实验室消毒与压力蒸汽灭菌.ppt

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1、实验室消毒与压力蒸汽灭菌 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望内容n n引言n n消毒方法与消毒程序的确定n n消毒效果的实验室评价n n压力蒸汽灭菌器n n实验室医疗废物的处理一、引言1、欣弗事件老总自杀 2006年11月1日晚，肇事企业安徽华源生物药业有限公司(以下简称华源药业)原总经理裘祖贻，在公司办公室自杀身亡。据推测，其自杀原因可能是承受不了“欣弗”事件的重压。事件概要n n部分患者在使用华源药业生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液（俗称“欣弗”）

2、后，出现胸闷、腹泻、过敏性休克等严重不良症状。n n事件波及全国10多个省份，造成近百人不良反应，并导致11人死亡。n nSFDA事后检测发现该注射液无菌检验不合格，热源质检测不合格。不合格原因n n经国家药监部门调查，华源药业在生产“欣弗”过程中，未按批准的工艺参数灭菌，影响了灭菌效果，给公众健康和生命安全带来了严重威胁。n n批准的灭菌程序：105，30minn n实际的灭菌程序：101101104104，1min-4min 1min-4min 启示n n105，30min是不是一个好的灭菌程序？n n应该按照批准的好的灭菌程序操作！2、SARS的实验室感染钟南山的说法-1 钟南山在钟南山

3、在20062006年年8 8月英国医学杂志中文版月英国医学杂志中文版对我国实验室感染有这样的描述：对我国实验室感染有这样的描述：2004 2004年年3 3月，在病毒所工作的某研究生于月，在病毒所工作的某研究生于3 3月月2525日出现肺炎症状，在回安徽合肥探亲时被诊断日出现肺炎症状，在回安徽合肥探亲时被诊断为为SARSSARS，她感染了，她感染了7 7个人，包括其父母、在北京个人，包括其父母、在北京和合肥一起工作的同事。继她感染和合肥一起工作的同事。继她感染2323天之后，在天之后，在同所工作的另一人出现同样症状，随后被诊断为同所工作的另一人出现同样症状，随后被诊断为SARSSARS。这两个

4、病例由被污染的同一实验室感染，。这两个病例由被污染的同一实验室感染，但没有相互传染。此后，研究所被立即关闭，但没有相互传染。此后，研究所被立即关闭，9 9名名病人和病人和200200多名密切接触者被隔离检疫，没有再多名密切接触者被隔离检疫，没有再发现病例。发现病例。钟南山的说法-2 钟南山在2006年8月英国医学杂志中文版对我国的该起实验室感染有这样的评论：1、非专业人员介入SARS研究项目；2、使用未确定功效的方法灭活病毒；3、P3实验室的正确操作可能有问题；4、对发热病人没有进行监测。“急需制定严格的科学规定，对已定政策必须执行并监测是否适宜。”3、妇幼医院龟分枝杆菌感染事件 2006年十

5、月出版，医院感染管理办法编写组的医院感染管理办法释义及适用指南这样描述：1998年4至5月，某市妇儿医院发生了严重的医院感染爆发事件，在该院接受手术的292例病人中，共发生术后伤口以龟分枝杆菌为主要病原体的混合感染158例，切口感染率为54.11%。通过对手术过程各个环节的深入调查后证实，直接感染源为手术所使用的刀片和剪刀，而浸泡刀片和剪刀所使用的Lj-强化戊二醛消毒灭菌剂因配置错误、使用不当以及消毒剂本身浓度和产品说明存在的问题导致手术所用器械未达到灭菌效果。实验室消毒的特点n n是与实验室生物安全相关的大事n n消毒的物品品种多、事前验证困难n n影响消毒效果的因素多n n消毒效果的最终确

6、认需要较长时间n n非专业人士不易明白实验室消毒的质量管理n n制定有一个好的消毒灭菌程序或方案 （plan）n n按制定的消毒灭菌程序或方案进行操作（do）n n采取正确的方法进行消毒效果评价、监测 （check）n n根据评价结果改进工作 （advance）二、消毒灭菌方案的制定消毒方案应包括的内容n n明确消毒目的（why)n n确定消毒对象和目标微生物(what)n n明确消毒的时机(when)n n确定消毒方法与选择合适的消毒因子(how)n n人员(who)n n对消毒方案进行评估1、消毒的目的n n保护工作人员健康，防止实验室感染；n n保证试验正常进行；n n避免污染环境。2、

7、确定消毒对象和目标微生物 对 象：对实验过程中可能的污染物应进行消毒处理。包括各种实验物品、个人防护用品、空气、实验室的环境表面、废水、实验室废物和实验人员的身体（特别是手）等。微生物：应考虑对实验微生物有效，灭菌时应以细菌芽孢为指标，必要时以朊病毒做指标。3、明确消毒的时机n n及时性n n可操作性n n其他措施的替代补偿作用4、如何确定消毒方法选择合适的消毒因子n n确保有效n n对健康和环境的影响小n n合法n n原则上使用有许可批件的消毒产品n n价格可以接受影响消毒效果的各种因素影响消毒效果的各种因素n n 病原体抗力病原体抗力病原体抗力病原体抗力n n 传播方式传播方式传播方式传播

