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1、高效液相色谱第1页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30第三章第三章高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法一、一、高效液相色谱高效液相色谱仪仪HPLC二、高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱法的特点feature of HPLC三、流程及主要部件三、流程及主要部件general process and main assembly of HPLC第一节第一节第一节第一节高效液相色谱的特高效液相色谱的特高效液相色谱的特高效液相色谱的特点与仪器点与仪器点与仪器点与仪器high performance liquid high performance liquid chromatogra
2、phchromatographfeature and instrument feature and instrument of HPLCof HPLC第2页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatograph第3页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30液相色谱仪（液相色谱仪（2）第4页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30液相色谱仪（液相色谱仪（3）第5页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30液相色谱仪（液相色谱仪（4）第6页，本
3、讲稿共21页2022/11/302022/11/30二、二、高效液相色谱法的特点高效液相色谱法的特点 feature of HPLC 特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。第7页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30三、流程及主要部件三、流程及主要部件 process and main assembly of HPLC1.1.流
4、程流程第8页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/302.主要部件主要部件(1)(1)高压输液泵高压输液泵高压输液泵高压输液泵 主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：15015035010350105 5 PaPa。为为了了获获得得高高柱柱效效而而使使用用粒粒度度很很小小的的固固定定相相（1010mm），液液体体的的流流动动相相高高速速通通过过时时，将将产产生生很很高高的的压压力力，因因此此高高压压、高高速是高效液相色谱的特点之一。速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性第9页，本讲稿共21
5、页2022/11/302022/11/30(2)梯度淋洗装置梯度淋洗装置外梯度外梯度外梯度外梯度:利用两台高压输液利用两台高压输液泵，将两种不同极性的泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进梯度混合室，混合后进入色谱柱。入色谱柱。内梯度内梯度内梯度内梯度:一台高压泵一台高压泵,通过通过比例调节阀比例调节阀,将两种或将两种或多种不同极性的溶剂多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高按一定的比例抽入高压泵中混合。压泵中混合。第10页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30(3)进样装置进样装置 流路中为高压力工作状态，流路中为高压力工作状态，通常
6、使用耐高压的六通阀进样装置，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：其结构如图所示：第11页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30(4)高效分离柱高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径1 16 6 mmmm，柱长柱长柱长柱长5 540 40 cmcm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。第12页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30(5)液相色谱检测器液相色谱
7、检测器 a.a.紫外检测器紫外检测器紫外检测器紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：特点：特点：特点：灵敏度高；灵敏度高；线形范围高；线形范围高；流通池可做的很小（流通池可做的很小（1 1mm 10mm mm 10mm，容积容积 8 8LL）；）；对流动相的流速和温度变化不敏感；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。可用于梯度洗脱。第13页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30b.b.光电二极管阵列检测器
8、光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；光光光光电电电电二二二二极极极极管管管管阵阵阵阵列列列列检检检检测测测测器器器器：10241024个个二二极极管管阵阵列列，各各检检测测特特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。第14页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30第15页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器第16页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30c.示差折光检测器示差
9、折光检测器（differential refractive index detector）除紫外检测器之外应用最多的检测器；除紫外检测器之外应用最多的检测器；可可连连续续检检测测参参比比池池和和样样品品池池中中流流动动相相之之间间的的折折光光指指数数差差值。差值与浓度呈正比；值。差值与浓度呈正比；通通用用型型检检测测器器（每每种种物物质质具具有有不不同同的折光指数）；的折光指数）；灵灵敏敏度度低低、对对温温度度敏敏感感、不不能能用用于于梯梯度洗脱；度洗脱；偏偏转转式式、反反射射式式和干涉型三种；和干涉型三种；第17页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30示差折光检测器示差折光
10、检测器第18页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30d.荧光检测器荧光检测器（fluorescence detector）高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；对对多多环环芳芳烃烃，维维生生素素B B、黄黄曲曲霉霉素素、卟卟啉啉类类化化合合物物、农农药药、药药物物、氨氨基基酸酸、甾甾类类化合物等有响应；化合物等有响应；第19页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30电导检测器结构结构第20页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30响应特性选择性检测器，对离子型化合物有响应选择性检测器，对离子型化合物有响应灵敏度高灵敏度高受温度的影响大受温度的影响大不能梯度洗提不能梯度洗提第21页，本讲稿共21页2022/11/302022/11/30