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1、 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院实验二平板培养测数法ppt课件 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院一 实验目的了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放线菌、霉菌、酵母菌的菌落特征。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院二 实验原理 稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个
2、菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院三 实验材料1活材料：菜园土。2培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏号培养基、马铃薯培养基3器
3、材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院四 实验步骤 1 1样品稀释液的制备样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类
4、推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（如图）。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院测定土壤细菌数量时，采用测定土壤细菌数量时，采用10104 4、10105 5、10106 6稀释度，测定放线菌数量时，稀释度，测定放线菌数量时，采用采用10103 3、10104 4、10105 5稀释度，测定稀释度，测定真菌数量时，采用真菌数量时，采用10102 2、10103 3、10104 4稀释度。稀释度。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院2 2、平板接种培养、平板接种培养
5、 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。种方法。（1 1）混合平板培养法）混合平板培养法将无菌平板编上10-4、10-5、10-6号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-6稀释液各1ml放入编号10-6的3个平板中，同法吸取10-5稀释液各lml放入编号10-5的3个平板中，再吸取10-4稀释液各lml放入编号10-4的3个平板中（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45-50的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出菌落后即可计数。
6、福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 涂抹平板计数法涂抹平板计数法 涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.2mL菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上，每个编号设三个重复。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上2030min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至菌落长出后即
7、可计数。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院 3 计数（下次实验）培养48h后取出培养平板，根据统计的菌落数，计算出同一稀释度3个平板上的菌落平均数，按下列公式计算：每毫升样品中菌落形成单位数（CFU）=同一稀释度3次重复的平均菌落数稀释倍数5 细菌细菌32-37，真菌真菌22-28，放线菌放线菌28-37 福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院将实验结果填入下表中计算结果时，常按下列标准从接种后的3个稀释度中选择一个合适的稀释度，求出每克菌剂中的含菌数。（1）同一稀释度各个重复的菌数相差不太悬殊。（2）细菌、放线菌、酵母菌以每皿30-300个菌落为宜，霉菌以每皿10-100个菌落为宜。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院五 注意事项1、吸样量准确：无论是吸取菌液，还是将菌液吸入平板均要准确；2、混合均匀：在进行连续稀释时要将菌液充分混匀后再吸取稀释液；3、更换吸管：每个稀释度要更换一支吸管，不能用1支吸管进行一系列稀释；4、涂布均匀：菌落分散方能获得有效计数的结果。福建农林大学生命科学学院福建农林大学生命科学学院六 思考题1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45左右才能倒平板？2、要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？为什么？