8、方式n n 消毒因子消毒因子消毒因子消毒因子n n 消毒对象消毒对象消毒对象消毒对象n n 消毒环境消毒环境消毒环境消毒环境n n 消毒时间消毒时间消毒时间消毒时间n n 实施过程实施过程实施过程实施过程病原体对常见消毒因子的抗力病原体对常见消毒因子的抗力芽胞芽胞芽胞芽胞|分枝杆菌分枝杆菌分枝杆菌分枝杆菌|亲水病毒或小病毒亲水病毒或小病毒亲水病毒或小病毒亲水病毒或小病毒|真菌真菌真菌真菌|繁殖体繁殖体繁殖体繁殖体|亲脂病毒或中等大小的病毒亲脂病毒或中等大小的病毒亲脂病毒或中等大小的病毒亲脂病毒或中等大小的病毒消毒因子n n物理因子：热 射线、微波和激光 过滤、吸附与清洗n n化学因子 现产现用

9、的消毒因子 商品化的消毒剂：高、中、低消消毒剂高效消毒剂高效消毒剂杀灭一切微生物中效消毒剂中效消毒剂 杀灭分枝杆菌、真菌、病毒及繁殖体低效消毒剂低效消毒剂 杀灭繁殖体和亲脂病毒依据微生物(抗力、危害性)选择消毒、灭菌的方法1)芽孢、孢子、分枝杆菌污染：高水平消毒法2)经血传播病原体（乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒等）污染：高水平消毒法3)真菌、亲水病毒、螺旋体、支原体、衣原体污染：中水平消毒法4）一般细菌和亲脂病毒污染：中/低水平消毒法5）较多有机物的物品：增加消毒剂量6）微生物污染严重时：增加消毒剂量 根据物品性质选择消毒方法根据物品性质选择消毒方法1）耐高温、耐湿度的物品和器材：压

10、力蒸汽灭菌2)耐高温的玻璃器材、油剂类和干粉：干热灭菌3)不耐热、不耐湿物品：环氧乙烷或低温蒸汽甲醛气体消毒、灭菌4)金属器械：使用的消毒剂应选择对金属基本无腐蚀的消毒剂。5)选择表面消毒方法：光滑表面可选择紫外线消毒器近距离照射，或液体消毒剂擦拭；多孔材料表面可采用喷雾消毒法。过氧乙酸n n广谱、高效，对金属及织物有腐蚀性，受有机物广谱、高效，对金属及织物有腐蚀性，受有机物影响大，稳定性差影响大，稳定性差(市场上以二元包装为主市场上以二元包装为主)。n n适用于耐腐蚀物品、环境及皮肤等的消毒。适用于耐腐蚀物品、环境及皮肤等的消毒。n n消毒方法：浸泡、擦拭、喷洒、喷雾、熏蒸。消毒方法：浸泡、

11、擦拭、喷洒、喷雾、熏蒸。n n浸泡、擦拭：浸泡、擦拭：0.05%(0.05%(芽孢用芽孢用1%)1%)过氧乙酸过氧乙酸5min5min。用无菌蒸馏水冲洗擦干后使用。用无菌蒸馏水冲洗擦干后使用。n n喷洒：一般表面用喷洒：一般表面用0.2%0.2%0.4%0.4%过氧乙酸喷洒作过氧乙酸喷洒作用用303060min60min。n n喷雾：喷雾：2%2%过氧乙酸过氧乙酸8ml/m38ml/m3。n n熏蒸：熏蒸：15%15%过氧乙酸过氧乙酸7ml/m37ml/m3。注意事项注意事项1)易燃易爆：包装、储存、运输、使用。2)不稳定：保存期、用前应测定有效含量、稀释液临用前配制。3)腐蚀性：消毒对象，即

12、时用清水冲洗。4)刺激性：谨防溅入眼内或皮肤上，溅上，即时用冲洗，空气消毒在无人的情况下使用。5)有机物影响：消毒被血液、脓液等污染的物品时，需适当延长作用时间。灭菌剂，具有对金属腐蚀性小，受有机物影响小等特点。适用于不耐热的医疗器械和精密仪器等消毒与灭菌。灭菌处理：常用浸泡法，浸泡10h后取出，用无菌水冲洗干净，并无菌擦干后使用。消毒：用浸泡法，有时用熏蒸法。浸泡20min45min，取出后用灭菌水冲洗干净并擦干。不宜用于空气消毒，也不宜用于普通物体表面的消毒！戊二醛甲醛n n不理想但不可代替的熏蒸消毒剂n n不理想：致癌、刺激性、作用慢n n不可代替：空气消毒和全房间的消毒n n消毒作用特

13、点：消毒作用强且可靠、弥散性较好、穿透性较差。n n计量：36%的甲醛40ml/m3，作用12小时含氯消毒剂n n是一大类，有漂白粉、漂白粉精、次氯酸钠、三氯磷酸钠、是一大类，有漂白粉、漂白粉精、次氯酸钠、三氯磷酸钠、二氯异氰尿酸钠、三氯异氰尿酸等，可为粉剂、片剂、或二氯异氰尿酸钠、三氯异氰尿酸等，可为粉剂、片剂、或液体。杀菌谱广，对细菌繁殖体、病毒、真菌孢子及细菌液体。杀菌谱广，对细菌繁殖体、病毒、真菌孢子及细菌芽孢都有较强杀灭作用。芽孢都有较强杀灭作用。n n影响因素影响因素（1 1）温度：温度低时可降低杀菌作用。）温度：温度低时可降低杀菌作用。（2 2）酸碱度：酸性条件下的杀菌作用要比碱

