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1、实验十三卵磷脂的提取及其组成鉴定 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望二、基本原理卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中,蛋黄中含量较高,约8。可根据它溶于乙醇、氯仿而不溶于丙酮的性质,从蛋黄中分离得到。卵磷脂可在碱性溶液中加热水解,得到甘油、脂肪酸、磷酸和胆碱,可从水解液中检查出这些组分。其分离提取的流程如下:卵磷脂彻底水解的产物是什么?完全水解HO CHCH2OHCH2OHR1COOHR2COOH+CH2CH2N(CH3)3HOOHPOHOOHOH甘油脂肪
2、酸磷酸胆碱答:答:三、仪器和药品仪器:研钵 布氏漏斗 蒸发皿 棉花药品:熟鸡蛋黄 20NaOH溶液 10Pb(AC)2 1CuSO4溶液 硫酸 95乙醇 氯仿 丙酮 碘化铋钾溶液 四、实验步骤 1卵磷脂的提取 (1)取熟鸡蛋蛋黄一只,于研钵中研细,先加入10ml 95乙醇研磨,再加入10ml 95乙醇充分研磨,减压过滤(应盖满漏斗),布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后,移入研钵中,再加10ml 95乙醇研磨,减压过滤,滤干后,合并二次滤液,如浑浊可再过滤一次,将澄清滤液移入蒸发皿内。(2)将蒸发皿置于沸水浴上蒸去乙醇至干,得到黄色油状物。(3)冷却后,加入5ml氯仿,搅拌使油状物完全溶解。(4)
3、在搅拌下慢慢加入15ml丙酮,即有卵磷脂析出,搅动使其尽量析出(溶液倒入回收瓶内)。2卵磷脂的水解及其组成鉴定(1)水解:)水解:取一支干燥大试管,加入提取的一半量的卵磷脂,并加入5ml 20氢氧化钠溶液,放入沸水浴中加热10分钟,并用玻棒加以搅拌,使卵磷脂水解,冷却后,在玻璃漏斗中用棉花过滤。滤液供下面检查用。(2)检查)检查脂肪酸的检查:取棉花上沉淀(滤饼)少许,加1滴20氢氧化钠溶液与5ml水,用玻棒搅拌使其溶解,在玻璃漏斗中用棉花过滤得澄清液,以硝酸酸化后加入10醋酸铅2滴,观察溶液的变化甘油的检查:取试管一支,加入1硫酸铜溶液1ml(二十滴),2滴20氢氧化钠溶液,振摇,有氢氧化铜沉
4、淀生成,再加入1ml水解液振摇,观察所得结果。胆碱的检查:取水解液1ml,滴加硫酸使其酸化(以pH试纸试之)加入1滴克劳特试剂(碘化铋钾溶液),有砖红色沉淀生成。注释1.第一次减压过滤,因刚析出的醇中不溶物很细以及有少许水份,滤出物浑浊,放置后继续有沉淀析出,需合并滤液后,以原布氏 漏 斗(不换滤纸)反复滤清。2.蒸去乙醇时,可能最后有少许水份,需搅动加速蒸发,务使蒸干。3.黄色油状物干后,蒸发皿壁上沾的油状物一定要使其溶于氯仿中,否则会带入杂质。4.搅动时,析出的卵磷脂可粘附于玻棒上,成团状。5.加热时,会促使胆碱分解,产生三甲胺的臭味。6.加硝酸酸化,脂肪酸析出,溶液变浑浊,加醋酸铅有脂肪
5、酸铅盐生成,浑浊进一步增强。7.生成的氢氧化铜沉淀因水解液中的甘油与之反应,生成甘油铜,沉淀逐步溶解。8.克劳特试剂为含有KIBiI3复盐的有色溶液,与含氮碱性化合物如胆碱生成砖红色的沉淀。思考题:思考题:1蛋黄中分离卵磷脂根据什么原理?2卵磷脂可以皂化,从结构分析应作 何解释?3卵磷脂可作乳化剂,这是为什么?4为什么实验中要进行减压过滤?操作时应注意哪些地方?R1-COO-CH2R2-COO-CH CH2 OPOR OHO12 *3R1 常为饱和脂肪酸如C16,C18R2 常为不饱和脂肪酸如花生四烯酸R=CH2CH2-N(CH3)3 OH为:卵磷脂卵磷脂+-+-HO-CH2CH2-N(CH3)3 OH 胆 碱 Question 5 卵卵磷磷脂脂彻底水解的产物是什么?CO2-CH2CO2-CH CH2O-P-O-CH2CH2-N(CH3)3 OO+H OH-由于甘油磷脂分子中磷酸部分还有一个可以电离的H+,而胆碱或胆胺部分又有碱性基团,故甘油磷脂以偶极离子的形式存在。非极性端疏水端,亲油端 磷脂分子中同时具有疏水基疏水基和亲水基亲水基。正是由于这种特点,使得磷脂类化合物在细胞中起着重要的生理作用。-极性端疏油端,亲水端H-OH