布情况，可反映细胞体积大小异质数量分布情况，可反映细胞体积大小异质性。性。第17页，本讲稿共24页白细胞直方图白细胞直方图 1、正常白细胞直方图、正常白细胞直方图 第18页，本讲稿共24页2 2、异常白细胞直方图、异常白细胞直方图 第19页，本讲稿共24页第20页，本讲稿共24页第21页，本讲稿共24页红细胞直方图红细胞直方图 不同类型贫血红细胞直方图不同类型贫血红细胞直方图第22页，本讲稿共24页血小板直方图血小板直方图各类血小板直方图各类血小板直方图第23页，本讲稿共24页第24页，本讲稿共24页