14、性条件下强。）酸碱度：酸性条件下的杀菌作用要比碱性条件下强。（3 3）有机物：可降低杀菌能力。）有机物：可降低杀菌能力。n n应注意其腐蚀和漂白作用。操作时应做好个人防护。应保应注意其腐蚀和漂白作用。操作时应做好个人防护。应保存在密闭容器内，放在阴凉、干燥、通风处。存在密闭容器内，放在阴凉、干燥、通风处。二氧化氯n nClO2ClO2，不稳定，常在临使用时生产或在二氧化氯稳定液，不稳定，常在临使用时生产或在二氧化氯稳定液中加入活化剂。用于饮用水消毒时，一般认为其不产生三中加入活化剂。用于饮用水消毒时，一般认为其不产生三卤化物，是一种较含氯消毒剂更安全的新型消毒剂。卤化物，是一种较含氯消毒剂更安

15、全的新型消毒剂。n n杀菌能力：广谱、高效、速效，能杀灭各种微生物，包括杀菌能力：广谱、高效、速效，能杀灭各种微生物，包括细菌繁殖体、病毒、真菌、分支杆菌和芽孢等。细菌繁殖体、病毒、真菌、分支杆菌和芽孢等。n n影响因素和注意事项影响因素和注意事项 （1 1）消毒效果易受有机物影响。（）消毒效果易受有机物影响。（2 2）pHpH质明显影响消质明显影响消毒效果，毒效果，pHpH值高时消毒能力下降。（值高时消毒能力下降。（3 3）二氧化氯活化液）二氧化氯活化液和稀释液不稳定，应现配现用。（和稀释液不稳定，应现配现用。（4 4）对金属有腐蚀性，）对金属有腐蚀性，对织物有漂白作用。对织物有漂白作用。n

16、 n应用：适用于医疗器械、餐（茶）具、饮用水及环境表面应用：适用于医疗器械、餐（茶）具、饮用水及环境表面和空气等消毒。常用消毒方法有浸泡、擦拭、喷洒等。和空气等消毒。常用消毒方法有浸泡、擦拭、喷洒等。新洁尔灭n n化学名称为苯扎溴铵，分子式为化学名称为苯扎溴铵，分子式为C21H38NBr C21H38NBr。具有芳香。具有芳香味，呈淡黄色胶状，易溶于水，具有表面活性作用，振摇味，呈淡黄色胶状，易溶于水，具有表面活性作用，振摇可产生大量泡沫，有一定的去污能力，腐蚀性小，消毒性可产生大量泡沫，有一定的去污能力，腐蚀性小，消毒性能稳定，抑菌能力强。能稳定，抑菌能力强。n n杀菌能力：对化脓性病原菌有

17、良好杀灭作用，对革兰阳性杀菌能力：对化脓性病原菌有良好杀灭作用，对革兰阳性菌的杀灭作用要大于阴性细菌。菌的杀灭作用要大于阴性细菌。n n注意事项：注意事项：n n(1)(1)苯扎溴铵与其他季胺盐类一样，极易被多种物体吸附，苯扎溴铵与其他季胺盐类一样，极易被多种物体吸附，浸泡液的浓度可随消毒物品数量增多而逐渐降低，因此应浸泡液的浓度可随消毒物品数量增多而逐渐降低，因此应该及时更换消毒液。该及时更换消毒液。n n(2)(2)不得与肥皂或其它阴离子洗涤剂合用。不得与肥皂或其它阴离子洗涤剂合用。n n(3)(3)不宜用于粪、尿、痰等的消毒。不宜用于粪、尿、痰等的消毒。臭氧n nOO3 3，强氧化剂，常

18、温为爆炸性气体。水中溶解度约为，强氧化剂，常温为爆炸性气体。水中溶解度约为3%3%。有消毒后无残留的优点，适于用于饮用水、果蔬、餐饮具有消毒后无残留的优点，适于用于饮用水、果蔬、餐饮具等的消毒。稳定性极差，只能现产现用。臭氧杀灭力强，等的消毒。稳定性极差，只能现产现用。臭氧杀灭力强，并可破坏肉毒毒素。并可破坏肉毒毒素。n n影响因素：温度、湿度、有机物、影响因素：温度、湿度、有机物、pHpH、水的浑浊度等影、水的浑浊度等影响杀菌作用。响杀菌作用。n n注意事项：室内空气中允许浓度为注意事项：室内空气中允许浓度为0.16mg/m0.16mg/m3 3。对金属。对金属有腐蚀性，对橡胶有加速老化的作

19、用，对织物和各种有色有腐蚀性，对橡胶有加速老化的作用，对织物和各种有色物品有漂白褪色作用。物品有漂白褪色作用。n n水消毒：一般加入量水消毒：一般加入量 0.5 mg/L 0.5 mg/L1.5mg/L1.5mg/L，污染较重时，污染较重时可提高到可提高到3mg/L3mg/L6mg/L6mg/L，使水中臭氧浓度在，使水中臭氧浓度在0.1 mg/L0.1 mg/L0.5mg/L0.5mg/L，维持，维持5min5min10min10min。n n空气消毒：一般用空气消毒：一般用30mg/m30mg/m3 3 的臭氧，作用的臭氧，作用15min15min30min30min。n n物体表面消毒：，

20、臭氧浓度物体表面消毒：，臭氧浓度12mg/L12mg/L，作用时间，作用时间15min15min20min20min。环氧乙烷在低温下为无色液体，具有芳香醚味，沸点为10.8，嗅阈值为760mg/m31064mg/m3，密度为1.52；易燃易爆，气体穿透力强。气体杀菌力强，属灭菌剂。不损害物品且穿透力很强，不宜用一般方法灭菌的物品均可用环氧乙烷消毒和灭菌。例如，电子仪器、光学仪器、医疗器械、书籍、文件、皮毛、棉、化纤、塑料制品、木制品、陶瓷及金属制品、内镜、透析器和一次性使用的诊疗用品等。环氧乙烷灭菌是目前最主要的低温灭菌方法之一。消消 毒毒 剂剂 的的 施施 药药 方方 法法普通喷雾消毒法普

21、通喷雾消毒法 用普通喷雾器（如各种农用喷雾器）喷洒消毒液进行表面消毒的处理，喷洒液体雾粒直径多在 100m 以上。1.适用范围 物体（品）表面、室内墙面和地面等。2.使用要求 按先上后下、先左后右的顺序依次喷洒。喷洒量可依据表面的性质而定，以消毒剂溶液可均匀覆盖表面至全部湿润为度。3.注意事项 喷洒有刺激性或腐蚀性消毒剂时，消毒人员应配戴防护口罩、眼镜，穿防护服。气溶胶喷雾消毒法气溶胶喷雾消毒法 用气溶胶喷雾器喷雾消毒液进行空气或物体表面消用气溶胶喷雾器喷雾消毒液进行空气或物体表面消毒的处理方法，雾粒直径毒的处理方法，雾粒直径20m20m以下者占以下者占90%90%以上。以上。由于所喷雾粒小，

22、浮于空气中易蒸发，可兼收喷雾和由于所喷雾粒小，浮于空气中易蒸发，可兼收喷雾和熏蒸之效。熏蒸之效。1 1、适用范围、适用范围 室内空气和物体表面。室内空气和物体表面。2 2、使用要求、使用要求 按自上而下、由左向右顺序喷雾。喷雾按自上而下、由左向右顺序喷雾。喷雾量以消毒剂溶液可均匀覆盖在物品表面或消毒液的雾量以消毒剂溶液可均匀覆盖在物品表面或消毒液的雾团充满空间为度。消毒结束后通风，去除空气中残留团充满空间为度。消毒结束后通风，去除空气中残留的消毒液的雾粒及气味。的消毒液的雾粒及气味。3 3、注意事项、注意事项 同普通喷雾消毒法，应特别注意防止消同普通喷雾消毒法，应特别注意防止消毒剂气溶胶进入呼

23、吸道，应使用可靠的喷雾器。毒剂气溶胶进入呼吸道，应使用可靠的喷雾器。擦拭消毒法擦拭消毒法n n用布或其它擦拭物浸以消毒剂溶液，擦拭物体表用布或其它擦拭物浸以消毒剂溶液，擦拭物体表面。面。1 1、适用范围、适用范围 适用于各种器械、装备和实验台等物适用于各种器械、装备和实验台等物体表面。体表面。2 2、使用要求、使用要求 用干净的布或其它物品浸消毒剂溶液，用干净的布或其它物品浸消毒剂溶液，依次往复擦拭拟消毒物品表面，作用至所用消毒依次往复擦拭拟消毒物品表面，作用至所用消毒剂要求的时间后，再用清水擦洗，去除残留消毒剂要求的时间后，再用清水擦洗，去除残留消毒剂。剂。3 3、注意事项、注意事项 不耐湿

24、物品表面不可使用该方法；擦不耐湿物品表面不可使用该方法；擦拭时应防止遗漏；污物可导致消毒剂有效浓度下拭时应防止遗漏；污物可导致消毒剂有效浓度下降，应适时更新消毒液。降，应适时更新消毒液。浸泡消毒法浸泡消毒法 将待消毒物品全部浸没于消毒剂溶液内。将待消毒物品全部浸没于消毒剂溶液内。1 1、适用范围、适用范围 适用于耐湿器械特别是玻璃器皿、衣适用于耐湿器械特别是玻璃器皿、衣物等。物等。2 2、使用要求、使用要求 对有管腔物品应使管腔内充满消毒剂对有管腔物品应使管腔内充满消毒剂溶液。消毒或灭菌至要求的作用时间，应及时取溶液。消毒或灭菌至要求的作用时间，应及时取出消毒物品用清水或无菌水清洗，去除残留消

25、毒出消毒物品用清水或无菌水清洗，去除残留消毒剂。剂。3 3、注意事项、注意事项 使用可连续浸泡消毒的消毒液时，消使用可连续浸泡消毒的消毒液时，消毒物品或器械应洗净沥干后再放入消毒液中。毒物品或器械应洗净沥干后再放入消毒液中。熏蒸消毒熏蒸消毒 指一定密闭空间如密闭的房间或专用消毒柜（或箱）与消毒袋中，用消毒剂气体（如环氧乙烷、甲醛）对物品进行消毒或灭菌的处理方法。1、适用于畏湿怕热和怕腐蚀物品、器具。2、甲醛熏蒸消毒不适用于包装物品的消毒。5、人员n n实验室操作人员n n专门的清洁消毒人员n n专门的压力蒸汽灭菌器操作人员三、消毒效果的实验室评价方法重复试验要求n n消毒效果：重复3次n n灭

26、菌效果：重复5次试验消毒剂量的设定n n浓度：最低使用浓度n n时间：最短消毒时间n n消毒方法按实际使用时的方法目标微生物1、试验微生物，必要时需加入干扰物。2、细菌芽孢，必要时需加入干扰物。残留消毒剂的去除n n过滤法n n稀释法n n离心法n n层析法n n电泳法n n中和法n n复合方法中和剂的筛选第1组 消毒剂+菌悬液 培养第2组 消毒剂+菌悬液+中和剂 培养第3组 中和剂+菌悬液 培养第4组 （消毒剂+中和剂）+菌液 培养第5组 稀释液+菌悬液 培养第6组 稀释液+中和剂+培养基 培养中和剂合格的标准（1 1）第第 1 1 组无试验菌，或仅有极少数试验菌菌落组无试验菌，或仅有极少数

27、试验菌菌落生长。生长。（2 2）第第 2 2 组有较第组有较第 1 1 组为多，但较第组为多，但较第 3 3、4 4、5 5（组）为少的试验菌菌落生长，并符合表（组）为少的试验菌菌落生长，并符合表 2-1 2-1 要求者。要求者。（3 3）第第 3 3、4 4、5 5（组）有相似量试验菌生长，悬（组）有相似量试验菌生长，悬液试验在液试验在1107 cfu/ml1107 cfu/ml5107 cfu/ml5107 cfu/ml之间，之间，载体试验在载体试验在 5105 cfu/5105 cfu/片片5105106 6 cfu/cfu/片片 之之间。其组间菌落数误差率应不超过间。其组间菌落数误差率

28、应不超过 15%15%。结果判定n n目标微生物不得检出四、压力蒸汽灭菌四、压力蒸汽灭菌压力蒸汽灭菌器是所有灭菌器中历史最久、应用最广、价格最便宜的灭菌设备之一，适用于耐高温、耐高湿物品的灭菌，也适合处理含微生物的废水和固体废物。不能用于凡士林等油类和粉剂的灭菌。压力蒸汽灭菌器的种类n n按冷空气排放方式：下排气按冷空气排放方式：下排气 预真空预真空n n按蒸汽来源按蒸汽来源 外来：集中供汽外来：集中供汽 随灭菌器的电蒸汽锅炉供气随灭菌器的电蒸汽锅炉供气 自身：加热灭菌锅内的水产生蒸汽自身：加热灭菌锅内的水产生蒸汽n n按门的多寡：按门的多寡：单侧开门单侧开门 双侧开门双侧开门n n按蒸汽管的

29、位置：按蒸汽管的位置：套层式套层式 套管式套管式n n按灭菌器的形状大小按灭菌器的形状大小 大型、小型大型、小型 立式、卧式、台式、移动式立式、卧式、台式、移动式 普通的压力蒸汽灭菌器在设计时一般不考虑排出的冷普通的压力蒸汽灭菌器在设计时一般不考虑排出的冷空气对环境的污染，但处理有传染性的物品时需要对冷空空气对环境的污染，但处理有传染性的物品时需要对冷空气进行消毒处理，特别是生物安全实验室处理试验废物的气进行消毒处理，特别是生物安全实验室处理试验废物的压力蒸汽灭菌器在排气管道上都应该有冷空气消毒处理装压力蒸汽灭菌器在排气管道上都应该有冷空气消毒处理装置。置。下排气式压力蒸汽灭菌器灭菌原理 为重

30、力置换式压力蒸汽灭菌器 其灭菌是利用重力置换的原理，使热蒸汽在灭菌器中从上而下，将冷空气由下排气孔排出，排出的冷空气由饱和蒸汽取代，利用蒸汽释放的潜热使物品达到灭菌。利用机械抽真空的方法，使灭菌柜室内形成负压，蒸汽得以迅速穿透到物品内部进行灭菌。蒸汽压力达205.8kPa(2.1kg/cm2)，温度达132或以上，开始灭菌，到达灭菌时间后，抽真空使灭菌物品迅速干燥。根据一次性或多次抽真空的不同，分为预真空和脉动真空二种，后者因多次抽真空，空气排除更彻底，效果更可靠。预真空压力蒸汽灭菌器灭菌原理灭菌物品的包装n n1)1)包装材料应允许物品内部空气的排出和蒸汽的透入。市售普通铝饭盒与搪包装材料应

31、允许物品内部空气的排出和蒸汽的透入。市售普通铝饭盒与搪瓷盒，不得用于装放待灭菌的物品，应用自动启闭式或带通气孔的器具装放；瓷盒，不得用于装放待灭菌的物品，应用自动启闭式或带通气孔的器具装放；n n2)2)常用的包装材料包括全棉布、一次性无纺布、一次性复合材料常用的包装材料包括全棉布、一次性无纺布、一次性复合材料(如纸塑包如纸塑包装装)、牛皮纸、带孔的金属或玻璃容器等。新包装材料在使用前，应先用生、牛皮纸、带孔的金属或玻璃容器等。新包装材料在使用前，应先用生物指示物验证灭菌效果后方可使用。包装材料使用前应仔细检查有无残缺破物指示物验证灭菌效果后方可使用。包装材料使用前应仔细检查有无残缺破损；损；

32、n n3)3)下排气式的物品包，体积不得超过下排气式的物品包，体积不得超过303025cm303025cm3 3；预真空的物品包，；预真空的物品包，体积不得超过体积不得超过303050cm303050cm3 3。否则应该延长灭菌时间；。否则应该延长灭菌时间；n n4)4)盘、盆、碗等器皿类物品，尽量单个包装；包装时应将盖打开；若必须多盘、盆、碗等器皿类物品，尽量单个包装；包装时应将盖打开；若必须多个包装在一起时，所用器皿的开口应朝向一个方向；摞放时，器皿间用吸湿个包装在一起时，所用器皿的开口应朝向一个方向；摞放时，器皿间用吸湿毛巾或纱布隔开，以利蒸汽渗入；毛巾或纱布隔开，以利蒸汽渗入；n n5

33、)5)灭菌物品能拆卸的必须拆卸，如对注射器进行包装时，管芯应抽出。必须灭菌物品能拆卸的必须拆卸，如对注射器进行包装时，管芯应抽出。必须暴露物品的各个表面（如剪刀和血管钳必须充分撑开）以利灭菌因子接触所暴露物品的各个表面（如剪刀和血管钳必须充分撑开）以利灭菌因子接触所有物体表面。有筛孔的容器，应将盖打开，开口向下或侧放；有物体表面。有筛孔的容器，应将盖打开，开口向下或侧放；n n7)7)物品捆扎不宜过紧。物品捆扎不宜过紧。灭菌物品的装载n n1)1)下排气灭菌器的装载量不得超过柜室内容量的下排气灭菌器的装载量不得超过柜室内容量的80%80%；预真；预真空灭菌器的装载量不得超过柜室容积空灭菌器的装

34、载量不得超过柜室容积90%90%，且不得小于柜室容，且不得小于柜室容积的积的10%10%和和5%5%，以防止，以防止“小装量效应小装量效应”；n n2)2)应尽量将同类物品放在一起灭菌，若必须将不同类物品装放应尽量将同类物品放在一起灭菌，若必须将不同类物品装放在一起，则以最难达到灭菌物品所需的温度和时间为准；在一起，则以最难达到灭菌物品所需的温度和时间为准；n n3)3)物品装放时，上下左右相互间均应间隔一定距离以利蒸汽置物品装放时，上下左右相互间均应间隔一定距离以利蒸汽置换空气；大型灭菌器，物品应放于柜室或推车上的载物架上；换空气；大型灭菌器，物品应放于柜室或推车上的载物架上；无载物架的中小

35、型灭菌器，可将物品放于网篮中；无载物架的中小型灭菌器，可将物品放于网篮中；n n4)4)难于灭菌的物品放在上层，较易灭菌的物品放在下层；金属难于灭菌的物品放在上层，较易灭菌的物品放在下层；金属物品放下层，织物包放上层，物品装放不能贴靠门和四壁，以物品放下层，织物包放上层，物品装放不能贴靠门和四壁，以防吸入较多的冷凝水；防吸入较多的冷凝水；n n5)5)金属包应平放，盘、碟、碗等应处于竖立的位置；纤维织物金属包应平放，盘、碟、碗等应处于竖立的位置；纤维织物应使折叠的方向与水平面成垂直状态；玻璃瓶等应开口向下或应使折叠的方向与水平面成垂直状态；玻璃瓶等应开口向下或侧放以利蒸汽进入和空气排出；侧放以

36、利蒸汽进入和空气排出；n n6)6)启闭式筛孔容器，应将筛孔的盖打开。启闭式筛孔容器，应将筛孔的盖打开。灭菌处理n n1)蒸汽的质量是影响灭菌效果的主要因素，其质量应该符合要求，国外一般采用去离子水作为蒸汽的水源。必须安装气水分离器，灭菌过程中蒸汽的饱和度合格；n n2)灭菌操作程序应按压力蒸汽灭菌器生产厂家的操作使用说明书的规定进行；灭菌一般包括排气、灭菌、干燥等过程。n n3)灭菌物品需冷却后再从搁架上取下。压力蒸汽灭菌所需时间121下排气132预真空132脉动真空硬物(裸露)1544硬物(包裹)2044织物包3044灭菌后处理n n检查包装的完整性，若有破损不可作为无菌物品使用；检查包装

37、的完整性，若有破损不可作为无菌物品使用；n n湿包和有明显水渍的包不作为无菌包使用；启闭式容器，检湿包和有明显水渍的包不作为无菌包使用；启闭式容器，检查筛孔是否已关闭；查筛孔是否已关闭；n n每批灭菌处理完成后，应按流水号登册，记录灭菌物品包的每批灭菌处理完成后，应按流水号登册，记录灭菌物品包的种类、数量、灭菌温度、作用时间和灭菌日期与操作者等。有种类、数量、灭菌温度、作用时间和灭菌日期与操作者等。有温度，时间记录装置的，应将记录纸归档备查；温度，时间记录装置的，应将记录纸归档备查；n n合格的灭菌物品，应标明灭菌日期，合格标志；合格的灭菌物品，应标明灭菌日期，合格标志；n n灭菌后的物品，应

38、放入洁净区的柜橱灭菌后的物品，应放入洁净区的柜橱(或架子上，推车内或架子上，推车内)；柜橱或架子应由不易吸潮、表面光洁的材料制成，表面再涂以柜橱或架子应由不易吸潮、表面光洁的材料制成，表面再涂以不易剥蚀脱落的涂料，使之易于清洁和消毒；不易剥蚀脱落的涂料，使之易于清洁和消毒；n n储存的有效期受包装材料、封口的严密性、灭菌条件、储存储存的有效期受包装材料、封口的严密性、灭菌条件、储存环境等诸多因素影响。对于棉布包装材料、牛皮纸和开启式容环境等诸多因素影响。对于棉布包装材料、牛皮纸和开启式容器，建议温度在器，建议温度在2525以下时保存以下时保存7 71414天，潮湿多雨季节应缩天，潮湿多雨季节应

39、缩短天数。对于一次性无纺布、一次性包装纸和纸塑包装材料，短天数。对于一次性无纺布、一次性包装纸和纸塑包装材料，其有效期为一年以上。其有效期为一年以上。灭菌过程的监测n n实时监测：应该对灭菌锅内、套层内和蒸汽输送管道内的实时监测：应该对灭菌锅内、套层内和蒸汽输送管道内的温度、压力等因素进行实时监测。应该对灭菌各步骤的时温度、压力等因素进行实时监测。应该对灭菌各步骤的时间进行记录。间进行记录。n n化学指示卡化学指示卡(管管)监测方法：将既能指示蒸汽温度，又能指监测方法：将既能指示蒸汽温度，又能指示温度持续时间的化学指示管示温度持续时间的化学指示管(卡卡)放入物品包中央，经放入物品包中央，经一个

40、灭菌周期后，取出指示管一个灭菌周期后，取出指示管(卡卡)，根据其颜色及性状的，根据其颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条件。医院常用改变判断是否达到灭菌条件。医院常用n n生物监测法：生物监测法：将内涵式压力蒸汽灭菌监测管置于试验包将内涵式压力蒸汽灭菌监测管置于试验包中心部位。经一个灭菌周期后，取出挤破管中的培养基，中心部位。经一个灭菌周期后，取出挤破管中的培养基，经经 56 5611培养至说明书规定时间，观察培养基颜色变培养至说明书规定时间，观察培养基颜色变化。检测时设阴性对照和阳性对照。医院常用化。检测时设阴性对照和阳性对照。医院常用压力蒸汽灭菌效果的监测压力蒸汽灭菌效果的监测n n物理监测

41、法物理监测法 n n化学监测法化学监测法n n生物监测法生物监测法 n n B-D 试验试验 n nPCDn n快速压力蒸汽灭菌质量的监测快速压力蒸汽灭菌质量的监测物理监测法物理监测法 连续监测每次灭菌时的：温度 压力 时间化学监测法化学监测法n n包外灭菌化学指示物：放在灭菌包外，用于指示每一包物品是否经过了灭菌处理。n n包内灭菌化学指示物：放在灭菌包内，用于指示包内物品是否灭菌处理合格。生物监测法生物监测法n n采用嗜热脂肪杆菌芽胞对灭菌器的灭菌效果质量采用嗜热脂肪杆菌芽胞对灭菌器的灭菌效果质量进行生物监测，生物监测包放在排气口的上方，进行生物监测，生物监测包放在排气口的上方，并设阳性对

42、照。并设阳性对照。n n采用新的包装材料和方法进行灭菌时也应进行生采用新的包装材料和方法进行灭菌时也应进行生物监测。物监测。n n新安装的设备和大修后设备应该进行生物监测，新安装的设备和大修后设备应该进行生物监测，监测方法应符合监测方法应符合GB 18278-2000 GB 18278-2000 的有关要求。的有关要求。n n生物监测不合格时，应立即连续重做两遍试验，生物监测不合格时，应立即连续重做两遍试验，如均合格，只需分析前次不合格的原因，如仍有如均合格，只需分析前次不合格的原因，如仍有不合格，则需追溯召回上次监测合格以来的所有不合格，则需追溯召回上次监测合格以来的所有灭菌物品。灭菌物品。

43、B-D 试验试验n n预真空压力蒸汽灭菌器应每日开始灭菌运行前进行B-D测试，B-D测试合格后方可使用。B-D测试失败，应及时查找原因进行改进。n n新安装和大修后的设备应该进行B-D试验并重复3次，合格后方可使用。PCD装置 对灭菌过程有一定抵抗力的模拟装置。其内部可放置化学或生物指示物，用于灭菌物品的批量监测、B-D测试、腔体器材的灭菌监测等。1、对灭菌物品进行批量监测。2、代替一些结构复杂不易放置包内灭菌化学指示物的器材，在装置中放置化学指示物和生物指示物指示其灭菌效果。对某卫生单位小型压力蒸汽灭菌器的调查结果1.一般情况 该机构共有该机构共有5454个微生个微生物实验室，小型压力物实验

44、室，小型压力蒸汽灭菌器蒸汽灭菌器7171台。台。灭菌灭菌器类器类型型数量数量 灭菌器产地灭菌器产地 国产国产 进口进口预真预真空式空式 11 11 0 0 11 11下排下排气式气式 60 60 36 36 24 24总计总计 71 71 36 36 35 352.灭菌参数2.1 灭菌温度 灭菌温度灭菌温度 （）使用此温使用此温 度的灭菌度的灭菌 器数量器数量 灭菌器数量灭菌器数量 合格率合格率 （）（）实测值与实测值与设定值差设定值差别小于别小于1 1 实测值与实测值与设定值差设定值差别大于或别大于或等于等于11 115 115 1 1 0 0 1 1 0 0 121 121 67 67 4

45、3 43 24 24 64.18 64.18 126 126 1 1 0 0 1 1 0 0 127 127 2 2 0 0 2 2 0 0 总计总计 71 71 43 43 28 28 60.56 60.562.2 灭菌时间灭菌时间灭菌时间 （minmin）使用此时使用此时 间的灭菌间的灭菌 器数量器数量 灭菌器数量灭菌器数量 合格率合格率 （）（）实测值与设定实测值与设定值差别小于值差别小于 1min 1min 实测值与设定实测值与设定值差别大于或值差别大于或等于等于1min1min 15 15 4 4 3 3 1 1 75 75 20 20 33 33 20 20 13 13 60.61

46、 60.61 25 25 1 1 1 1 0 0 100 100 30 30 30 30 25 25 5 5 83.33 83.33 35 35 1 1 1 1 0 0 100 100 45 45 1 1 0 0 1 1 0 0 120 120 1 1 1 1 0 0 100 100 总计总计 71 71 51 51 20 20 71.83 71.83 2.3 化学指示卡检测：所有化学指示卡监测结果均合格。所有化学指示卡监测结果均合格。2.4 生物指示剂检测：所有生物指示卡监测结果均合格。3.压力蒸汽灭菌器排气的生物安全性 调查发现，在BSL-3实验室处理废物的压力蒸汽灭菌器排气口处装有气体过

47、滤装置，表明BSL-3实验室的压力蒸汽灭菌器的排气安全问题基本得到解决。但除BSL-3实验室外的其他微生物实验室大多直接将灭菌循环中的气体排入室内环境中。4.实验室消毒灭菌程序的有效性 调查表明33.3%实验室会根据灭菌物品的不同调整灭菌程序，33.3%实验室因为灭菌物品复杂和实验微生物的抵抗力较强等原因，将消毒灭菌时间设置得较长，温度设置得较高，保证了实验室的生物安全。但33.3%实验室确定灭菌程序的依据不足，有3个实验室将处理废物的灭菌程序定为121、15min，存在隐患。5.灭菌效果的监测能力 调查表明80的实验室在灭菌时使用化学指示卡（包内卡）、化学指示胶带监测灭菌过程，并在灭菌完成后

48、进行详细记录；但没有使用生物指示剂来监测灭菌效果。五、实验室废物的处理相关法规n n中华人民共和国传染病防治法n n中华人民共和国固体废物污染环境防治法n n医疗废物管理条例n n医疗废物管理行政处罚办法n n医疗卫生机构医疗废物管理办法n n医疗废物分类目录n n医疗废物专用包装物、容器标准和警示标识规定定义 医疗卫生机构在医疗、预防、保健以及其他相关活动中产生的具有直接或者间接感染性、毒性以及其他危害性的废物。管理职责n n法定代表人为第一责任人，有专门的部门或专（兼）职人员管理；n n制定规章制度、工作流程和要求；n n培训相关人员；n n落实人员防护措施；n n做好记录；n n有应急预

49、案，发生事故时及时报告。医疗废物的处理可以包括预处理、分类收集、内部运送、暂存、外部运送、存放、集中处置等环节。预处理n n对含病原体的培养基、标本和菌毒种保存液等高危险废物，应首先在产生地点进行压力蒸汽灭菌或者化学消毒处理，然后按感染性废物收集处理。n n进入城市污水系统的废水应达到排放标准。分类收集 医疗废物应根据医疗废物分类目录分别收集。放入容器中的感染性废物不得重新取出。医疗废物产生地点应有分类收集方法的文字说明和示意图。分类n n感染性废物：感染性废物：感染性废物：感染性废物：携带病原微生物具有引发感染性疾携带病原微生物具有引发感染性疾病传播危险的医疗废物。病传播危险的医疗废物。n

50、n病理性废物：病理性废物：病理性废物：病理性废物：诊疗过程中产生的人体废弃物和医诊疗过程中产生的人体废弃物和医学实验动物尸体等。学实验动物尸体等。n n损伤性废物损伤性废物损伤性废物损伤性废物 ：能够刺伤或者割伤人体的废弃的医：能够刺伤或者割伤人体的废弃的医用锐器。用锐器。n n药物性废物：药物性废物：药物性废物：药物性废物：过期、淘汰、变质或者被污染的废过期、淘汰、变质或者被污染的废弃的药品。弃的药品。n n化学性废物：化学性废物：化学性废物：化学性废物：具有毒性、腐蚀性、易燃易爆性的具有毒性、腐蚀性、易燃易爆性的废弃的化学物品。废弃的化学物品。n n其他：废弃的麻醉、精神、放射性、毒性药品